Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Artin |
Недавно обнаружил в культуральной среде нитевидные (в том числе и свернутые) образования (спустя три пассажа после высевания). Я промыл флакон PBS-ом (Gibco Invitrogen), пипетируя его на клеточный газон, и заменил среду (после данных процедур этих образований стало меньше, но полностью избавиться от них не удалось). На следующий день обнаружил целые очаги гибели клеток ближе к горлышку флакона (возможно перестарался с пипетированием или же это последствия контаминации). Затем, спустя еще один день, наблюдения в микроскоп показали следующую картину: бОльшая часть клеток растет нормально, но очаги клеточной гибели оказались полностью пустые (полное отсутствие клеток). Я удалил среду и высадил ее в 6-тилуночный планшет, разбавив в 6 раз свежей средой без антибиотика. После нескольких дней инкубации наблюдаю во всех лунках такие же образования, они вроде не растут и число их пока не увеличивается. Клетки HaCAT, среда DMEM (антибиотик+ЭТС). Как думаете, что это может быть? Гифы плесени или же просто клеточный мусор/куски из ЭТС Клетки HaCAT, среда DMEM (антибиотик+ЭТС). Прилагаю фото этих образований (х50) после культивирования в 6-тилуночном планшете (в 6-тикратно разбавленной свежей среде). Ссылки на фото (не удалось прикрепить): |
MMM Постоянный участник |
|
semi Постоянный участник Москва |
(MMM @ 06.04.2018 23:53) Это пророст, скорее всего грибы. Проверьте на контаминацию бокс, среду и инкубатор. А потом размораживайте новую фасовку клеток из заморозки. Грибы обычно красивые, а это смахивает на осадок из сыворотки. Вот похожие картинки, сопровождаемые похожими вопросами:
|
Tom1 Постоянный участник |
не просматривауются гифы как правильно заметил коллега " семи" они красивые... и потом за несколько дней там уже должны плавать такие острова из нормальной плеснюги... конечно проверить посевом не помешает, но если по быстрому заметить среду и сыворотку .... |
LaBord Монреаль |
Всё. Если беда повторно - предполагать бяку либо в культуре, либо в фильтре бокса. |
Знания сила |
|
LaBord Монреаль |
По факту клетки гибнут, и не задача пользователя выявлять царство, пустившее корни. Нужно как можно быстрее вернуться к эксперименту и не нести дальнейшие потери реурсов. |
Знания сила |
(LaBord @ 20.04.2018 06:11) Да хоть мидихлориане. По факту клетки гибнут, и не задача пользователя выявлять царство, пустившее корни. Нужно как можно быстрее вернуться к эксперименту и не нести дальнейшие потери ресурсов. Человек спросил, ему ответили, что это не зарост, а ошметки от FCS, которую он называл ЭТС. ЭТС - это крутая смесь белков, которая инактивируется тепловым шоком. Агрегаты белков и всего прочего именно так и выглядят, как первым сообщил semi. Можете профильтровать сыворотку или процентрифугировать от ошметков. Но нафига? Конечно можете воспользоваться советом советника из Монреаля и сжечь из огнемета весь бокс дабы "как можно быстрее вернуться к эксперименту и не нести дальнейшие потери ресурсов". Метод Солсбери ? Сообщение было отредактировано Знания сила - 21.04.2018 01:06 |
LaBord Монреаль |
Мое мнение основывается на практике: в инкубаторах стоят клетки трех лабораторий + "гостевые",т.е. при реальной контаминации даже одного посева печальный исход может быть распространен не только на личный результат, нужно помнить о коллегах. В условиях, когда естественно-научное любопытство о природе пророста может перерасти в гибель культур у полутора десятков человек и отбросить работу всех на месяц, а то и два, - да, я предпочитаю потратить пару часов на превентивную дезинфекцию, стоимость которой и так невелика, а по сравнению с возможными неприятностями - ничтожна. Сожженый из огнемета бокс не прибавит ценности ни эксперименту, ни организации работы, но, возможно, мои знания не столь сильны как участника из ниоткуда. |
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |