Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
watchesbiz | Отправлен 23.11.2021 14:55 |
zie | Отправлен 28.09.2017 09:59 |
Спасибо за совет))) | |
Eiz | Отправлен 27.09.2017 10:46 |
(zie @ 26.09.2017 16:46) Зея вы не моглибы открыть отдельный форум по паспортизации картошки гином картошки сиквинировал Костик Скрябин я думаю это к ниму |
|
Eiz | Отправлен 27.09.2017 10:37 |
(zie @ 26.09.2017 16:46) неа |
|
zie | Отправлен 26.09.2017 15:46 |
(dk @ 25.09.2017 14:59) Форелей, знаю, паспортизировали по микросателлитам. У лошадей, слышал, делали рестриктные карты Д-петли. Но, думаю, должны быть какие-то указания МСХ что и как делать. Но вот RAPD, как мне кажется, навряд ли подойдёт - как раз из-за низкой повторяемости результатов. Если только что ISSR, но и там с повторяемостью беда. в остальном - микросы только у "эталонов" Вам на капиллярнике прогонять придётся для точной идентификации бэндов, а массовый анализ на длинной вертикалке в ПААГ - прекрасно видно. Рестриктные карты вообще можно дома на кухне строить. Но для начала - посмотрите точные рекомендации для с/х растений, а то все эти паспорта да сертификаты зело бюрократичная весч. Спасибо большое!!! Неужели больше никто не сталкивался с понятием папортизации?? |
|
dk | Отправлен 25.09.2017 13:59 |
Форелей, знаю, паспортизировали по микросателлитам. У лошадей, слышал, делали рестриктные карты Д-петли. Но, думаю, должны быть какие-то указания МСХ что и как делать. Но вот RAPD, как мне кажется, навряд ли подойдёт - как раз из-за низкой повторяемости результатов. Если только что ISSR, но и там с повторяемостью беда. в остальном - микросы только у "эталонов" Вам на капиллярнике прогонять придётся для точной идентификации бэндов, а массовый анализ на длинной вертикалке в ПААГ - прекрасно видно. Рестриктные карты вообще можно дома на кухне строить. Но для начала - посмотрите точные рекомендации для с/х растений, а то все эти паспорта да сертификаты зело бюрократичная весч. | |
zie | Отправлен 25.09.2017 13:25 |
Огромное спасибо за помощь. Нас интересует еще такой вопрос. На нашу организацию пришел запрос провести паспортизацию сельскохозяйственных растений. Мы с таким раньше не сталкивались, поэтому действительно ли паспортизацию можно проводить только с использованием секвенатора или есть какие-то другие методы?? Может быть с использованием RAPD или еще как-то?? | |
dk | Отправлен 25.09.2017 12:16 |
Согласен! Но всёж при "гражданском применении" не должны быть проблемы от РНК. Но я лично "на всякий пожарный" всегда лью РНКазу - мне её не жалко (хоть она, конечно, и "живая молекула"). | |
-Ъ- | Отправлен 25.09.2017 11:42 |
RAPD-дом хорошо пластик проверять на воспроизводимость, или же термоблок циклера на равномерность нагревания... и все! Почему же, и ДНК и РНК могут ингибировать Taq.pol даже в мизерных количествах, но только некоторые протяженности с уникальными последовательностями. А некоторые из них даже используются в реакциях как аптамеры для горячего старта. Древний NEB на этом сидит. |
|
dk | Отправлен 24.09.2017 11:16 |
С этим PAPD могут любые чудеса быть - такой уж метод. Сам сталкивался с тем, что просто поменяв пробирки (вместо SSI взял Axygen) можно не получить ничего. ISSR немного лучше. Имеет смысл с этими анонимными последовательностями возиться если только Вы нашли какие-то различия между образцами, чтоб потом эти полосы из геля вырезать,клонировать, сиквенировать и подобрать уже нормальные уникальные праймеры. Во всех остальных случаях полученные на PAPD результаты Вы ни в каком приличном месте даже не сможете опубликовать, к сожалению. А вот чтоб РНК ингибировала ПЦР - это сколько же её должно быть-то? После фенол-хлороформа без РНКазы, по крайней мере у рыб, на форезе в низкомолекулярной зоне адское свечение - и ничё, всё нормально ПЦРится. Но если сомневаетесь то можно "РНКазу без ДНКаз" добавить при лизисе. Стоит копейки, да и с советских времён наверняка остались (поспрашивайте у соседей) РНКаза (в больших банках у всех биохимиков валяются). Только её надо нагреть, чтоб вдруг попавшиеся ДНКазы убить. |
|
Посмотреть тему (откроется в новом окне) | |