Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
marinakom Участник |
|
Дядя ФАКСер Постоянный участник Nothern Maccaronia, Ticinum |
Если иммунологическая работа,сделали бы фенотайпинг нормальный + функциональные тесты (цитокины IC и секретируемые, пролиферацию, цикл). Цитометр под рукой есть? Почему именно аутоантитела? |
marinakom Участник |
(Дядя ФАКСер @ 16.09.2013 06:41) А что за заболевание,что за препарат и какие эстимейты? Если иммунологическая работа,сделали бы фенотайпинг нормальный + функциональные тесты (цитокины IC и секретируемые, пролиферацию, цикл). Цитометр под рукой есть? Почему именно аутоантитела? Спасибо за внимание к поднятой теме. Прежде чем ответить на вопросы, внесу толику ясности. В данном исследовании я ни коем образом не principal investigator и даже не помощник такового. Я по одному из совместительств (суровые реалии российской провинции -- нужно крутиться, но это лирическое отступление) -- сотрудник центра доказательной медицины и статистики медунивера. По долгу службы анализирую те данные, которые мне приносят в том исследовании, которые авторы запланировали. По тому же самому долгу службы имею право озвучить авторам свою точку зрения про их работу и его дизайн. Голос мой чисто совещательный. С этой кафедрой, в частности, я лет 7 сотрудничаю, вполне нормальные деловые отношения у нас. Лично свое негативное мнение о лаборатории А.Б. Полетаева Иммункулус и его IMHO немного шарлатанском подходе я им уже передала. Но ведь могу и ошибиться, поэтому и спросила на форуме. Теперь собственно ответы на вопросы (и опять же раздумья). Работа выполняется на кафедре АиГ. Работа не иммунологическая. Заболевание -- миома матки. Лечат миомэктомией либо эмболизаций маточных артерий. Согласна с Вами, что чем аутоантитела изучать (явно не они ключевую роль в росте миоматозного узла играют) лучше бы какие-нибудь факторы роста посмотреть или маркёры апоптоза или рецепторы к стероидным гормонам. В конце концов, и просто фенотипировать лимфоциты можно было б. Цитометры рядом с местом выполнения работы есть: до одного метров 500 идти, до другого с километр. Но есть одно большое НО. Государство (вуз) на исследования на этой кафедре (равно как и на многих других) деньги не выделяет. Врач-диссертант должен либо сам заплатить, либо внушить пациенту, что поисковое иммунологическое исследование ему нужно. В данном случае доктор по этическим соображениям пошла по первому пути. Почему именно аутоантитела? Могу предположить, что цена за одно исследование оказалась у Полетаева ниже, чем в более традиционной лаборатории с наборами реактивов известных производителей и более однозначной трактовкой. В любом случае, первый этап выполнен: личные деньги диссертантки вложены, около 35 человек обследованы. Анализировать данные мне, в общем-то, всё равно какие. Но вот когда дойдёт дело до содержательных интерпретаций, то вопрос более серьёзный встанет. |
guest: Ирина IP-штамп: fr4MbcymAiCcU гость |
|
Guest IP-штамп: frjSx8r9LmZ92 гость |
|
Митин Постоянный участник |
|
vb Постоянный участник |
(Guest @ 03.01.2014 08:37) а что тут отзываться? вас вот иммункулюс какой-то волнует, а мене вообще тошнит от таких диссертаций, где в качестве бантика проводят исследование, не имеющее отношение к предмету. ну были бы у вас эти аутоантитела в МЕ/мл, то что бы вам в миоме матки стало более понятно? зачем вообще это нужно? для большей наукообразности? чтобы очередной гинеколог повесил на дверь табличку "к.м.н"? это как-то повысит его профессиональный уровень? ну поищите, может у этих антител нет референс-контролей. поэтому и привязать их содержание не к чему. |
marinakom Участник |
(vb @ 03.01.2014 15:28) а что тут отзываться? вас вот иммункулюс какой-то волнует, а мене вообще тошнит от таких диссертаций, где в качестве бантика проводят исследование, не имеющее отношение к предмету. ну были бы у вас эти аутоантитела в МЕ/мл, то что бы вам в миоме матки стало более понятно? зачем вообще это нужно? для большей наукообразности? чтобы очередной гинеколог повесил на дверь табличку "к.м.н"? это как-то повысит его профессиональный уровень? ну поищите, может у этих антител нет референс-контролей. поэтому и привязать их содержание не к чему. А это уже вообще другой вопрос. И другая дискуссия. В конце концов, тему уже утвердили коллегиально ученые мужи и дамы. По большому счёту, ну почему бы диссертантке и не изучить что-то эдакое. С методологией научного поиска познакомится. Научный мир сильно не обогатит, но сама вперёд продвинется. Книжки, журнальчики умные почитает пока пишет, и сама подрастёт. Педагогическая задача -- решается. Мои вопросы и сомнения были именно в корректности методики исследования аутоАТ в упомянутой компании Иммункулюс. ИМХО стрёмно когда: 1) часть аутоАТ получаются отрицательными у каждого пациента ( авторы методики выдают результат в каком-то отклонении от среднего уровня АТ у данного человека, при этом в если сложить все эти отклонения, то ноль не получается). 2) Разные (совершенно билогически не увязываемые друг с другом) аутоАТ оказываются весьма тесно коррелированными друг с другом. Навскидку посмотрела факторным анализом: на 3-4 фактора отлично разделяются. Биологического объяснения этому не нахожу, только методическую хитрость создателей данного лабораторного подхода подозреваю. При этом, при всём моём скептическом настрое, какие-то аутоАТ ( к ХГЧ, например) оказались очень правдоподобными: были статистически значимо повышенными в одной из групп до лечении и снизились-таки почти до нормы после. Совпадение и везение? Группы не самые больше по 16-18 чел |
Полетаев Александр Борисович IP-штамп: frIlCE.vzc7U2 гость |
Для клинической иммунологии конца прошлого-начала нынешнего века были характерны парадоксы, вступавшие в противоречие с привычными взглядами врачей. Сюда можно отнести и ситуацию с естественными ауто-АТ. Начиная со времен Ehrlich и Burnet ауто-АТ ассоциировались исключительно с аутоиммунными болезнями, но в настоящее время известно, что постоянная продукция множества ауто-АТ является характерной особенностью организма любого здорового человека. С патологическими процессами сегодня связывают не наличие ауто-АТ как таковых, а стойкие аномалии в их продукции и сывороточном содержании [Полетаев, 2010]. Симптоматично, что сегодня стало привычным говорить о патологическом подъеме уровней определенных ауто-АТ как о маркерном признаке заболеваний, не относимых к когорте аутоиммунных болезней. Например, при инсультах [Poletaev et al., 2004], раке [Backes et al., 2011], инфаркте миокарда [Matzinger, 2002], осложненном течении беременности и др. [Полетаев, 2010]. Установлено, что молекулярные «сигналы опасности», поступающие от любой поврежденной ткани, индуцируют транзиторные аутоиммунные реакции, сопровождающиеся ростом содержания ауто-АТ соответствующей тканевой специфичности [Matzinger, 2002]. На наш взгляд, имеется резон рассмотреть (и переосмыслить) значимость такого рода вторичных аутоиммунных реакций, запускаемых тканевыми повреждениями. Известно, что в ходе созревания все исходные клоны Т- и В-лимфоцитов подвергаются комбинированной (негативной и позитивной) селекции. В результате чего отбраковываются любые лимфоциты, которые либо имеют слишком сильное сродство (аффинность) к каким-либо антигенам собственного организма, либо слишком слабо взаимодействуют с собственными антигенами. В результате любые (!) клоны лимфоцитов, прошедшие онтогенетический отбор, являются умеренно аутореактивными. Именно это их свойство и является основой для постоянной продукции иммунной системой ауто-АТ разной специфичности. Множество естественных ауто-АТ класса IgG и IgM, специфичных для самых разных аутоантигенов, постоянно синтезируются, секретируются и присутствуют в сыворотке крови каждого здорового. Эти данные были многократно подтверждены во многих лабораториях [Lacroix-Desmazes et al., 1998]. Даже такие, как было принято считать ранее, «исключительно патологические» ауто-АТ, как антитела к миелопероксидазе, протеиназе-3 или базальной мембране клубочков почки, присутствуют в кровотоке здоровых лиц [Cui et al., 2010]. Так же как и ауто-АТ к аутологичным антигенам группы крови ABO [Spalter et al., 1999]. Вероятно, что любые аутоантигены являются «объектами внимания» со стороны иммунной системы, что отражается в продукции к ним определенных количеств ауто-АТ. Надо ли рассматривать врожденную аутореактивность как случайный эпифеномен (к тому же потенциально опасный)? Может ли повышение продукции ауто-АТ определенной специфичности, запускаемое в ответ на тканевое повреждение, не иметь определенного функционального смысла? Сомнительно. С эволюционной точки зрения подобных биологических «бессмыслиц» не бывает. А если так, нам по необходимости приходится ставить вопрос о физиологическом предназначении ауто-АТ и роли вторичного повышения их продукции в условиях тканевых повреждений. Подчеркнем, что сывороточное содержание ауто-АТ разной специфичности может различаться весьма значительно [Полетаев, 2010]. Однако содержание ауто-АТ одной и той же антигенной специфичности весьма близко у разных здоровых взрослых лиц (не имеющих поражений органа, экспрессирующего соответствующие антигены) [Lacroix-Desmazes et al., 1998]. Напротив, сывороточное содержание ауто-АТ определенной специфичности существенно меняется при заболеваниях (патологических состояниях), сопровождающихся гибелью специализированный клеток тех или иных органов или базирующихся на этом процессе [Poletaev, Churilov, 2010]. Вероятно, вторичный подъем (индуцированный сигналами опасности) в продукции и секреции ауто-АТ, направленных к антигенам повреждаемых клеток, является не побочным эффектом, но отражает активность одной из наиболее важных функций иммунной системы: ее участие в аутоклиренсе. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРОДУКЦИИ АУТОАНТИТЕЛ КАК ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ ФЕНОМЕН Несмотря на привычное отношение к аутоиммунным феноменам как к безусловно патогенным, берущее начало еще от Эрлиховского «horror autotoxicus», отметим, что вторичная активация аутоиммунных реакций, индуцированных первичным тканевым повреждением, не имеет отношения к аутодеструктивным процессам, но связана с активацией клиренса поврежденных анатомических структур организма. Идея о клиренсовых функциях естественных ауто-АТ (реализуемых совместно с макрофагами) впервые была предположена Pierre Grabar более полувека назад [1968]. Эта идея получила дальнейшее развитие в концепции иммунохимического гомеостаза И. Е. Ковалева [1985]. В соответствии с основным положением концепции Ковалева уровни продукции естественных ауто-АТ регулируются по принципу обратных связей количеством/доступностью молекул соответствующих антигенов. В силу того что уровни экспрессии, секреции и/или поступления во внеклеточное пространство любых цитоплазматических, мембранных, ядерных и других антигенов специализированных клеток приблизительно равны у всех здоровых лиц (различия между индивидами обычно очень невелики), мало будут различаться и сывороточные уровни ауто-АТ соответствующей антигенной направленности. Однако при развитии любой патологии картина заметно меняется. Множество хронических заболеваний прямо связано с активацией гибели специализированных клеток по механизмам апоптоза или некроза либо с аномалиями в экспрессии, секреции и/или утилизации определенных молекул-антигенов. В свою очередь, стойкое повышение экстраклеточного содержания любого эндогенного антигена будет неизбежно сопровождаться количественными сдвигами в содержании ауто-АТ соответствующей специфичности [Ковалев, 1985]. Например, избыточная продукция дефектного белка — регулятора апоптоза р53, типичная для многих случаев злокачественного опухолевого роста, сопровождается вторичным повышением продукции ауто-АТ к р53 [Lubin et al.,1993]. Весьма иллюстративным является пример повышения продукции ауто-АТ по отношению к хорионическому гонадотропину человека (ХГЧ) у большинства женщин после процедуры экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). В ходе подготовки к процедуре ЭКО большинство женщин получает ХГЧ в фармакологических дозах (в виде препаратов «Прегнил», «Хорагон»). В результате у 50−60% таких женщин обнаруживается повышенная продукция ауто-АТ к ХГЧ спустя полгода и более [Полетаев, 2010; Алиева и др., 2011]. Дополнительный пример: для донозологических стадий развития и начального клинического периода инсулиннезависимого диабета II типа типична повышенная экспрессия скелетными мышцами определенных изоформ инсулиновых рецепторов. Предполагается, что этот феномен отражает своего рода компенсаторную реакцию в ответ на нарастающую функциональную недостаточность рецепторов [Haring et al., 1994]. Метафорически выражаясь, организм пытается компенсировать ухудшающееся качество рецепторов их количеством. Что ведет к вторичному повышению продукции ауто-АТ к инсулиновым рецепторам [Poletaev, Boura, 2011; Полетаев, 2013]. Характерно, что повышенная продукция ауто-АТ такой специфичности не имеет отношения к патогенезу болезни (по крайней мере, в большинстве случаев), но, в полном соответствии с концепцией Ковалева, отражает аномалии экспрессии рецепторов. Отмеченные Matzinger транзиторные повышения продукции ауто-АТ заданной антигенной специфичности, вызываемые тканевыми повреждениями любого генеза [Полетаев, 2010; Matzinger, 2002], можно рассматривать как еще одно подтверждение универсального правила Ковалева. Закономерные изменения продукции ауто-АТ, сопровождающие начальные патологические изменения в любом органе, едва ли следует относить к биологически незначимым феноменам. В соответствии с логикой функционирования живых систем любые изменения обычно стабильных физиологических и биохимических параметров (констант) происходят не спонтанно, а исключительно в связи с необходимостью в коррекции или компенсации тех или иных стрессовых ситуаций и патологических изменений в организме. Например, резкое повышение физической нагрузки сопровождается нетипичным для нормального состояния ростом артериального давления, частоты сердечных сокращений, концентрации глюкозы в крови и т.п. Подобные изменения, обеспечивающие дополнительные резервы организма для возможной борьбы или бегства, являются физиологически оправданными и закреплены эволюционно. К этой же категории изменений относится и вторичная (саногенная) активация аутоиммунных реакций. Если у пациентов, перенесших ишемический инсульт, вскоре после эпизода церебральной ишемии наблюдается выраженный рост сывороточного содержания «нейротропных» ауто-АТ класса IgG, а повышенный уровень таких ауто-АТ сохраняется в течение несколько недель (после чего возвращается к нормальному уровню), то такого рода изменения являются благоприятным прогностическим признаком. Напротив, если ишемические повреждения мозга не сопровождаются (не индуцируют в первые 1−2 суток) активацией нейротропных аутоиммунных реакций — это является неблагоприятным прогностическим признаком: значительная часть таких пациентов позднее имеет выраженные моторные и/или когнитивные нарушения или же погибает [Poletaev et al., 2004]. Вполне очевидно, что индуцированная инсультом активация продукции ауто-АТ к белкам нервных клеток (GFAP, S100, MBP и др.) направлена на повышение эффективности клиренса пораженного органа (в данном случае мозга) от продуктов тканевой деструкции и его функциональное восстановление. Повышенная продукция (и сывороточное содержание) пульмотропных ауто-АТ типич-на для пациентов с хронической пневмонией, а нормализация уровней соответствующих ауто-АТ обычно указывает на завершение патологического процесса, например под влия-нием адекватной терапии [Скурыдин и др., 2010]. Приведенные примеры можно рассматривать как иллюстрации двух главных положе-ний концепции иммунохимического гомеостаза: 1) уровень продукции определенных ауто-АТ является отражением количества доступного антигена; 2) основное предназначение естественных ауто-АТ — клиренс организма от избытка соответствующих аутоантигенов, формирующихся в ходе нормальной жизнедеятельности и при ее нарушениях [Ковалев, 1985]. Каким же образом антигенспецифичные ауто-АТ участвуют в аутоклиренсе? В литературе описаны так называемые абзимы, то есть ауто-АТ, которые обладают собственной ферментативной активностью и могут непосредственно инактивировать молекулы антигена-мишени каталитически [Полетаев, 2010]. Однако в большинстве случаев ауто-АТ участвуют в клиренсе не напрямую, а опосредованно. Они выступают в качестве опсонинов (своего рода сигнатур-аттрактантов), которые маркируют эндогенные молекулы или частицы, подлежащие поглощению и утилизации макрофагами, связываясь с соответствующими антигенами [Poletaev, Churilov, 2010]. Показано, что антитела класса IgG, специфически связывающиеся с фрагментами ДНК, формирующимися в ходе апоптоза, посредством мембранных поверхностных рецепторов поглощаются В-лимфоцитами; при этом активируется пролиферация соответствующих клонов В-лимфоцитов [Leadbetter et al., 2002]. Вероятно, те же или близкие формы пиноцитоза — поглощения антиген-антительных комплексов, опосредованные мембранными Fc-рецепторами, могут осуществляться дендритными клетками и макрофагами. Интересно, что значительное число аутоантигенов (мишеней ауто-АТ) направленно аккумулируются особыми образованиями (blebs) на поверхности клеток, подвергающихся апоптозу [Rosen et al., 1995]. С медицинской точки зрения принципиально важно разграничивать первичные (патогенные) и вторичные (адаптивные, саногенные) аутоиммунные феномены. Первичные самоподдерживающиеся аутоиммунные процессы наблюдаются редко, индуцируются вредными факторами, действующими непосредственно на клетки иммунной системы (например, лимфотропными вирусами), и являются патогенными факторами развития системных или органоспецифических аутоиммунных заболеваний. Напротив, вторичные транзиторные (физиологические) аутоиммунные реакции, наблюдаемые в большинстве случаев, индуцируются вторично, в ответ на тканевые повреждения, и отражают компенсаторную активацию иммунной системы, направленную на восстановление нарушенного гомеостаза организма. Именно целям восстановления служат повышение эффективности клиренса поврежденной ткани и активация процессов регенерации. Активация восстановления поврежденных нервных волокон отмечалась у животных, которым вводили избыток Т-лимфоцитов, аутореактивных в отношении компонентов миелиновых оболочек нервных волокон [Schwartz, Cohen, 2000]. Эти феномены относятся к тому же классу явлений, что и наблюдавшееся нами позитивное влияние роста продукции нейротропных ауто-АТ на восстановление моторных и когнитивных функций у больных, перенесших ишемический инсульт [Poletaev et al., 2004]. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ИЗМЕНЕНИЕ ЕСТЕСТВЕННЫХ АУТОАНТИТЕЛ КАК МАРКЕР БОЛЕЗНИ На ранних (доклинических) этапах развития любой хронической болезни, как правило, отмечаются два типа событий молекулярно-клеточного уровня. А именно: а) стойкие биохимические девиации молекулярного (антигенного) состава в определенных популяциях клеток (прямо связанные с изменениями экспрессии), постсинтетических модификаций и/или скорости и полноты деградации определенных молекул; б) повышение интенсивности отмирания определенных типов специализированных клеток по механизмам апоптоза, некроза или их вариантов. В силу высокой эффективности репаративных процессов и избыточности механизмов компенсации, нарушения, происходящие на молекулярно-клеточном уровне, могут долгое время оставаться функционально незаметными. Иногда проходят годы до клинической манифестации болезни. Однако в любом случае эти события сопровождаются заметными изменениями антигенного состава межклеточной среды, что, согласно правилу Ковалева, проявляется в изменениях уровня продукции ауто-АТ соответствующей антигенной направленности. Специально подчеркнем: долговременные изменения в сывороточном содержании ауто-АТ определенной специфичности не возникают спонтанно, а являются своеобразным «молекулярным зеркалом», отражающим возникшие аномалии молекулярного состава определенных клеточных популяций. Очень заманчиво воспользоваться феноменом «иммунного отражения» патологических изменений в молекулярно-клеточном состоянии органов для практических нужд, а именно для создания новых лабораторных инструментов раннего выявления нежелательных изменений в состоянии здоровья индивидуального человека и мониторинга их динамики. Одним из примеров реализации таких подходов этого являеются методы группы ЭЛИ-Тест. |
Guest IP-штамп: frkh31Wjs.11M гость |
|
marinakom Участник |
|
Basharag |
|
guest: Teo IP-штамп: frWTO.d24KPIk гость |
|
« Предыдущая тема · Классическая биология · Следующая тема » |