Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* бесфенольные методы очистки нуклеиновых кислот
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Кураторы темы:* genseq
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 14:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #51 множественное цитирование

Объем рынка выделения НК измеряется в литрах? А объем рынка автомобилей не в килограммах случайно измеряется?

А спорю я с тем, что фенол применим в потоковой лабе. Абсолютно неприменим. И даже не из-за плохой автоматизации, банально после первого же откручивания центрифуга пахнет неделю. Может у кого-то с рецепторами просто обонятельными того - ангидридом отшибло уксусным в детстве?

Кстати, а с чем проблема с FFPE образцами и ДНК? Кто-то еще реально выделяет фенолом? Остались такие динозавры? А зачем?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 14:25     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #52 множественное цитирование

(genseq @ 25.05.2018 10:52)
Ссылка на исходное сообщение  ПДК для фенола в воде - 1 мг на кубометр.


ПДК - это вещь административно-бюрократическая и с токсикологией на прямую может быть не связана.

Я уже писал выше.
Получается что в парэнтеральном препарате инсулина концентрация метакрезола в 3000000 раз выше чем ПДК фенола.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 14:47     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #53 множественное цитирование

А спорю я с тем, что фенол применим в потоковой лабе.

А что это такое "потоковая лаба"?

Абсолютно неприменим.  После первого же откручивания центрифуга пахнет неделю.

Это смертельно убойный аргумент!

А у меня не пахнет вообще. smile.gif А иногда при случайной косорукости пахнет, ну, пол часика, от силы час, тонким таким запахом гуаши. shuffle.gif

Кстати, у меня есть несколько знакомых, которых прет от этого запаха. Видимо он будоражит вспоминания о детстве и занятиях в художественном кружке или школе. jump.gif

Но у меня есть и куча других знакомых, которых бесит любой запах, включая запах ацетона, меркаптоэтанола, аминные запахи, бутанола и изоамилового спирта, уксусной кислоты, табака, перегара. Любые из них могут их бесить настолько, что буквально парализуют и они становятся не способны вести какую-либо целесообразную деятельность. frown.gif

Может вы просто относитесь к этой группе людей, тогда я вас понимаю. weep.gif redface.gif

Кстати, криминалисты используют только этот метод, когда речь идет о вещьдоках, а не о мазках крови и букальном эпителии. umnik.gif

Интересно, криминалистическая лаборатория - это "потоковая лаборатория"? mol.gif

Слушайте может мы поговорим не о том какой фенол плохой/хороший.
А конкретно о составах и протоколах бесфенольных методов. Об их преимуществах и недостатках.
А то вон кроме статьи, которую привел генсек никаких пруфов.

Тоскааа! frown.gif
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 15:22     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #54 множественное цитирование

Там где образцы выделяют не от гранта к гранту по три с половиной штуки, а каждый день постоянным потоком (от десятков).

Теканы у криминалистов видел - они на них фенолом выделяют? Если правильно помню цифру лаборатории следкома - у них 70 тысяч образцов в год. Жаль, не спросил чем, но что-то очень сильные сомнения меня берут насчет фенола на все это количество. Прям очень.

Дело не в запахе, а в такой штуке, как вредные условия труда. У гистологов знаете почему такой короткий официальный рабочий день?

Сообщение было отредактировано avial - 25.05.2018 15:24

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): NMR-guy, Esya
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 15:34     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #55 множественное цитирование

Дело не в запахе, а в такой штуке, как вредные условия труда. У гистологов знаете почему такой короткий официальный рабочий день?

А у пат. анатомов? Но формалин им никто не отменил.

Теканы у криминалистов видел - они на них фенолом выделяют?

Вы заметили что я подчеркнул - если пробы беруться с вещдока.

А теканы у них для тканей организма(за исключением костей), кто ж от них откажется. Когда надо авиакатастрофу типировать.
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 16:04     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #56 множественное цитирование

Ну то есть, мы опять говорим не о серийных вещах, а о каких-то специальных случаях? И снова приходим к тому, что фенол имеет смысл применять только лишь при очень специфических требованиях к выделению? И эти требования уже давно не массовые?

Получается, формалином травиться нельзя, а фенолом можно?
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 25.05.2018 16:15     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #57 множественное цитирование

Чего Вы с ними спорите, они понятия не имеют что такое "вредные условия труда" для государственного работодателя. Тот скорее водой будет выделять с этанольным осаждением тоталку, чем допустит льготы, молоко или двойной отпуск для сотрудников... И РУшки фенольным протоколам не видать как своих ушей.

При этом, самое забавное, в поле многие нормальные полевики предпочитают работать стабилизированными фенолхлороформными смесями, если что-то требуется совсем экстраординарное и загадочное и нельзя позволить себе ничего терять. А все "безопасные" киты идут лесом...
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 16:29     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #58 множественное цитирование

(avial @ 25.05.2018 17:04)
Получается, формалином травиться нельзя, а фенолом можно?

Получается как раз наоборот, формалином можно, а фенолом нельзя.

Т.е. формалин используют в работе в производстве, имеют за это префернции по занятости и используют СИЗ. А пользоваться фенолом надо запретить вообще, всегда везде, до никогда. Присвоить ему статус социально опасного химического оружия и вообще за производство и использование привлекать к уголовной ответственности.
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 25.05.2018 16:35     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #59 множественное цитирование

(genseq @ 25.05.2018 07:52)
ПДК для фенола в воде - ... ПДК для хлороформа в воде - ...

И чо? Можно подумать пятимолярный гуанидин, используемый почти во всех бесфенольных методах выделения ДНК - вещь приятная во всех отношениях. Какая там у гуанидин цианата ПДК в воде? А также по токсичности данные огласите пожалуйста.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 17:29     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #60 множественное цитирование

Фенол
Токсодоза пероральная LD50(мыши) 270мг/кг, (крысы)300- 530мг/кг, кожа 680мг/кг(кролик)

ГТЦ
Токсодоза пероральная LD50(крысы) 280мг/кг, кожа 1100мг/кг

гуанидин гидрохлорид
Токсодоза пероральная LD50(крысы) 470мг/кг (мыши) 570мг/кг , кожа(кролик) 2000мг/кг

формальдегид
Токсодоза пероральная LD50(крысы) 100-300мг/кг

мета-крезол(гомолог фенола)
Токсодоза пероральная LD50(крысы) 240мг/кг, кожа 1100мг/кг
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 17:41     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #61 множественное цитирование

(avial @ 25.05.2018 17:04)
 Ну то есть, мы опять говорим не о серийных вещах.


В криминалистике "серийные вещи" - исключение, а не серийные вещьдоки - правило, даже в случае серийных преступлений. shuffle.gif frown.gif
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 17:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #62 множественное цитирование

Так вот о том и речь - можно фенол, можно, но условия труда сразу же другие. И как правильно написали - молоко, отпуска, сокращенный день и т.д. Кому оно надо?
Вот поэтому его удел - очень специфические случаи. Ну или если научному сотруднику запах нравится - кто ж ему запретит токсикоманить.

То есть, у следкома 70 тысяч анализов в год все же фенолом?

Сообщение было отредактировано avial - 25.05.2018 17:49
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 18:19     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #63 множественное цитирование

--То есть, у следкома 70 тысяч анализов в год все же фенолом?
Сморя че и это не одна лаба, я полагаю.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 19:53     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #64 множественное цитирование

Да, ни хрена, они не другие как выяснится. 100 проб по 200мкл фенола (к примеру) - это 20 мл общего фенола. Запускаете в процесс лаборанта, вызываете охрану труда делаете эти 100 проб в течении дня(на самом деле это не получиться не весь день) и пусть они пробы воздуха берут, а потом анализируют и напишут вам потом паспорт рабочего места. Если специально на пол и на пробозабор не лить фенол, то вам вряд ли удастся аттестовать рабочее место как вредное по классу опасности 3.1, а если при этом еще и вытяжкой пользоваться то только 2 класс, а по нему никаких льгот нет frown.gif. А класс 3.1, в принципе по, другим параметрам уже есть у работника "потоковой лабы" из-за контакта с патогенами, УФО и тп.

Порог запаха фенола как раз соответствует ПДК(это значит что на границе ощущения запаха вы еще в зоне допустимых концентраций не приносящих вред)

Сообщение было отредактировано MMM - 25.05.2018 21:19
Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 23:18     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #65 множественное цитирование

Это одна лаба на вавилова.

То есть, вы реально предлагаете вместо использования нормальной безопасной методики вызывать анализ проб воздуха, оплачивать аттестацию, оформлять бумаги - и все это ради потрясающей возможности выделять именно фенолом?
Еще раз задам вопрос, который остался без ответа - зачем? Зачем в гамаке и в лыжах? Про FFPE мне так никто и не ответил почему-то.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.05.2018 23:39     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #66 множественное цитирование

Да, блин, я пытаюсь достучать до вас, что вся эта катастрофическая токсичность фенола - высосанный из пальца сферический слон в вакууме.
Да, ручками сотни проб выделять фенолом тяжелее и ошибок может быть больше пока персонал не натаскается.
Но если вы возьмете тот же силк и будете его обрабатывать ручками(а не роботом), то по времени затраты те же и вероятность ошибки та же.

А теперь представим, что у вас есть автомат, который работает с фенолом. Какая вам будет разница что там внутрях у автомата? Лишь бы машина все делала за вас.

А почему нет автомата, работающего на феноле?
Да потому, что эти автоматы делаете не вы, не вы составляете ТЗ на автомат. Вы идете на поводу у производителя автоматов. Не вы, а он навязывает вам свои решения. А ему проще сделать автомат, работающий на магнитных бидсах, он вам его и впаривает.

Сообщение было отредактировано MMM - 25.05.2018 23:50
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 26.05.2018 14:19     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #67 множественное цитирование

(avial @ 25.05.2018 17:48)
Ссылка на исходное сообщение  
То есть, у следкома 70 тысяч анализов в год все же фенолом?

Думаю, как и везде - больше половины (как минимум) это буккальные соскобы подсушенные, там тонны ДНК и никакой фенол не нужен. В большинстве смывов там наверняка колоночные киты с концентрацией на силике из большого объёма на матрицу. Думаю, фенолом пользуются только в десятках-сотнях случаев на эти 70 тысяч, когда нужно без повреждения доставать ДНК из угля какого-нибудь или оттуда, где есть подозрения, что ничего с материала водой-гуанидином не смыть, а повреждать и механически разрушать - низя... rolleyes.gif

(MMM @ 25.05.2018 23:39)
Ссылка на исходное сообщение  Да, блин, я пытаюсь достучать до вас, что вся эта катастрофическая токсичность фенола - высосанный из пальца сферический слон в вакууме.

Ничего подобного. Острая токсичность может и низкая, но это хороший мутаген-карциноген. Потому везде и запретили...
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.05.2018 16:50     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #68 множественное цитирование

(NMR-guy @ 26.05.2018 15:19)
Ссылка на исходное сообщение 
Ничего подобного. Острая токсичность может и низкая, но это хороший мутаген-карциноген. Потому везде и запретили...

Evidence for Carcinogenicity:
Evaluation: There is inadequate evidence in humans for the carcinogenicity of phenol. There is inadequate evidence in experimental animals for the carcinogenicity of phenol. Overall evaluation: Phenol is not classifiable as to its carcinogenicity to humans (Group 3).

https://toxnet.nlm.nih.gov/cgi-bin/sis/sear...rm+@DOCNO+113**
https://toxnet.nlm.nih.gov/cpdb/chempages/PHENOL.html

smile.gif
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 27.05.2018 17:43     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #69 множественное цитирование

Запарили уже с 70-ю тысячами образцов в год. Я работал в лабе, где объёмы были на порядок больше и не жужжу. И да, это была молекулярная лаба, и выделение ДНК/РНК было полностю автоматизировано. Не помню точно, то ли 12 то ли 14 роботов экстрагировали в три смены - день и ночь. Все последующие процессы (учёт и хранение НК, сортировка образцов, qPCR и другие анализы, снятие и обработка данных) были также максимально автоматизированы. На мой взгляд выделение ДНК/РНК - самый трудоёмкий и критичный этап процессинга биоматериалов. Если он не организован по уму, и из-за косяков ДНК не выделяется или выделяется неэффективно, то все последующие шаги лишены смысла.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.05.2018 19:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #70 множественное цитирование

(Carbon Copy @ 27.05.2018 18:43)
Ссылка на исходное сообщение  Я работал в лабе, где объёмы были на порядок больше и не жужжу. И да, это была молекулярная лаба, и выделение ДНК/РНК было полностю автоматизировано. Не помню точно, то ли 12 то ли 14 роботов экстрагировали в три смены - день и ночь. Все последующие процессы (учёт и хранение НК, сортировка образцов, qPCR и другие анализы, снятие и обработка данных) были также максимально автоматизированы.


О! А что потом делали с этими образцами? На что и какими методоми образцы анализировались? И какова была глобальная конечная цель столь массового скрининга.
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 27.05.2018 23:33     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #71 множественное цитирование

КДЛ в США. qPCR, microarray, NGS.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.05.2018 05:01     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #72 множественное цитирование

Ага! В России для КДЛ 90% проб ДНК выделяют так называемым термолизисом. Еще один технологичный бесфенольный способ выделения ДНК. При чем 2 - 4 лаборанта справляются с потоком 2-5 тыс проб в день без роботов.
smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 28.05.2018 11:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #73 множественное цитирование

(MMM @ 28.05.2018 06:01)
Ссылка на исходное сообщение  Ага! В России для КДЛ 90% проб ДНК выделяют так называемым термолизисом. Еще один технологичный бесфенольный способ выделения ДНК. При чем 2 - 4 лаборанта справляются с потоком 2-5 тыс проб в день без роботов.
smile.gif

Это близко к истине, я бы сказал... Соотношение может отличаться в зависимости от природы обрабатываемого материала.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 28.05.2018 11:11     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #74 множественное цитирование

(Carbon Copy @ 28.05.2018 00:33)
Ссылка на исходное сообщение  КДЛ в США. qPCR, microarray, NGS.

Бедного Карбоныча заездили в пендосии eek.gif Такие потоки! wall.gif Я бы застрелился. weep.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 28.05.2018 11:21     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #75 множественное цитирование

(MMM @ 25.05.2018 15:47)
Ссылка на исходное сообщение  
Но у меня есть и куча других знакомых, которых бесит любой запах, включая запах ацетона, меркаптоэтанола, аминные запахи, бутанола и изоамилового спирта, уксусной кислоты, табака, перегара. Любые из них могут их бесить настолько, что буквально парализуют и они становятся не способны вести какую-либо целесообразную деятельность.  frown.gif

Меня тоже в последнее время бесит этот изик. wink.gif
Участник оффлайн! ksm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.05.2018 11:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #76 множественное цитирование

КОЛЛЕГИ!
ДАВАЙТЕ ЗАМЕНИМ ВЫРАЖЕНИЕ изоамиловый спирт на 2-метил-бутанол-4 или изобутилкарбинол wall.gif
Еся, ставьте мне цветочек! shuffle.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Esya
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 30.05.2018 10:11     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #77 множественное цитирование

(MMM @ 26.05.2018 16:50)
Ссылка на исходное сообщение  Evidence for Carcinogenicity:
Evaluation: There is inadequate evidence in humans for the carcinogenicity of phenol. There is inadequate evidence in experimental animals for the carcinogenicity of phenol. Overall evaluation: Phenol is not classifiable as to its carcinogenicity to humans (Group 3).

https://toxnet.nlm.nih.gov/cgi-bin/sis/sear...rm+@DOCNO+113**
https://toxnet.nlm.nih.gov/cpdb/chempages/PHENOL.html

smile.gif

Пусть одесским ихлиндхамам это втирают, у которых "интерферон не лечит"©. "Британские учёные"...

Карциногенность фенола многократно подтверждена статистикой повышения онкологических заболеваний в районах где из-за хим-производств фенол был десятилетиями близок или выше ПДК в грунтовых водах.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 11:55     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #78 множественное цитирование

Гыыы!

Т.е. ученым, которые доказывают эффективность интерферона вы верите, до тех пор пока они не начнут доказывать отсутствие канцерогенности у фенола.

Вы конечно можете прикидываться Станиславским сколько вам будет угодно. И не верить им.

Хотя вы и не привели конкретных исследований на эту тему, в их существование я легко верю, в отличии от Станиславского.

Но!
Эта ваша статистика не о чем.

Там где из-за хим производств фенол десятилетиями был в воде основной фактор канцерогенности не фенол, а другие продукты хим. производств так же присутствующие в воде и атмосфере. Отделить мух от котлет, здесь не сможет никакая статистика.

Ну, и еще есть такая гипотеза, что если воду, содержащую фенол, в качестве загрязнителя, хлорировать с целью так сказать рутинной водоподготовки, то в ней в качестве примесей образуются уже хорошо известные и изученные как тератогены, мутагены, канцерогены и прочие яды рода человеческого ДИОКСИНЫ.

Но вы можете продолжать бояться фенола, как "novichek" - это не возбраняется. Главное, что бы это не перешло в химофобный психоз, когда фенол начнет вас преследовать повсюду из пластиковых изделий, мебели, ЛКМ и тп.

Сообщение было отредактировано MMM - 30.05.2018 11:58

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): ksm
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 17:56     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #79 множественное цитирование

Я кажется понял....
"Петрович" ака МММ он просто фенольный токсикоман....

jump.gif lol.gif

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): -Ъ-
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:17     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #80 множественное цитирование

Вот Генсек задал тред - уже 2 страницы перетирают "фенол - не фенол". Всё зависит от материала, объёмов и задач. Современные колонки ничуть не хуже "старого доброго" ф.-хл. метода. Бывает, на колонках выход поменьше, вроде как чистота похуже и храниться ДНК поменьше. Но для массового анализа "сделал-посмотрел-выкинул" вообщем нормально. Но в этом случае можно и солью выделять: вообще "дёшево и сердито". И запахов нехороших нет, вытяжкой не надо гудеть и пальцы никто не обожжёт. А вот для микрообразцов современные микроколонки и вовсе отличная вещь! Вот цена, конечно, да - расстраивает.
А вот насчёт "приятности" от фенола - не согласен. Всёж его ко 2 классу опасности не зря отнесли. Хотя тут есть личности, кто и в бр.эт. чуть ли не купается и под УФ-стерилизатором загорает...
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 18:45     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #81 множественное цитирование

(dk @ 30.05.2018 19:17)
Ссылка на исходное сообщение
А вот насчёт "приятности" от фенола - не согласен. Всёж его ко 2 классу опасности не зря отнесли.


О какой такой приятности тут может идти речь? Вот давайте поговорим о приятности синильной кислоты ведь ее запах так похож на многим приятный запах амаретто. А запах фосгена сродни джусифрут. smile.gif

Фенол ко второму классу по ПДК идет. А ПДК у него низкий, по выше означенной причине: в сочетании с хлором дает диоксины. По токсодозе он третий класс, как и ГТЦ.

А вообще я давно уже говорил, что давайте обсудим тот или иной метод без фенола с его достоинствами и недостатками и тонкостями. Так нет же все сводится к рассуждениям типа у фенола нет будущего, потому что он архаичная токсичная бяка.

Да, фенол не вода! А что есть лаборатории свободные от веществ 2 и 3 го класса опасности? Про фенол уже сказано он хорош тем, что универсален и часто работает там где все остальное не работает. Т.е. по истине широчайших возможностей. А из недостатков у него запах и более трудная автоматизируемость.
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 19:38     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #82 множественное цитирование

Поддерживаю предыдущих ораторов. Правда, эту "бесфенольную" тему затеял не я, но давно хотел обсудить простейшие варианты выделения ДНК/РНК для ПЦР. Причём исключительно в собственных шкурных интересах. wink.gif

Дело в том, что в ходе совершенствования технологии получения силикатного магносорбента (магнитного силикагеля) наступил кризис перепроизводства. Объёмы сорбента измеряются уже литрами, а по достоинству его оценили только тонкие ценители магнитных технологий, потребности которых измеряются миллилитрами. Да и запредельно низкая цена их особо не волнует. А те, кого это волнует, нуждаются не в сорбенте, а в укомплектованных им наборах для пробоподготовки. И эти наборы тоже должны быть запредельно дешёвыми. поскольку без жесткого демпинга пробиться на этот сектор рынка практически невозможно. Так что наборы должны включать только самые дешёвые компоненты. Причём очень стабильные и желательно сухие. Чтобы в инструкции для пользователей самой сложной операцией было добавление воды до метки на флаконе. umnik.gif

Буду признателен за любые вопросы, замечания и предложения. shuffle.gif
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 20:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #83 множественное цитирование

Это к Ъ. Типа схема такая.
Для ДНК
1)Лизирующий буфер ну скажем 6М Гуанидинхлорид на трисе и ЭДТА
Лизируем откручиваем супер наносим на частички.
2)Промываем частички тем же лиз буфером
3)Промываем 70%спиртом
4)Элюируем 0,1мМ ЭДТА при 50гС

Для РНК и и разных размеров хитрости в промывках - это пусть Ъ рассказывает.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 30.05.2018 21:47     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #84 множественное цитирование

(MMM @ 30.05.2018 11:55)
Ссылка на исходное сообщение  Гыыы!
в отличии от Станиславского.

Статистика - не моя, а тех, кто, в отличие от "британских учоных" заботился, чтобы подвластный народ не мер от рака как мухи. Сейчас ситуация немного другая - главное деньги так или иначе отнять, а помрет ли человек или выживет - дело второе. Так что той старой статистике и методам ее получения, а главное - изменениям в ней к лучшему после наложение запрета на выбросы его со сточными водами (снижением ПДК до следовых), я верю. А прохиндеям из в прошлом великой Британии - нет. Пусть своих граждан обманывают сколько влезет и тех, кто им верит. Пусть поят их фенолом и лечат с карболкой, доказывают там, что он безвредный - это их граждане, и они заслуживают свою власть и выделенческие киты. А мы - свою. wink.gif И я Вас умоляю, не ссылайтесь на ихние политические басни, оформленные в виде исследований. После слова "британский" всё равно нужно перепроверять, там почти всё сейчас лажа идёт, с практических точек зрения.

Если уж что и разрешать - так это химически чистый этанол для ДНК-работ, как реагент. Без него сложнее живется на изопропаноле-ХЧ, чем без фенола.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 07:50     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #85 множественное цитирование

(NMR-guy @ 30.05.2018 22:47)
Ссылка на исходное сообщение  Статистика - не моя, а тех, кто, в отличие от "британских учоных" заботился, чтобы подвластный народ не мер от рака как мухи.


Где это вы таких заботливых нашли. ТОгда все эпидемиологические данные по заболеваемости были ДСП, а по онкологии секретными, а по лучевой онкологии сов секретными. Зачем спрашивается секретили, если заботились? И так заботились, что могли ядерные испытания на людях проверять. И так заботились что всех инакомыслящих сгоняли сотнями тысяч на рытье каналов и в урановые штольни за тюремную баланду. Очень таки заботились о здоровье подвластного народа.

ПДК фенола кстати сейчас такая же низкая, несмотря на изменившиеся времена. И если че, в ящик можно "пожаловаться" на заботу о народе.
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 31.05.2018 08:35     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #86 множественное цитирование

Поддерживаю Генсека! Давайте оставим фенол в покое и подумаем над магнитосорбентами. Предложенный МММ протокол - очень привлекательный! Я сам магнитосорбены "не пробовал", но очень бы хотелось потестировать. Метод кажется достаточно простым и, вроде как, эффективным? Может быть коллективный разум породит достаточно юзабельный протокол под Генсековские частицы? Конечно, для правильной коммерции надо выпускать наборы "всё в одном" и "просто добавь воды". Но для начала подойдёт и вариант МММ, если указать концентрации, сколько чего наносить, сколько инкубировать. Ещё не забыть про магнитные штативы от Генсека! Идеально - создать инструкцию step-by-step. Такой вариант уже любой интересующийся пользователь сможет опробовать и для себя решить стоит ли переходить на "магниты".

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): genseq
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 31.05.2018 11:39     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #87 множественное цитирование

(MMM @ 30.05.2018 21:48)
Ссылка на исходное сообщение  Это к Ъ. Типа схема такая.
Для ДНК
1)Лизирующий буфер ну скажем 6М Гуанидинхлорид на трисе и ЭДТА
Лизируем откручиваем супер наносим на частички.
2)Промываем частички тем же лиз буфером
3)Промываем 70%спиртом
4)Элюируем 0,1мМ ЭДТА при 50гС

Для РНК и  и разных размеров хитрости в промывках - это пусть Ъ рассказывает.

Скоро будет 30 лет (со времен Bio 101, аксакалы-пенсионеры помнят) с тех пор как я произвожу эти киты, а Вы "пусть Ъ рассказывает", ФигВам no.gif Начинал работу с этой ссылки:
Vogelstein B, Gillespie D. Preparative and analytical purification of DNA from agarose. Proc Natl Acad Sci U S A. 1979 Feb;76(2):615–619
А после появления статьи Boom-а в мире начался Бум smile.gif - на основе патента Бума родился Qiagen umnik.gif и куча модификаций метода кому не лень. Протокол Бума сейчас красуется даже в википедии, оказывается:
https://en.wikipedia.org/wiki/Boom_method
Киты с магнитными шариками делаю, соответственно, тоже давно - намагниченная силика существовала уже, была давно в лабораториях, возможно еще в 80-х, но использовалась не для выделения ДНК.
Попробовав все продажные магн. шарики, в том числе Dynal и Promega, понял, что для своих растворов нужно делать свои родные. На этом форуме рассказывал и про них тоже, очень давно. Если Генсек даже про это не помнит, то тогда это ... сами понимаете. wink.gif
Генсек много шумит, носится с этими шариками, но они такие разные shuffle.gif боюсь связываться eek.gif , пардон. Америка давно открыта, нужно только повторить и все! Но идей у Генсека до осени еще много-много. smile.gif
А рассказывать, чего рассказывать, смысл confused.gif , где лежат ключи от квартиры?
Киты простые, доступные, народные можно сказать, всегда в наличии - весь рассказ от Ъ. smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 31.05.2018 11:46     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #88 множественное цитирование

(Tom1 @ 30.05.2018 18:56)
Ссылка на исходное сообщение  Я кажется понял....
"Петрович" ака МММ он просто фенольный токсикоман....
jump.gif  lol.gif

Нюхач он. yes.gif
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 14:27     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #89 множественное цитирование

(-Ъ- @ 31.05.2018 09:39)
Ссылка на исходное сообщение  
Генсек много шумит, носится с этими шариками, но они такие разные  shuffle.gif боюсь связываться eek.gif , пардон.


Ты ещё бабушку вспомни! Правда, ещё пару лет назад шарики, действительно, были разные. Но кто старое помянет, тому глаз вон! mad.gif

Сейчас шарики вполне одинаковые. Сорбционная ёмкость, которая в былые времена со временем снижалась, сейчас выведена на максимум. И благодаря твоим советам (и не только) хорошо сохраняется. А с начала этого года они совершенно перестали окисляться, поскольку я наловчился окислять магнетит до маггемита без образования гидроксида железа. И вместо чёрных они стали тёмно-коричневыми. Средний диаметр немного колеблется (1,5...2,5 мкм), но всё меньше и меньше. Если хорошо прицелиться, то и колебание размеров можно уменьшить. Как-то раз, например, прицелился на диаметр 1,5 мкм. Думал, что хоть немного промахнусь, но попал с точностью до нанометра! Это практически невозможно, но Наносайзер врать не станет. Он железный. smile.gif

Сообщение было отредактировано genseq - 31.05.2018 14:36

Картинки:
картинка: 1500_nm.JPG
1500_nm.JPG — (22.69к)   

Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 16:22     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #90 множественное цитирование

(-Ъ- @ 31.05.2018 01:46)
Ссылка на исходное сообщение  Нюхач он. yes.gif


Бинго !!!!!!
он в соседней темке предлагает горячий уксус нюхать....
)))))
Участник оффлайн! Carbon Copy
Постоянный участник
So close no matter how far



 прочитанное сообщение 31.05.2018 18:04     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #91 множественное цитирование

Смешно читать про "сектор рынка" выделения ДНК в России. Пара лаб в Москве - это не рынок. Единственным спасением для genseq-а была бы госпрограмма по генетической паспортизации населения, но это скорее из области ненаучной фантастики. Другой вариант - продаться существующим фирмам, выпускающим реагенты и машины для выделения НК, но, без патентной защиты они скорее всего прихватизируют все ноу-хау и пустят genseq-а по миру.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 31.05.2018 18:40     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #92 множественное цитирование

К паспортизации его на пушечный выстрел не пустят, там всё поделено между 2 поставщиками, и киты там не на коленке делаются. Третьему из пендостана влезть не удалось (да, и такое бывает).
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.06.2018 10:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #93 множественное цитирование

Тему коммерциализации нужно обсуждать отдельно. И не здесь. Что касается вариантов выделения ДНК/РНК, то описаны уже не только бесфенольные, но и безгуанидиновые. Например, в методе TENS-CO геномная ДНК из листьев отлично выделяется при помощи SDS и спиртового осаждения:

скачать файл DNA__SDS_2017.pdf
размер: 1.96мб
кол-во скачиваний: 143



Лизирующий буфер (TENS) включает Трис (100 мМ, pH 8,0), ЭДТА (50 мМ, pH 8,0), NaCl (500 мМ), SDS (1%) и бета-меркаптоэтанол (2%). Ещё используется КAc (5 М) и NaAc (3М, pH 5,2), смесь хлороформа с октанолом (24:1) и этанол.

1. Листья (0,15 г) гомогенизируют на вибромельнице (Precellys 24, 5000 rpm, 20 сек.) в 2 мл пробирке (винтовая крышка) с парой стальных шариков (4,5 мм).
2. В пробирки добавляют по 1,25 мл экстракционного буфера (TENS), перемешивают на вортексе, инкубируют гомогенат 30 мин. при 65 град. и центрифугируют (10000 g, 10 мин.).
3. Переносят супернатант (1,3 мл) в другую пробирку и добавляют 0,4 объёма (520 мкл) 5 М KAc. Перемешивают вручную, выдерживают на льду 20 мин и центрифугируют (10000 g, 15 мин, 4 град).
4. Супернатант (1,4 мл) переносят в новую пробирку, добавляют 0,5 объёма (700 мкл) смеси хлороформ:октанол (24:1), перемешивают 15 мин. на роторной мешалке и центрифугируют (13000 g, 15 мин.).
5. Отбирают водную фазу (1,2 мл), добавляют 66 мкг РНКазы (6,6 мкл, 10 мг/мл) и инкубируют 1 час при 37 град.
6. Осаждают ДНК спиртом - добавляют 0,1 объём 3 М NaAc (pH 5,3), 2 объёма холодного этанола (100%), выдерживают 1 час на -20 град. и центрифугируют (12000 g, 15 мин., 4 град.).
7. Промывают осадок 70% этанолом, подсушивают и растворяют в 200...400 мкл воды.

Эту методика может служит основой и для менее сложных вариантов выделения. Например, китайцы и турки предлагают для дезинтеграции вместо специальных шариков использовать обычный кварцевый песок, который разрушает и споры гельминтов, и особо прочные стенки грамположительных бактерий, и микобактерии. Ещё было бы неплохо заменить вонючий бета-меркаптоэтанол (препятствует окислению растительных фенолов) на невонючий аптечный ацетилцистеин (АЦЦ), который уже повадились использовать при выделении ДНК для ПЦР-диагностики туберкулёза. Если пробы не очень сильно загажены липидами, то можно убрать и хлороформную экстракцию. Хотя для работы с пробами, содержащими патогены её лучше оставить (для пущей стерильности). А если РНК не мешает, то не нужна и РНКазная обработка. Но если нужна именно РНК, то от ДНК избавиться не сложно (см. метод RNASwift):

скачать файл RNASwift_nwokeoji2016.pdf
размер: 1.06мб
кол-во скачиваний: 120




Но самое главное - устранить центрифугирование при осаждении ДНК. Её быстрее и проще концентрировать и промывать при помощи магносорбента. Тем более, что это позволяет устранить стадию спиртового осаждения. При высокой ионной силе и низкой pH хемосорбция силикатами ДНК/РНК идёт и без хаотропов (гуанидина).

Сообщение было отредактировано genseq - 02.06.2018 10:12
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.06.2018 12:00     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #94 множественное цитирование

genseq! А вы пробовали осаждать ДНК на силку в 1% SDS? Все хорошо получается?
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 02.06.2018 12:57     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #95 множественное цитирование

А что там у нас при низкой рН и высокой ионной силе идёт с самой ДНК, а? shuffle.gif
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.06.2018 13:41     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #96 множественное цитирование

(MMM @ 02.06.2018 10:00)
Ссылка на исходное сообщение  genseq! А вы пробовали осаждать ДНК на силку в 1% SDS? Все хорошо получается?


Не пробовал. Но вопрос, конечно, интересный. rolleyes.gif

Спиртом, причём изопропиловым, ДНК на карбоксилированые частицы осаждают в серии наборов компании Life Tech:
картинка: MagJet.JPG
Осаждение ДНК ПЭГом - это классика, работающая как на карбоксилированных, так и на силикатных частицах. Видел как-то публикацию, в которой использовали осаждение ДНК спиртом на магнитную силику в слабощелочных условиях, когда силика работает только как соосадитель (без хемосорбции). А вот осаждать спиртом из 1% SDS в голову почему-то не приходило. Так что спасибо за идею. Хотя с SDS лучше попробовать хемосорбцию. Или поискать этот вариант в литературе. Наверняка кто-нибудь это уже проверял. beer.gif

В методах TENS-CO (1% SDS) и RNASwift (4% SDS) SDS удаляют высаливанием - добавляют KAc до 2 М, и выпавший в осадок SDS удаляют центрифугированием. И только после этого осаждают ДНК/РНК спиртом. umnik.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 04.06.2018 13:05     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #97 множественное цитирование

(genseq @ 31.05.2018 15:27)
Ссылка на исходное сообщение  Ты ещё бабушку вспомни! Правда, ещё пару лет назад шарики, действительно, были разные. Но кто старое помянет, тому глаз вон! mad.gif

Шарики одинаковых размеров - это не достижение и, к тому же, они у тебя критично мелкие.
Я тебе уже сто раз говорил, что 1-2 мкм-размеры шариков годятся только для выделения НК из образцов с очень низким содержанием НК (плазмы, сыворотки крови, очистка кортких ПЦР продуктов и т.д.), а в остальных случаях с избытком ДНК твои супероднородные 1-2 мкм шарики моментально слипаются и в и итоге - грязная ДНК и очень большие потери. Больше не буду повторять! mad.gif
Оптимальные универсальные размеры - 5-25 мкм, а мельче - для спец. эффектов. smile.gif
И вообще, ты все очень медленно делаешь. С шариками возишься уже 10 лет, а химией под них ? - confused.gif жизни не хватит.
И статьи какие-то левые выкладываешь.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 04.06.2018 13:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #98 множественное цитирование

(Carbon Copy @ 31.05.2018 19:04)
Ссылка на исходное сообщение  Смешно читать про "сектор рынка" выделения ДНК в России. Пара лаб в Москве - это не рынок. Единственным спасением для genseq-а была бы госпрограмма по генетической паспортизации населения, но это скорее из области ненаучной фантастики. Другой вариант - продаться существующим фирмам, выпускающим реагенты и машины для выделения НК, но, без патентной защиты они скорее всего прихватизируют все ноу-хау и пустят genseq-а по миру.

Ну-ну, Вам из оклахомщины виднее.
Коров, кобыл, хрюшек паспортизируем, а людей... eek.gif
Участник оффлайн! genseq
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.06.2018 12:51     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #99 множественное цитирование

(-Ъ- @ 04.06.2018 11:05)
Ссылка на исходное сообщение  Шарики одинаковых размеров - это не достижение и, к тому же, они у тебя критично мелкие.
Я тебе уже сто раз говорил, что 1-2 мкм-размеры шариков годятся только для выделения НК из образцов с очень низким содержанием НК (плазмы, сыворотки крови, очистка кортких ПЦР продуктов и т.д.), а в остальных случаях с избытком ДНК твои супероднородные 1-2 мкм шарики моментально слипаются и в и итоге - грязная ДНК и очень большие потери. Больше не буду повторять! mad.gif
Оптимальные универсальные размеры - 5-25 мкм, а мельче - для спец. эффектов. smile.gif
И вообще, ты все очень медленно делаешь. С шариками возишься уже 10 лет, а химией под них ? -  confused.gif жизни не хватит.
И статьи какие-то левые выкладываешь.


Мелкие шарики (<1 мкм) действительно плохо ресуспендируются. Но если они крупнее 1,5 мкм, то проблем не бывает. Особенно при отсутствии более мелких и крупных примесей. Я ориентируюсь на средний диаметр 1,5...2,5 мкм, с узким распределением размеров. Что касается фракции 5...25 мкм, то её образуется довольно много, но я считаю это отходами производства. Если хочешь, то при ближайшем замесе эти отходы выбрасывать не стану и отдам тебе. Естественно, бесплатно. beer.gif

Что касается моей неторопливости, то разработкой магносорбентов я занимаюсь для отдыха, в свободное от мозговой работы время. И если эта разработка совсем завершится, то придётся отдыхать как-то по другому. А я ещё не решил, чем ещё стоит заняться. wink.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 17:49     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 04:20
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft