molbiol.ru -> как почистить РНК

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* как почистить РНК

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

vasopressin

07.06.2003 18:57

URL #1

Дорогие друзья, помогите кривым, хромым и малограмотным: выделена тотальная РНК, с нее ставится обратная транскрипция, а затем ПЦР. Выясняется, что в препаратах РНК присутствует большое количество геномной ДНК, которая сильно портит жизнь. Как от нее избавиться?

Только ли ДНКаза РНКаза<sup>-</sup> или есть другие способы? Если да, то чью ДНКазу вы посоветуете и адресок где достать в Москве.

РНК мало, растворена она в водичке и лишний раз ее гонять жалко.

Надеюсь на вас, дорогие друзья.

07.06.2003 19:12

URL #2

ДНКазой порезать можно, Амбион хорошую делает. Можно еще изолировать мРНК, тоже отчасти может помочь. Ну и вообще чтоб было меньше проблем с ДНК пользуйте классический протокол Хомчински и Саччи (всякие Тризолы ДНК оставляют), кислый фенол и осаждайте РНК с хлористым литием.

[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]

mesentsev
Постоянный участник

07.06.2003 19:15

URL #3

Доставайте амбионовскую ДНКазу- самый тупой и топорный путь, и главное, что работает.

viridis
Постоянный участник

07.06.2003 19:30

URL #4

В Москве можно купить недорогую и хорошую ДНКазу от fermentas, если нет возможности купить амбионовскую.

yahont
Постоянный участник

07.06.2003 22:23

URL #5

Если вам из cDNA что-то конкретное нужно, можно с ПЦРом поиграть:
1. программку оптимизировать так, чтобы более длинный полимер (= genomic DNA с интронами) амплифицировался хуже, или в идeале совсем не a.
2. Один из праймеров должен отжигаться частью в одном екзоне, другой частью в другом. (Если вы это для real-time RT-PCR затеяли, то подругому лучше и не пробовать)

[ 08.06.2003, 16:58: Сообщение отредактировано: yahont ]

vasopressin

08.06.2003 20:42

URL #6

Дорогие друзья, спасибо за ваши советы. С ПЦРом не пропрет, выхода нет, будем искать ДНКазу. А где Ферментас в Москве живет, в ГосНИИГенетике?

Еще раз всем вам спасибо!

petr
Постоянный участник

08.06.2003 20:45

URL #7

Да, там, и стоит не дорого, и неплохая.

petr
Постоянный участник

08.06.2003 20:46

URL #8

тел. 315-00-65

vasopressin

08.06.2003 20:57

URL #9

Спасибо!

(Неужели Каменский?)

Olegovitch
Постоянный участник
Cantabrigia, Anglia Oriens

09.06.2003 03:00

URL #10

Не всё то Каменский, что Пётр, поверьте... Кстати, пользуясь случаем, прилюдно передаю огромную благодарность вышеозначенному Петру и чаровнице ИБре за волшебное времяпровождение в городе-герое Штхааасбурге

petr
Постоянный участник

09.06.2003 09:52

URL #11

не, не я не Каменский

vasopressin

09.06.2003 20:55

URL #12

Как сказал бы Каменский: "в Шшшштрахсбурге". Это даже хорошо, что вы не Каменский. А за помощь - спасибо, ДНКаза у них есть, причем по каким-то смешным ценам, надо брать.

09.06.2003 23:09

URL #13

Можно осадить 50% этанолом с солью. 6М LiCl тоже, по-моему, лучше осаждает РНК, чем ДНК. Впрочем, я не уверен, что это позволит полностью избавиться от ДНК, но соотношение сдвинет. Только, если Вы используете коосадитель, не пугайтесь, когда в литие он исчезнет. В ПЦР в качестве одного праймера можно использовать поли-Т, потом сделать нестед. Можно вообще сначала сделать амплифицированную библиотеку кДНК, а с неё уже писиарить.

petermoz
Участник

09.06.2003 23:24

URL #14

Автор - Olegovitch:

Падонак

А если по делу, то полгода, как-то проведенные в эртэпэцээрах, показали мне, что лучше всего сначала отлитийхлорить ночку, потом отдээнказить, и уж потом пэцээрить с соответствующими контрольями.

nbul
Участник
Шеффилд, Великобритания

10.06.2003 09:00

URL #15

Не видила еще ни одной ДНКазы, которая бы за одно не РНКазила. (может мне просто не повезло). Так что всегда делали в соответствии с Yahont+<ИК>

petr
Постоянный участник

10.06.2003 09:33

URL #16

Дык, елы-палы, А RNAsin на что?

10.06.2003 10:34

URL #17

Meet RQ1 DNase от Промеги. Не РНКазит.

petr
Постоянный участник

10.06.2003 12:36

URL #18

Дорага

11.06.2003 02:37

URL #19

Давно пора тебе завести в лабе ICQ.

vadimchik152a
Постоянный участник

02.10.2022 19:09

URL #20

Тем не менее стоит отметить так же, что сложившаяся структура организации в значительной степени обусловливает создание идей по выходу из сложившейся ситуации. https://www.paintingwithjane.com/profile/grualert/profile

Ufa1688
Постоянный участник

03.10.2022 19:32

URL #21

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.

vadimchik152a
Постоянный участник

20.02.2023 00:57

URL #22

Повседневная практика показывает, что дальнейшее развитие различных форм деятельности создает все необходимые предпосылки для утверждения форм воздействия. https://habeshalink.com/author/aleksej19c/

vadimchik152a
Постоянный участник

05.03.2023 11:08

URL #23

Равным образом общая концепция сложившегося положения создает все необходимые предпосылки для утверждения направлений прогрессивного развития. https://www.montessorijobsuk.co.uk/author/vadim13u/

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.