Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Определение активности фермента, U
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
тугодум
IP-штамп: frQtbDwjgPMwo
гость



 прочитанное сообщение 05.05.2008 11:50     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте!
Скажите пожалуйста, при измерении активности фермента в U, всегда берется насыщающая концентрация субстрата (несколько Km)? Если да,то почему в определении 1 U это не пишется? и чем тода активность фермента отличается от числа оборотов? Если нет, то какая тогда берется концентрация субстрата, ведь начальная скорость от нее зависит.
спасибо)
тугодум
IP-штамп: frDQwa9k7riYg
гость



 прочитанное сообщение 07.05.2008 18:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

up
Неужели никто не поможет разобраться?
Нужно померять активность выделенного фермента в U, не знаю как это сделать, интересны общие закономерности....
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 07.05.2008 23:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

(тугодум @ 05.05.2008 11:50)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте!
Скажите пожалуйста, при измерении активности фермента в U, всегда берется насыщающая концентрация субстрата (несколько Km)? Если да,то почему в определении 1 U это не пишется? и чем тода активность фермента отличается от числа оборотов? Если нет, то какая тогда берется концентрация субстрата, ведь начальная скорость от нее зависит.
спасибо)


под активностью подразумевается максимально возможная скорость в данных условиях (температура, рН и т.д.). а максимальная скорость достигается при насыщающих концентрациях субстрата, тут вы правы, т.е. фактически Vmax. однако, Vmax зависит от количества фермента, поэтому энзимологи пользуются не просто U (мкмоль субстрата/мин), а удельной активностью - U/мг белка.
теперь касательно "нескольких Km". обычно берут концентрацию субстрата, равную 10Km при этом скорость составляет (теоретически для михаэлисовских ферментов) 91%Vmax. однако взять из статьи значение Km, намутить в пробе концентрацию в десять раз большую, померить скорость и на этом успокоиться не получится. во-первых, потому, что значение Km для вашего фермента может отличаться от литературного (и хорошо, если в меньшую сторону), сл-но скорость вы будете мерить не при 10, а при неизвестно скольки Km. поэтому по-человечески надо построить зависимость скорости (мкмольS/мин) от концентрации субстрата от примерно 0,2 до 10 Km (фактически кривую Михаэлиса, если конечно ваш фермент подчиняется михаэлисовской кинетике) и убедиться в том, что ваши "10Km" действительно близки к насыщающим концентрациям и нет никаких выкрутасов типа субстратного ингибирования. из кривой после линеаризации получите Vmax (заодно и Km wink.gif) - вот и будет ваше желанное U smile.gif а если поделите на количество мг белка в пробах, то и удельную активность. а если на моли фермента - то число оборотов. для немихаэлисовских похитрее, но идея та же.
но начинать следует с подбора количества фермента - оно должно быть таким, чтобы вы уверенно и достоверно мерили начальную скорость и при 10Km (пока предполагаемых) и при 0.2 не ждали бы полдня.

еще могу посоветовать почитать книжку Скоупса "методы очистки белков" - там про определение активности ферментов достаточно просто изложено. да и вообще книжка полезная). в сети она есть, но если не найдёте - могу прислать по мылу. ну и других книжек про ферменты почитать тоже не вредно будет. Диксон и Уэбб - классика ))
тугодум
IP-штамп: frQtbDwjgPMwo
гость



 прочитанное сообщение 12.05.2008 14:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

спасибо огромное за подробный ответ)), стало все более понятно
книгу Скоупса я нашла, там действителньо все понятно написано, а Диксона и Уэбба смотрела - там именно про единицы активности как-то мутно...
Участник оффлайн! Barselona




 прочитанное сообщение 11.04.2018 11:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Добрый день!
Подскажите, а что такое LVU? У ферментов для промышленности активность часто выражают в LVU, а что это не могу найти (
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2018 15:25     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Barselona @ 11.04.2018 01:30)
Ссылка на исходное сообщение  Добрый день!
Подскажите, а что такое LVU? У ферментов для промышленности активность часто выражают в LVU, а что это не могу найти (

One LVU is the amount of protease that increases casein fragments in 20 ml of a filtrate of a 4% casein solution, equivalent to the action of 5.75 x 10-3 ml of 0.1 N NaOH (Determination of the activity of proteases according to Lohlein-Volhard: A. Kunzel, Gerbereichemisches Taschenbuch, 6th Edition, Dresden and Leipsig 1955)
und
https://patents.google.com/patent/US4273876
Участник оффлайн! Barselona




 прочитанное сообщение 11.04.2018 15:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(Tom1 @ 11.04.2018 16:25)
Ссылка на исходное сообщение  One LVU is the amount of protease that increases casein fragments in 20 ml of a filtrate of a 4% casein solution, equivalent to the action of 5.75 x 10-3 ml of 0.1 N NaOH (Determination of the activity of proteases according to Lohlein-Volhard: A. Kunzel, Gerbereichemisches Taschenbuch, 6th Edition, Dresden and Leipsig 1955)
und
https://patents.google.com/patent/US4273876

Большое спасибо! jump.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 09.08.2022 23:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Тем не менее стоит отметить так же, что общая концепция сложившегося положения ни коим образом не противоречит нашей теории, а скорее наоборот, способствует улучшению направлений прогрессивного развития. https://homeinspectionforum.net/user/profile/64943.page
guest: Ufa1688
IP-штамп: frpXPq5TOmUHs
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  10.08.2022 11:40     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Long periods with ufa168 his feet off solid ground ดรีมเกมส์ gave him a unique and D88 Green Dragon privileged perspective on Big gaming our planet. His Instagram aff 1688 account is bursting with ทางเข้าufa1688 beautiful images of the blue ufabet เข้า สู่ระบบ ball we call home Funky Games But the beauty is tainted Manna Play Pesquet says that even from space สล็อต ufa1688 the effects of climate change are visible.
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.10.2022 19:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Не следует, однако, забывать, что общая концепция сложившегося положения требует определения и уточнения направлений прогрессивного развития. https://www.junmiyake.com/profile/dima43y/profile
Участник оффлайн! vadimchik152a
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.03.2023 15:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

On the other hand general conception of the folded position requires determination and clarification and to the analysis of necessary data for permission of situation on the whole. https://unsplash.com/@anatolij71y2

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 11:49
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft