Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Annexin V apoptosis
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! nick25




 прочитанное сообщение 09.05.2005 23:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Вопрос такой кто-нибудь работал с apoptosis detection kit на annexin V от
biovision
Есть проблеми с протоколом, в инструкции сказано просто разведите антитело
в binding buffer и проинкубируйте клетки в течении 5 мин. Посмотрел
в pubmed люди восновном работают с этим китом для FACS анализа,
мне же нужно посмотреть апоптотические клетки на слайде, я заражаю
клетки аденовирусом и смотрю приводит ли активация моего гена к апоптозу.
Вообшем в моих руках апоптотических клеток вообще невижу даже
там где положительний контроль.
Буду очень признателен если у кого-нибудь есть протокол как это делать.
Участник оффлайн! gostya
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.05.2005 23:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

tam nado mozhet permeabilizatsiyu delat, nu i kletki fiksirovat' i t.d.
Участник оффлайн! nick25




 прочитанное сообщение 10.05.2005 01:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

В том то и дело что пермеализация или фиксация она повреждает клеточную
мембрану и тогда поялвяется неспецифика, которая весь сигнал перекроет
Участник оффлайн! gostya
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.05.2005 05:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

http://www.biovisionlabs.com/pdf/1001-1000.pdf
если у вас fitc, то он быстро выгорает
Участник оффлайн! AE
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.05.2005 11:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(nick25 @ 09.05.2005 22:07)
Ссылка на исходное сообщение  Вопрос такой кто-нибудь работал с apoptosis detection kit на annexin V от
biovision
Есть проблеми с протоколом, в инструкции сказано просто разведите антитело
в binding buffer и проинкубируйте клетки в течении 5 мин. Посмотрел
в pubmed люди восновном работают с этим китом для FACS анализа,
мне же нужно посмотреть апоптотические клетки на слайде, я заражаю
клетки аденовирусом и смотрю приводит ли активация моего гена к апоптозу.
Вообшем в моих руках апоптотических клеток вообще невижу даже
там где положительний контроль.
Буду очень признателен если у кого-нибудь есть протокол как это  делать.


Какие клетки? Что является позитивным контролем?
А вы сразу растите свои клетки на покровном стекле? Вы уверены, что они не открепляются когда уходят в апоптоз? Довольно распространенное явление. Попробуйте собрать все и открепленные и прикрепленные клетки (трипсином или edta) до кучи и просто посмотреть с PI увеличивается ли количество PIpos.
Попробуйте также посмотреть апоптоз по другому, например померяйте каспазы.
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum



 прочитанное сообщение 10.05.2005 12:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(nick25 @ 09.05.2005 21:07)
Ссылка на исходное сообщение  Вопрос такой кто-нибудь работал с apoptosis detection kit на annexin V от
biovision
Есть проблеми с протоколом, в инструкции сказано просто разведите антитело
в binding buffer и проинкубируйте клетки в течении 5 мин. Посмотрел
в pubmed люди восновном работают с этим китом для FACS анализа,
мне же нужно посмотреть апоптотические клетки на слайде, я заражаю
клетки аденовирусом и смотрю приводит ли активация моего гена к апоптозу.
Вообшем в моих руках апоптотических клеток вообще невижу даже
там где положительний контроль.
Буду очень признателен если у кого-нибудь есть протокол как это  делать.


Та-а-ак.
Ну во- первых - зайдите на такие сайты, как:
http://www.probes.com
http://www.bd.com
http://coulter.com
и им подобные- найдете много интересного.

А во-вторых - ну ведь такой же кондовый метод - как с ним могут проблемы возникнуть?

А в третьих, Аннексин-V - не антитело smile.gif
Участник оффлайн! Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum



 прочитанное сообщение 10.05.2005 12:42     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(gostya @ 09.05.2005 21:10)
Ссылка на исходное сообщение  tam nado mozhet permeabilizatsiyu delat, nu i kletki fiksirovat' i t.d.

Я плакалЪ... teapot.gif
гость: g
IP-штамп: frlkSmZr37YvE
гость



 прочитанное сообщение 10.05.2005 16:59     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

nu ne nado permebealization, no eto redko tak byvaet smile.gif
Участник оффлайн! MHC II
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.05.2005 19:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Дядя как всегда опередил....Кстати Аннехин далеко не самыи надежныи маркер апоптоза. Сеича люди смотриат атиквность каспаз, Поисчите в гугле [Oncoimmune Inc], наидете там про дететсию кастасы-3 для клеток на слаиде
Участник оффлайн! MHC II
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.05.2005 20:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(гость: g @ 10.05.2005 08:59)
Ссылка на исходное сообщение  ну не надо пермебеализатион, но это редко так бывает smile.gif


Как раз для детектсии апоптоза чаще всего клетки не фиксируют и пермобилизируют...
Участник оффлайн! Glebber
Постоянный участник
London, UK



 прочитанное сообщение 10.05.2005 20:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

дайте тоже повыпендриваться:

http://probes.invitrogen.com/servlets/product?item=273
Участник оффлайн! nick25




 прочитанное сообщение 10.05.2005 22:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Я работаю с HC-11 клетками , да сразу ращу на слайде, по поводу открепления
хорошая идея, но я вижу на слайде много даже мертвих клеток, наверное
попробую посмотреть каспазы, я на самом деле не уверен что мой ген
будет вызивать апаптоз в этои системе, у меня есть другие данные in vivo по поводу
его, полозительнии контроль просто эти же клетки инкубированние в среде без сыворотки, так
по крайней мере вызывают апоптоз другие исследователи, ссылки счас посмотрю
может чего найду. Аннехин я делаю cy-3, это красниq фильтр
Участник оффлайн! imers
Участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.05.2005 01:46     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(nick25 @ 10.05.2005 20:11)
Ссылка на исходное сообщение   полозительнии контроль просто эти же клетки инкубированние в среде без сыворотки, так
по крайней мере вызывают апоптоз другие исследователи


Да, интересно - и долго их без сыворотки нужно для этого держать? А то я на ночь оставляла в бессывороточной - и все с ними ОК было. Правда, клетки другие. Просто для себя узнать интересно!
А чего б апоптоз какой-нить перекисью водорода не вызвать?
Участник оффлайн! gostya
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.05.2005 02:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

я знаю для p53, чтобы вызвать апоптоз, клетки облучают УФ
Участник оффлайн! AE
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.05.2005 12:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

  полозительнии контроль просто эти же клетки инкубированние в среде без сыворотки,

Беглый просмотр первых десяти ссылок выдаваемых гуглем на hc-11 apoptisis
привел меня к выводу, что нужно скорее убирать инсулин из среды. При этом и ждать нужно довольно долго. Вроде как есть и другие методы вызвать у ваших клеток апоптоз.
Для НepG2 я в свое время использовал добавление дезоксихолата. Не знаю на счет покраски с аннексином, но активация каспаз и Dioc6-low популяция при этом детектируется на раз.

  Аннехин я делаю cy-3, это красниq фильтр

При этом вы лишаетесь возможности комбинировать эту окраску с PI.
Участник оффлайн! natusik
Постоянный участник
окрестности Чикаго



 прочитанное сообщение 11.05.2005 15:27     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

с этими клетками не работала, но у HeLa, недифференцированных mouse embryonic cells и у mouse embryonic fibroblats апоптоз вызываем на раз актиномицином Д, стауроспорином, перекисью водорода и УФ. Сама вот этими руками снимала и time-course и dose-dependent.

Клетки легочного эпителия оказались очень даже устойчивыми к этим воздействиям.

Меряю одновременно на флоу экстернализацию PS (на FACScane первый "зеленый" канал, потому как третий "красный" идет на PI) и каспазы отдельным китом и не на флоу (рыдает в три ручья, потому как другим китом на хемилюминометре геморройно и надо на белок нормализовать).

С перекисью водорода надо быть осторожнее, в зависимости от концентрации каспазы ингибируются.
Участник оффлайн! natusik
Постоянный участник
окрестности Чикаго



 прочитанное сообщение 11.05.2005 15:29     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

что касается изнаального вопроса, думаю, либо положительный контроль плох (а Вы уверены, что вызвали апоптоз?), либо таки не надо клетки фиксировать, либо FITC выцветает (что менее вероятно)
Участник оффлайн! nick25




 прочитанное сообщение 13.05.2005 19:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Без сыворотки я держу клетки 4 дня чтобы вызвать апоптоз, по краинеи мере
так нашел в статьях, да PI не могу использовать, но вихода другого нет
вирус которым я заражаю несет мои белок как fusion с GFP, перекисью
попробую конечно . Всем большое спасибо за советы
Guest
IP-штамп: fr9BGIs2DoBvs
гость



 прочитанное сообщение 17.05.2005 14:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(nick25 @ 09.05.2005 23:07)
Ссылка на исходное сообщение  Вопрос такой кто-нибудь работал с apoptosis detection kit на annexin V от
biovision
Есть проблеми с протоколом, в инструкции сказано просто разведите антитело
в binding buffer и проинкубируйте клетки в течении 5 мин. Посмотрел
в pubmed люди восновном работают с этим китом для FACS анализа,
мне же нужно посмотреть апоптотические клетки на слайде, я заражаю
клетки аденовирусом и смотрю приводит ли активация моего гена к апоптозу.
Вообшем в моих руках апоптотических клеток вообще невижу даже
там где положительний контроль.
Буду очень признателен если у кого-нибудь есть протокол как это  делать.

dlja polojitelnogo kontrolja lutshe UV Chem sivorotka. FITC vimiraet esli ne analizirovat nepremenno ili mojno na -20 derjat max 1 week v mounting medium...
Участник оффлайн! AnNaKa




 прочитанное сообщение 10.04.2018 10:53     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

Здравствуйте!
Прошу помощи по теме. Как влияет на клеточную мембрану трипсинизация? В протоколах анализа апоптоза с помощью аннексина всюду используют суспензионные культуры.. У кого какой опыт анализа монослойных культур?
Спасибо!
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

https://omegawatches89.simplesite.com/452939033
https://dailygram.com/index.php/blog/116219...eplica-watches/
https://plaza.rakuten.co.jp/omegawatches89/...y/202208040000/
https://blog.easyfie.com/how-to-prepare-you...on/#comment-285
https://form.jotform.com/223253786289064
https://discussions.ubisoft.com/user/omegawatches89
https://www.worldranklist.com/profile/108194
https://blog.udn.com/omegawatches89/176226568
https://penzu.com/p/56f52c40
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/tips-...replica-watches
https://omegawatches91.mystrikingly.com/
https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756647425.html
https://telegra.ph/Where-To-Find-Elegant-An...es-Online-08-03
https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300768.html
https://medium.com/@omegawatches89/reasons-...ar-e16d1fabc26f
https://omegawatches89.simplesite.com/452939109
https://teletype.in/@omegawatches89/bVw2sShID4x
https://www.pearltrees.com/omegawatches89#item456651209
https://dailygram.com/index.php/blog/116219...eplica-watches/

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 10:21
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft