Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Evgeniy80 Участник Якутск / Москва |
Определяем уровень аммиака в сыворотке крови ферментативным глутамат дигидрогеназным методом коммерческим набором Ammonia Ultra от Sentinel Diagnostics. Прибор - спектрофотометр Shimadzu UV-1800 с проточной кюветой Sipper C и термостатированием от внешнего водяного циркулятора. Проблема в низкой воспроизводимости и погрешности результатов, фактически, они рандомные. Пробоподготовка: Вакутейнер с литий-гепарином, немедленное охлаждение (холодильник +4-6 С), центрифуга с охлаждением (+4-6 С), 4000G. Постановка теста: 80 мкл плазмы + 880 реагента -> вортекс -> внесение в проточную кювету -> инкубация 60 сек -> измерение начальной ОП -> ждём минуту -> конечная ОП. Особенность методики - двухточечная кинетика, нисходящая кривая оптической плотности, конечная ОП < начальной ОП. В прикреплении инструкция к набору и результаты измерений, где: 0 - стандарт; 538 - образец, 10 повторений; 1, 2 и 3 - контроли по пять повторений; Допустимые интервалы контролей, мкмоль/л: 1: 33,8-56,2 2: 84,3-126,5 3: 132,9-199,9 По образцу начальная ОП с минимальным разбросом, но дальше начинается полный разброд и шатание - дельта фактически рандомная, где-то убывает, где-то нарастает, хотя это один и тот же образец. По сравнению с образцом контроли ещё относительно стабильны, но всё равно не ложатся в допустимые пределы. Ещё смущает, что значащие цифры в итоге попадают во второй-третий знак после запятой, которые в любом случае будут "дрожать". В чём может быть проблема? Пробоподготовка? Сама методика? Результаты:
Методика:
Сообщение было отредактировано Evgeniy80 - 19.07.2018 03:14 |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
Кроме Вас что конкретно не так никто дистанционно не скажет, боюсь. Все эти проприетарные смесевые реагенты - настоящий ужас, поскольку обычно запатентованы и тащатся до Вас нипойми откуда в нипойми каких условиях. А иногда и подменяются или подделываются. |
Evgeniy80 Участник Якутск / Москва |
|
superuser |
В целом, оптимальным вариантом будет сменить методику. Раз у вас не пошла эта, ну значит - не пошла, невозможно, значит, в условиях вашего испытательного центра реализовать её. При этом данный инцидент не забрасывать. Создайте по нему комиссию и проведите расследование, ибо такие ситуации индицируют, о том, что в деятельности испытательного центра есть моменты, требующие проработки. Как ни банально может показаться но нужно проводить аудит деятельности испытательного центра, причём полный и независимым экспертом. И ещё, хорошо бы, если бы вы указали свои степень вовлечённости в данную работу и степень ответственности. P.S.: на мой взгляд, возможные точки возникновения проблемы, с которых стоит начать: пробоотбор и вортексирование. Возможно имеете частичный гемолиз, поэтому пробоотбор нужно оптимизировать. Возможно вортексирование изменяет активность ферментной системы, поэтому нужно эту стадию прорабатывать. Также убедитесь, перемешиваете ли вы содержимое ёмкостей с реагентами перед анализом. Просто, я считаю, что такие причины как некачественные реактивы и грязная посуда не должны рассматриваться в первую очередь, ибо с одной стороны они слишком просты и очевидны, чтобы в них могла существовать проблема, а с другой стороны невозможно считать действующим испытательный центр, где они возникают. Сообщение было отредактировано superuser - 24.07.2018 22:24 |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
(superuser @ 24.07.2018 19:09) Как ни банально может показаться но нужно проводить аудит деятельности испытательного центра, причём полный и независимым экспертом. Ну да, ещё накормить 10 дармоедов и подставиться под их стукачество в какой-нибудь надзор, с очередным заносом "документов" и/или переаттестацией. Чтобы доказать что это реагенты - найдите кто ещё его покупает по госконтрактам каким-нибудь или по знакомым. И попросите заправить их прибор своим или в свой отлейте их и попробуйте всё прогнать. 90% это реагент протух. Если подтвердится, что это реагент протух - или возмещение через суд ущерба с поставщика (1-2 года и куча денег на экспертизы с неясным решением и перспективой аппеляций), или поиск и валидация нового метода и покупка нового прибора - так ведь дальше не может продолжаться, как Вы понимаете. Метода то у Вас получается больше нет. |
ksm Постоянный участник |
пардон, судя по оптическим плотностям NADPH в норме. остается фермент. Сообщение было отредактировано ksm - 25.07.2018 02:22 |
superuser |
(NMR-guy @ 25.07.2018 01:14) Ну да, ещё накормить 10 дармоедов и подставиться под их стукачество в какой-нибудь надзор, с очередным заносом "документов" и/или переаттестацией. Это единственный подход в подобных случаях. Если испытательный центр своими силами не справляется больше ничего другого не остаётся. В норме ситуация, описанная вами, - не самое страшное, что их могло бы ждать. Если и возможно, что в ином испытательном центре дела запрятываются и скрываются, то только благодаря коррупции и несовершенству деятельности там в области измерений с одной стороны, а с другой - из-за отсутствия у клиентов достаточных ресурсов для защиты своих прав. Анализ на концентрацию ионов аммония в плазме - это не какой-нибудь анализ на липидный профиль. И причины его назначения и результаты являются очень серьёзными. Ну и то, что в обществе независимых экспертов могут считать дармоедами, - ну кто ж тогда этому обществу доктор. Сообщение было отредактировано superuser - 25.07.2018 06:54 |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
|
Evgeniy80 Участник Якутск / Москва |
В общем, вышел через цепочку посредников на поставщика набора, посмотрим, что будет дальше. |
ksm Постоянный участник |
|
superuser |
И я не хожу на форумы для решения рабочих задач. |
MMM Постоянный участник |
(superuser @ 02.08.2018 09:37) Тогда, что вы здесь делаете? Этот форум предназначен в основном для решения рабочих задач. Вам НЕ сюда. Идите в более подобающее вашим задачам место. И не надо мне отвечать. "Что не мне вас учить куда вам ходить." Это не я вас учу. Это ВЫ написали, что рабочие задачи вас не интересуют.
|
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
(superuser @ 02.08.2018 08:37) Вы занимаетесь делом, в котором не являетесь специалистом и занимаете должность, которой не соответствуете. Переливаете реактивы из одной посуды в другую, да рисуете результаты на бумажке. И кто в данном случае робот. И я не хожу на форумы для решения рабочих задач. А Вы кто - федеральный судья у нас, чтобы об этом судить? Вы ведь даже в переливании и рисовании ничего не соображаете, а сюда зачем-то прилезли. Похвастайтесь уровнем хоть одной Вашей рабочей задачи. Я бы такому "суперюзеру" как Вы даже хлеб в магазине не доверил покупать. |
Evgeniy80 Участник Якутск / Москва |
Возможно, смесовый реактив от Sentinel diagnostics менее стабильный в хранении и просто тухнет, пока доберётся до нас. |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |