Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Подсчет клеток в камере Горяева -- какую формулу используете Вы? --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 08.02.2010 18:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?


Спасибо заранее.
Участник оффлайн! Statin
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.02.2010 18:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Какая разница, что подсчитывать, в камере Горяева подсчитывается в количестве (в штуках) в единице объема, т.е. концентрацию.
Формула зависит от концентрации клеток. Если концентрация средняя (1-15 млн/мл) удобно использовать следующую формулу: А*5* разбавление*10000 (размерность млн клеток в мл), где А - количество клеток в 5, 16-ти иссчерченных квадратах по диагонали. Есть формулы для меньшего и большего количества клеток.
Участник оффлайн! Headman
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 02:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

(ветеринар @ 08.02.2010 16:15)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.



Я считаю количество клеток в 4-х больших квадратах, состоящих из 16 маленьких. Полученное число делю на 4, чтобы узнать среднее. Далее среднее делю на 100 и получаю миллионы в мл.

На том увеличении, на котором видны эукариотические клетки, микроконидии и бактериальные клетки не будут видны тем более без специального окрашивания.
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 03:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

До этого момента я считал по методике из какой-то старенькой методичке по культуре клеток.

Считаю 4 ряда (камера в целом: 15х15 рядов). Среднее арифметическое умножаю на 15 и на 1111 (забыл что это) и на разбавление красителем.


Попутно еще вопрос: не сталкивались ли Вы с тем, что после 15 минут нахождения клеток в камере увеличивается количество окрашенных клеток? Я подумал, что требуется какая-то инкубация с красителем, но вновь зарядив камеру ТОЙ ЖЕ пробой вновь наблюдал подобное.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): vbn111
Участник оффлайн! Nameless
Постоянный участник
CA



 прочитанное сообщение 09.02.2010 10:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Совсем разленились.
http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/hemacytometer.htm

Среднее арифметическое по четырём большим квадратам умножаем на разведение и на 10^4.

Количество окрашенных клеток увеличивается потому, что они умирают от инкубации при комнатной температуре, в обычной атмосфере и в растворе красителя.
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 10:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Nameless @ 09.02.2010 11:00)
Ссылка на исходное сообщение  Совсем разленились.
http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/hemacytometer.htm

Среднее арифметическое по четырём большим квадратам умножаем на разведение и на 10^4.

Количество окрашенных клеток увеличивается потому, что они умирают от инкубации при комнатной температуре, в обычной атмосфере и в растворе красителя.



По поводу пробы: смешал - посчитал - одно количество окрашенных клеток; проходит 20 минут - это число увеличивается. Беру из той же пробы (т.е. 20 минут шла инкубация с красителем) опять на подсчет: картина повторяется - вначале меньше - потом больше
Участник оффлайн! Statin
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 12:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

А что "краситель"? С трипанкой такое не должно быть, если только ее не бухнули сверх нормы в раз 10.

Сообщение было отредактировано Statin - 09.02.2010 12:49
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 14:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

трипановый синий, готовый раствор 0,4% Fluka
Участник оффлайн! LBI




 прочитанное сообщение 09.02.2010 16:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Попробуйте развести до 0,1%, у нас такой пользуются
Участник оффлайн! Statin
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 17:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Мы 0,1% раствор использовали с разведением в 2 раза, 0,4% с разведением в 4 или 8 раз. Еще как-то купили трипанку, она была подозрительного яркого синего цвета, красила все клетки вне зависимости живые они или мертвые (что туда добавили, не знаю). А в общем 20 мин держать в камере это.......... Готовьте смесь с краской непосредственно перед тем как поместить в камеру Горяева.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 18:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(ветеринар @ 08.02.2010 16:15)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.


по первому вопросу: читайте интсрукцию к камере.
по второму: можно, если их там видно. я считаю иногда. но крайне неудобно, так как при увеличении, при котором видно бактерий (пусть и подкрашенных), ГРИП объектива в несколько раз меньше толщины слоя между стеклами. поэтому приходится постоянно крутить микровинт, что не прибавляет точности подсчету. кроме того, если бактерии находятся в плоскости, далекой от поверхности камеры, линии расплываются и трудно понять находится она в квадрате или за его пределами.
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 20:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(Statin @ 09.02.2010 18:27)
Ссылка на исходное сообщение  Мы 0,1% раствор использовали с разведением в 2 раза, 0,4% с разведением в 4 или 8 раз. Еще как-то купили трипанку, она была подозрительного яркого синего цвета, красила все клетки вне зависимости живые они или мертвые (что туда добавили, не знаю). А в общем 20 мин держать в камере это.......... Готовьте смесь с краской непосредственно перед тем как поместить в камеру Горяева.

Дело в том, что считаю проб 16 в в нескольких камерах, соответственно уходит время, кто-то попросил показать, взял уже обсчитанную камеру и наткнулся на описанный выше результат. насчет разведения трипанового - обязательно попробую (честно говоря, был уверен, что он готов к использованию, т.е. 0,1% - ошибся).
Как-то на форуме встречал мнение, что в определенный период деления клетки (живые) могут окрашиваться из-за повышенной проницаемости мембраны. Уже представил, как это мнение разорвут на клочки.
Еще: буквально сегодня уловил такой момент: считал суспензионные клетки, плохо разбил их перед внесением в камеру и увидел, что мертвые клетки встречаются в составе конгломератов живых, т.е. на конгломерат клеток на 8-10 живых приходится одна - мертвая. раньше подобного не наблюдалось, т.е. мертвые всегда были обособлены от живых и вообще критерием жизнеспособности клеток было наличие конгломератов, а с увеличением длительности культивирования (суток 6-7) возрастало количество одиночных и мертвых. Завтра если попадется подобное - сфотографирую и на Ваш, уважаемые, суд.
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 20:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Честно говоря, я даже не знаю, что такое большие квадраты. Посыпаю голову пеплом мертвых клеток, но все-таки надеюсь, что это связано с различием в камере Горяева и гемацитометре.... Нет, не связано?
Ладно, завтра фотографию выложу, умные люди, может, ткнут носом в большой и малый.
Спасибо.
Участник оффлайн! ветеринар
Участник



 прочитанное сообщение 09.02.2010 21:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=112204

Другое дело, а то ленивы обзывают...
Участник оффлайн! Danse
Участник
BELARUS, Gomel



 прочитанное сообщение 13.09.2010 16:37     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Все описания хороши, только если знаешь кто большой квадрат, а кто - малый smile.gif

придётся измерять и расчитывать smile.gif

http://www.laboratorium.dp.ua/item/57
http://www.ksu.ru/nilkto/cell/rasdel3/r3_p5.html
Участник оффлайн! vbn111




 прочитанное сообщение 28.03.2016 19:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(Headman @ 09.02.2010 03:03)
Ссылка на исходное сообщение  Я считаю количество клеток в 4-х больших квадратах, состоящих из 16 маленьких. Полученное число делю на 4, чтобы узнать среднее. Далее среднее делю на 100 и получаю миллионы в мл.

На том увеличении, на котором видны эукариотические клетки, микроконидии и бактериальные клетки не будут видны тем более без специального окрашивания.
Участник оффлайн! vbn111




 прочитанное сообщение 28.03.2016 19:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

А зачем на 4 делить, чтобы узнать среднее?
Участник оффлайн! vbn111




 прочитанное сообщение 28.03.2016 19:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование
Вопрос
Подскажите, если подсчет клеток проводить в 4 наборах из 16 маленьких квадратов, то зачем делить на 4, чтобы узнать среднее количество клеток в 1 мм^2???
Участник оффлайн! Alex333




 прочитанное сообщение 04.02.2020 13:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(Headman @ 09.02.2010 03:03)
Ссылка на исходное сообщение  Я считаю количество клеток в 4-х больших квадратах, состоящих из 16 маленьких. Полученное число делю на 4, чтобы узнать среднее. Далее среднее делю на 100 и получаю миллионы в мл.

На том увеличении, на котором видны эукариотические клетки, микроконидии и бактериальные клетки не будут видны тем более без специального окрашивания.



к сожалению многие из "очень опытных" "ученых" с 30-и и более летним стажем делают ошибки которые не позволительны и студенту,

Это не верный способ считать ФЭ - ошибка в 25 раз.!
Участник оффлайн! Alex333




 прочитанное сообщение 04.02.2020 13:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(Statin @ 08.02.2010 19:26)
Ссылка на исходное сообщение  Какая разница, что подсчитывать, в камере Горяева подсчитывается в количестве (в штуках) в единице объема, т.е. концентрацию.
Формула зависит от концентрации клеток. Если концентрация средняя (1-15 млн/мл) удобно использовать следующую формулу: А*5* разбавление*10000 (размерность млн клеток в мл), где А - количество клеток в 5, 16-ти иссчерченных квадратах по диагонали. Есть формулы для меньшего и большего количества клеток.



это верный способ
Участник оффлайн! Alex333




 прочитанное сообщение 04.02.2020 13:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

(ветеринар @ 09.02.2010 04:17)
Ссылка на исходное сообщение  До этого момента я считал по методике из какой-то старенькой методичке по культуре клеток.

Считаю 4 ряда (камера в целом: 15х15 рядов). Среднее арифметическое умножаю на 15 и на 1111 (забыл что это) и на разбавление красителем.
Попутно еще вопрос: не сталкивались ли Вы с тем, что после 15 минут нахождения клеток в камере увеличивается количество окрашенных клеток? Я подумал, что требуется какая-то инкубация с красителем, но вновь зарядив камеру ТОЙ ЖЕ пробой вновь наблюдал подобное.



тоже ВЕРНЫЙ способ
Участник оффлайн! Alex333




 прочитанное сообщение 04.02.2020 13:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

(ветеринар @ 08.02.2010 19:15)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте,

У меня простой вопрос: по какой методике и формуле вы подсчитываете концентрацию клеток?

И еще: можно ли использовать камеру Горяева для подсчета микроконидий и бактериальных клеток?
Спасибо заранее.



Камера Горяева. Практическое применение

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 21.10.21 05:38
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft