Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
jelenarus |
Дело такое: порезали плазмиду Dpn1, все окей, форез отличный. Выделили ДНК из геля, концы фосфорилировали, осталось легировать, просто соединить 2 конца плазмиды по тупым. И все, на чашках не выросло! Ставили с Blunt Mix, потом поставили просто лигазой и лигазным буфером, опять ничего не растёт. Контроли отлично растут и ПЦРятся. Что может быть не так? |
jelenarus |
|
MMM Постоянный участник |
|
ship Постоянный участник Moscow |
на вскидку - в pBluescript 15 сайтв DpnI И для чего фосфорилирвать концы - если лигируется вектор сам на себя???? Как раз таки дефосфрилируют что бы вектор сам на себя не шился Сообщение было отредактировано ship - 23.03.2018 11:51
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
ASDF Постоянный участник |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
ASDF Постоянный участник |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
да, иногда стоит два раза спиртягой промывать колонки |
R-J-Dio Постоянный участник |
|
Tom1 Постоянный участник |
))))) |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Esya @ 31.03.2018 06:41) Ах хаотропный буфер так Каджини назвал труднозапоминаемо и хитроумненько. Там этой соли гуанидина так много , что два раза спиртягой не факт что отмоешь. Надо самогоном 60% попробовать. |
X34 Участник |
(R-J-Dio @ 31.03.2018 08:35) да руки поотрывать и гнать из профессии, вот и весь сказ. пусть идет в биоинформатики или оборудование продавать первый раз от академика дельный на все 100 совет, убивать таких на вступительных экзаменах, тьфу ты, ЕГЭ же нынче |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |