molbiol.ru -> подскажите....

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* подскажите....

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

mirt

15.01.2006 21:44

URL #1

Коллеги!!! Я собираюсь получать фракцию тромбоцитов путем гель-фильтрации через сефарозу, может кто подскажет, когда , через сколько времени она появляется и сколько продолжается. Заранее спасибо.

Guest
IP-штамп: frkM0/MHHgnTA
гость

16.01.2006 00:26

URL #2

Даша!
Праздники закончились!
Кто это Вам посоветовал?

AVP
Постоянный участник
New Jersey

16.01.2006 07:58

URL #3

(Guest @ 15.01.2006 16:26)

Даша!
Праздники закончились!
Кто это Вам посоветовал?

может быть какой то поисковик...

например...
Am J Pathol. 1976 Jul;84(1):11-24. Related Articles, Links
Gel-filtered human platelets. Ultrastructure, function, and role of proteins in inhibition of aggregation by aspirin.
Fine KM, Ashbrook PC, Brigden LP, Maldonado JE, Didishelm P.

etc.

Сообщение было отредактировано AVP - 16.01.2006 08:02

Mac-1
Постоянный участник
оттуда

16.01.2006 08:36

URL #4

Тромбоциты обычно моют не на Сефарозе, а на Сефадексе Г-25 (иногда смесь Г-25 и Г-50).
Это - стандартная методика приготовления мытых тромбоцитов, о фильтрации их через Сефаросу я не слыхал, но думаю что разница не принципиальна, разве что вы избавляетесь не только от кальция, а заодно и от многих других белков плазмы.
Выходят они со свободным обьемом, (примерно 1/3 обьема колонки), и имеют примерно такой же обьем, какой вы наносите.

Референций есть - масса, вот например:
http://www.bloodjournal.org/cgi/content/full/97/4/929
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.f...l=pubmed_docsum

Guest
IP-штамп: frkM0/MHHgnTA
гость

16.01.2006 09:47

URL #5

(Mac-1 @ 16.01.2006 07:36)

......[/url]

Ну вот это другое дело, а то гель -фильрация тромбоцитов....
Речь идет об очистке от белков и другого плазиы.
Получение (выделение, очистка) тромбоцитов из цельной крови, это несколько иной, предварительный этап пере Сефадексами.

Mac-1
Постоянный участник
оттуда

16.01.2006 10:31

URL #6

Гость, не судите строго!
Мирт просто неправильно сформулировала свою просьбу - она хочет выделять "мытые тромбоциты" ("washed platelets") именно гель-фильтрацией, но тот, кто работал с тромбоцитами, поймет, что она хочет.
Сейчас есть еще и какие-то более продвинутые методы, позволяющие обойтись без колонок, даже в индустриальных масштабах (мытые тромбоциты используют в медицине для трансфузии при лейкемии, - так с них антигены АБО и даже Резус, кажется, с них смывают - не знаю точно..) - но я не в курсе их, когда мне нужны тромбоциты, так их "по-старинке" гоню через Сефадекс, чтоб убрать кальций и мембранно-связанные через него белки, вроде Фактора вон Виллебрандта, протромбина итп, которые могут проактивировать тромбоциты.

гость: m
IP-штамп: frmqVJjPYfvF2
гость

16.01.2006 11:02

URL #7

Большое спасибо тем, кто откликнулся. В методике сказано, что колонку надо предварительно уравновесить буфером. Что это значит? Буфер пропустить через Сефарозу перед богатой плазмой?

Mac-1
Постоянный участник
оттуда

16.01.2006 20:07

URL #8

"Уравновесить колонку буфером" - это значит заменить всю жидкость в колонке на нужный буфер.
Это - обязательная операция и после упаковки новой колонки, и перед каждым экспериментом.

После упаковки и перед каждым нанесением тромбоцитов пропустите через колонку сперва 3-4 обьема колонки раствора Тироде - тогда ваши тромбоциты после элюции будут находится именно в нем. Только я вам советую, перед нанесением добавлять и в богатую плазму, и в Тироде еще и немного Апиразы (Apyrase) - тогда у вас будет больше гарантии, что тромбоциты не проактивируется.

mirt

20.01.2006 20:14

URL #9

подскажите, сколько времени надо размачивать сефарозу в воде перед заполнением колонки, сколько сефарозу можно использовать и как ее восстанавливать. Спасибо.

Mac-1
Постоянный участник
оттуда

21.01.2006 09:32

URL #10

Сефарозу для гель-фильтрации не нужно размачивать - она всегда продается уже набухшей, в виде суспензии в 20% этаноле (обычно), т.к. после подсыхания ее можно только выбросить, или, при бедности, расплавить для использования в эл.форезе. Набухают (размачивают) только Сефадексы, которые как правило, продаются сухими.
Просто приготовьте колонку - я для Сефадекса использовал 4 Х 25 см, а вам какую нужно я не знаю - посмотрите графики селективности Сефарозы и посчитайте какой длины вам нужна будет колонка, чтобы избавится от белка от которого вы хотите избавится - я не знаю ваш эксперимент и от чего вы хотите чистить. Больше сказать не могу, т.к. я уже писал, что первый раз слышу об использовании Сефарозы для таких целей. Обычно Сефадекса Г-25 за глаза хватает.
В принципе, вы говорили, что собираетесь использовать 2% агарозу (2в - это 2% агарозы), поэтому, скорее всего вам может подойти колонка где-то в 50-60 см, она отделит абсолютное большинство белков.
Колонку можно использовать много раз если будете работать аккуратно - не дадите ей подсыхать, не напустите туда воздуха, будете удалять верхний слой, если он заметно для глаз загрязнится, итд итп. Сколько раз - сказать трудно, т.к. больше всего (на 95%) это зависит от вашей собственной аккуратности, а также (на 5%) от той плазмы, которую будете использовать.
Восстанавливать Сефарозу не нужно - после использования колонку достаточно уравновесить заново, т.е. пропустить 3-4 обьема буфера (Тироде) - см. выше.
Когда не пользуетесь ею, храните ее или в 20% спирте или в 0.05% азиде (уравновесить ими).

Удачи!

Guest
IP-штамп: frkM0/MHHgnTA
гость

21.01.2006 17:24

URL #11

(Mac-1 @ 16.01.2006 09:31)

to Mac-1: - не строго, я с юмором. А Вам спасибо за инфу, очень полезная!

Поблагодарили (1): Mac-1

vadimchik152a
Постоянный участник

02.10.2022 19:09

URL #12

Товарищи, дальнейшее развитие различных форм деятельности требует определения и уточнения направлений прогрессивного развития. https://www.touteslescouleurs.fr/profile/grualert/profile

Ufa1688
Постоянный участник

03.10.2022 19:32

URL #13

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.

vadimchik152a
Постоянный участник

26.02.2023 13:32

URL #14

Не следует, однако, забывать, что общая концепция сложившегося положения обеспечивает широкому кругу (специалистов) участие в формировании идей по выходу из сложившейся ситуации. https://store232.com/class/index.php/author/tolik88i/

vadimchik152a
Постоянный участник

05.03.2023 13:51

URL #15

The folded structure of organization allows equal character to execute important tasks on development and analysis of necessary data for permission of situation on the whole. https://www.traditionalanimation.com/author/valik13u/

vadimchik152a
Постоянный участник

08.03.2023 15:07

URL #16

Does not follow, however, to forget that general conception of the folded position creates all necessary pre-conditions in order to ratify the positions occupied by participants in regard to the put tasks. https://docs.google.com/document/d/1jvdmQcf...il4GG4cu54/edit

vadimchik152a
Постоянный участник

18.03.2023 18:23

URL #17

Does not follow, however, to forget that motion in this direction creates all necessary pre-conditions in order to ratify system of mass participation. http://www.costaricajobsearch.com/author/oleg49y/

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.