Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Способы оценки деградации ДНК -- в науке и практике --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Кураторы темы:* LMP
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 12:37     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые участники, приглашаю к дискуссии на тему существования методов оценки деградации ДНК.
Недавняя дискуссия по данному вопросу с одним из участников сподвигла меня на обсуждение данного вопроса с точки зрения существования молекулярно-генетических методов, которые позволяют анализировать деградацию ДНК в рамках оценки периода наступления смерти.
Возможные ответы:
1. Таких методов нет
2. Методы в литературе есть
3. Методы в литературе есть, валидированных тестов нет
4. В др. странах тесты есть, у нас нет
5. В др. странах не валидированные методы так или иначе используются на практике
Кому какие варианты ближе или кто что может добавить или прокомментировать?
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 15:00     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Деградация ДНК - плохой предиктор давности наступления смерти/давности депозиции образца. Для этого в форензикс используют оценку деградации РНК (обычно по соотношению мРНК бета-актина и 18S rRNA), хотя валидированных тестов для этого пока нет.
Оценка деградации ДНК имплементирована в наборе Quatifiler Trio/HP. Применяется она для оценки возможности амплификации длинных STR, более ни для чего. SWGDAM developmental validation проведена только для Duo, для Trio пока не опубликована.

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): criplenie, -Ъ-
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 17:21     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Да, для анализа только деградации ДНК наверное не достаточно, согласен. Это я привел, как один из вариантов. Хотя вот статья в которой попробовали привязать ДНК-овый метод к первым 24 часам. Еще, наверное, в разных тканях процесс деградации идет с разной скоростью?

Файл/ы:

скачать файл ispub_7781.pdf
размер: 1.02мб
кол-во скачиваний: 467


Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 17:52     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(LMP @ 11.10.2015 16:21)
Ссылка на исходное сообщение  Да, для анализа только деградации ДНК наверное не достаточно,  согласен. Это я привел, как один из вариантов. Хотя вот статья в которой попробовали привязать ДНК-овый метод к первым 24 часам. Еще, наверное, в разных тканях процесс деградации идет с разной скоростью?

ДНК еще до эпохи исторического материализьма пытались для этого дела прикрутить и убедились, что бесполезно. Сейчас вот разве что ебиптяне с индусами могут с этим играться. Да и то, на крысах только картинки б.м. внятные получаются и только на коротком начальном интервале, на человеке такое не получится - масса тела и соот-но динамика остывания и активность ферментов совсем другие. То, что в разных тканях деградация с разной скоростью происходит это и хорошо и плохо: слишком много трудно учитываемых факторов, в печенке или поджелудке скорость метаболизма сильно поменяется в зав-ти от того, что покойничек перед смертью откушал, а в других тканях деградация отн. медленно происходит. ДНК - это тупик однозначно.
Про РНК разговор отдельный, но с определением ДНС по ее деградации тоже проблем полно. Кстати, на тех же крысах португальцы в Плос1 опубликовали модель с точностью до минут (сам рецензировал, предупреждал, что на человека ее переносить не стоит, но кажется авторы не слишком прониклись). Вот с давностью депозиции следов (пятна крови, волосы, ногти) использование РНК более здравым выглядит, хотя там условия внешней среды ключевую роль играют. Если влажность и температура б.м. постоянны (indoors, office crimes), то корреляция реально очень высокая. Есть еще интересная публикация по дегр. РНК в зубной пульпе, по-идее условия идеальны в смысле постоянства условий, но корреляция получилась не очень большой, но там у меня сомнения в квалификации авторов, не молекулярщики они, могли накосячить.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 18:30     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(blij @ 11.10.2015 15:52)
Ссылка на исходное сообщение  Кстати, на тех же крысах португальцы в Плос1 опубликовали модель с точностью до минут
Эти?

Файл/ы:

скачать файл journal.pone.0056507.pdf
размер: 339.41к
кол-во скачиваний: 348


Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 19:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

ага
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 19:45     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(blij @ 11.10.2015 15:52)
Ссылка на исходное сообщение  То, что в разных тканях деградация с разной скоростью происходит это и хорошо и плохо: слишком много трудно учитываемых факторов, в печенке или поджелудке скорость метаболизма сильно поменяется в зав-ти от того, что покойничек перед смертью откушал, а в других тканях деградация отн. медленно происходит.
А если, например, имеется сравнительно большая группа лиц (>200), находящаяся примерно в одинаковых условиях (внешняя температура) и есть возможность отобрать более или менее схожих по BMI данным и относительно здоровых (по до-смертным показателям)? Хотя конечно понятно, что здоровый - здоровому рознь smile.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 20:29     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

А смысл здоровых-то отбирать? Глотнет здоровый лось какой-нибудь паленки, у него некроз поджелудки еще до смерти разовьется. А это систематический и не редкий фактор. Большая выборка тут не поможет. Вообще для определения ДНС нет и в принципе не будет надежного универсального метода.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 21:26     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

про один универсальный метод речи и нет конечно. Только как подтверждение в рамках системного анализа, по возможности.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 21:30     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(blij @ 11.10.2015 18:29)
Ссылка на исходное сообщение  А смысл здоровых-то отбирать?
Я другое имел в виду. Если одномоментно погибает много народу в одном месте. Известно кто (можно отобрать относительно здоровых), но не известно когда.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.10.2015 23:18     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(LMP @ 11.10.2015 20:26)
Ссылка на исходное сообщение  про один универсальный метод речи и нет конечно. Только как подтверждение в рамках системного анализа, по возможности.

Честно говоря, я бы не стал на это время тратить. От ДНК ождания низкие, то что какие-то арабы или китайцы какие-то картинки показывают, не значит почти ничего. Врут они почти наверняка, даже для крыс.
Если действительно системно делать, надо учитывать туеву хучу факторов, доставать образцы, с трупов, хорошо документированные, выборку набирать немалую. И делать это надо на NGS, причем работать с дегр. ДНК. В итоге вся эта морока скорее всего не окупится.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 10:45     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(blij @ 11.10.2015 13:00)
Ссылка на исходное сообщение   Для этого в форензикс используют оценку деградации РНК (обычно по соотношению мРНК бета-актина и 18S rRNA)
Я смотрю некоторые прикидочный тест сделать пытаются, анализируя период приблизительно в размере до 100 дней, работая с мРНК для митохондриальных генов, 18S рРНК, а ДНК считают в ногтях и костях квантифайлером.

Файл/ы:

скачать файл pat.pdf
размер: 1.41мб
кол-во скачиваний: 382


Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 10:52     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

Нееет, только не это! smile.gif Поищите нормальные работы, они есть. Я попозже могу дать ссылки. Про этих клоунов забудьте лучше.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 11:30     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

А что с ними не так? smile.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 12:14     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

(LMP @ 12.10.2015 10:30)
Ссылка на исходное сообщение  А что с ними не так? smile.gif

Их результатам в принципе нельзя доверять (имел "щастье" рецензировать их MS, это что-то запредельное по методической безграмотности).

Нормальные ссылки:
https://www.ncjrs.gov/pdffiles1/nij/grants/226811.pdf
http://www.fsijournal.org/article/S0379-07...0257-9/abstract (но, см. также http://www.fsijournal.org/article/S0379-07...ext?mobileUi=0)
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111...tomisedMessage=
Много китайщины появляется, иногда даже не совсем бредовой (напр. использование miRNA).

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): LMP
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 12:34     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

(blij @ 12.10.2015 10:14)
Ссылка на исходное сообщение  Много китайщины появляется, иногда даже не совсем бредовой (напр. использование miRNA).
микроРНК я видел на ISFG в этом году (~10% от всех постеров), но углядел несколько странностей:маленькая выборка (не более 10-15 человек), нестабильность маркера (hsa-miR205-5p, "пляска экспрессии до 20-кратной разницы в разные дни наблюдения) и почему-то у научных групп из одного и того же института miR-маркеры тканей разные. Этого я совсем не понял. Не понял и объяснения авторши, что типа они разными базами данными для предварительной селекции пользуются... confused.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 12:49     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Я имел в виду идею использования миРНК как стабильного нормализатора для определения возраста пятен крови (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24611529).
На ISFG об идентификации тканей речь была. Выборки маленькие, методы разные, БД разные (наверняка имелись в виду разные версии mirbase).
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 13:02     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

(blij @ 12.10.2015 10:49)
Ссылка на исходное сообщение 
На ISFG об идентификации тканей речь была.
да, конечно, просто миРы для крови, для тестирования возраста и идентификации (цельной крови) по идее, одни и те же должны быть...
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.10.2015 13:09     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(LMP @ 12.10.2015 12:02)
Ссылка на исходное сообщение  да, конечно, просто миРы для крови,  для тестирования возраста и идентификации (цельной крови) по идее, одни и те же должны быть...

Нет, для тканей нужны именно тканеспецифичные, для опр. возраста не обязательно, главное, чтоб были стабильные.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 00:23     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(blij @ 12.10.2015 10:52)
Ссылка на исходное сообщение  Нееет, только не это! smile.gif Поищите нормальные работы, они есть. Я попозже могу дать ссылки. Про этих клоунов забудьте лучше.

Это вы адьюнкта UT из Ноксвиля с непонятной аффилиацией и адресным грантом от USDJ называете клоуном? lol.gif Вы сами-то хорошо подготовлены для таких эпитетов?

Статья очень хорошая. В ней нет бреда за деньги от маркетологов секвенаторов, а используется только то, к чему есть доверие и что может иметь (в отличие от ваших домыслов) доказательную силу в суде, втч - суде присяжных, которым можно все детали методов если нужно объяснить.

Собственно, и экспериментальные данные выглядят правдоподобными. Нигде кроме почвы по повреждению шаблона время после смерти оценить у них нормально не получилось. И понятно почему - в почве температура гораздо более постоянна, чем на поверхности.

И выбор ногтей/волос/зубов не случаен как материала - по другим тканям ничего вообще оценить было бы не возможно, поскольку факторов, которые вмешиваются в скорость распада шаблона там просто море и все могут быть в разном соотношении со временем, к которому и хотят все привязать...
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 00:35     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

то, что миРНК стабильна объясняется лишь тем, что она короткая.

если материал подвергается биологической декомпозиции, то это ее не спасет. и время по ней определять - все равно что по курсу доллара к рублю. 10 лет постоянства, потом ступенька - и всё.

а вот по длинному шаблону, вмурованному в кератин волос/ногтей/зубов - милое дело, поскольку никакие клостридии до нее не доберутся быстро и скорость ее исчезновения будет жестче связана со временем.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 00:59     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

Я очень прошу модераторов, уберите его от греха из этого топика.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 16:00     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

От какого греха? Вы тут уже других напропалую клоунами безосновательно кличете. так что начните с себя воспитательный процесс. И своего коллеги по разуму ДЖ Рио. И желательно там же закончите.

А командовать модераторами в открытую - дело неблагодарное. Вдруг не послушают и Вы окончательно опозоритесь?

(blij @ 12.10.2015 12:14)
Ссылка на исходное сообщение  Их результатам в принципе нельзя доверять (имел "щастье" рецензировать их MS, это что-то запредельное по методической безграмотности).

Нормальные ссылки:
https://www.ncjrs.gov/pdffiles1/nij/grants/226811.pdf
http://www.fsijournal.org/article/S0379-07...0257-9/abstract (но, см. также http://www.fsijournal.org/article/S0379-07...ext?mobileUi=0)
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111...tomisedMessage=
Много китайщины появляется, иногда даже не совсем бредовой (напр. использование miRNA).

В этих статьях речь идет о засохшей крови и волосах. И все что в них написано никак не противоречит статье соавторов, которых Вы по какой-то причине обозвали публично клоунами.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 16:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

Дорогие модераторы, какого лешего я, рецензент статей обсуждаемых авторов, должен выслушивать вопли тролля, который о самом субже впервые услышал от меня же пару-тройку недель назад в другом топике (не преминув тогда обвинить меня в невежестве)?
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:04     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

Вы здесь не рецензент, а собеседник. Думаю, это всем понятно. К тому же, Ваш уровень культуры диалога ставит под сомнение Вашу способность вести рецензирование статей.

Надеюсь, при рецензировании Вы хотя бы не обзывали авторов клоунами и не требовали модераторов защищать и выгораживать ваше хамское словесное поведение и неуважение к отлично сделанной другими людьми безо всякой маркетологической секвенаторной хрени работе.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:21     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

(NMR-guy @ 13.10.2015 16:04)
Ссылка на исходное сообщение  Вы здесь не рецензент, а собеседник. Думаю, это всем понятно. К тому же, Ваш уровень культуры диалога ставит под сомнение Вашу способность вести рецензирование статей.

Надеюсь, при рецензировании Вы хотя бы не обзывали авторов клоунами и не требовали модераторов защищать и выгораживать ваше хамское словесное поведение и неуважение к отлично сделанной другими людьми безо всякой маркетологической секвенаторной хрени работе.

Неуважаемый, собеседник высказывает интересные идеи и задает правильные вопросы, если конечно хочет беседу поддерживать. Вы же, при полном незнакомстве с вопросом, тем не менее уверенно ляпаете категоричную чушь обсуждать которую даже не хочется.
И, кстати, столь понравившийся Вам отчет, который Вы упорно именуете публикацией, опубликован в рецензируемом журнале никогда не был. Из содержания в общем-то ясно почему, если конечно хоть немного соображать в теме.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:36     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

Общаясь с Вами действительно становится ясно почему. Там нет NGS. Работа хорошая и простая. Опубликован же он БЫЛ, как заметно по простому факту того, что его нашли и хотят проверить. А проверив - начать использовать.

Люди работают не для того, чтобы радовать вам подобных. А для того, чтобы предложить дешевую альтернативу всякой таинственной хрени из моря зауми и заносов маркетологов производителей стремительно дорожающих приборов.

Читая вас с собратом ДЖ Рио я все больше и больше убеждаюсь в том, что публиковаться стОит только в индексированных OpenSource журналах без подобных Вам референтов, обзывающих авторов за глаза клоунами.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:36     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

Слушайте, давайте правда тему в покое оставим? ЯМР, микроРНК вполне себе нормальный маркер, к которому у нас лишь только "привыкают". На личном опыте, как работает для типирования опухолей, меня вполне устраивает.
Нет, для тканей нужны именно тканеспецифичные, для опр. возраста не обязательно, главное, чтоб были стабильные.
Т.е. думаете, не оч страшно, что экспрессия заданного маркера (ов)не стабильная, лишь бы не было "кроссреактивности" по разным тканям?
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:40     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #29 множественное цитирование

ну, так для канцерогенеза - это просто клад, кто бы спорил.

но вот для счета времени деградации... shuffle.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:45     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #30 множественное цитирование

(NMR-guy @ 13.10.2015 16:36)
Ссылка на исходное сообщение  Общаясь с Вами действительно становится ясно почему. Там нет NGS. Работа хорошая и простая. Опубликован же он БЫЛ, как заметно по простому факту того, что его нашли и хотят проверить. А проверив - начать использовать.

Вы не задумывались почему меня приглашали рецензентом для десятков статей подобной тематики? lol.gif
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #31 множественное цитирование

(NMR-guy @ 13.10.2015 15:40)
Ссылка на исходное сообщение  
но вот для счета времени деградации... 
Во-первых не микроРНК для деградации, а деградация для PMI smile.gif А во-вторых я ж уже написал, что деградация ДНК для определения PMI, рассматриваю просто как из совокупных методов оценки. Вообще это ж научный раздел в рамках судебной генетики, который еще достаточно молод и многие маркеры в стадии "осмысления". Тут пока лучше обходиться без жестких запретов smile.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 17:56     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #32 множественное цитирование

(LMP @ 13.10.2015 16:48)
Ссылка на исходное сообщение  Во-первых не микроРНК для деградации, а деградация для PMI  smile.gif  А во-вторых я ж уже написал, что деградация ДНК для определения PMI, рассматриваю просто как из совокупных методов оценки. Вообще это ж научный раздел в рамках судебной генетики, который еще достаточно молод и многие маркеры в стадии "осмысления". Тут пока лучше обходиться без жестких запретов  smile.gif

Молод конечно и осмысливать еще нужно многое, но РНК маркеры уже неск. лет как успешно в судебных экспертизах используются smile.gif И миРНК тоже стали добавлять. Всё для tissue ID пока.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 18:21     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #33 множественное цитирование

(LMP @ 13.10.2015 16:36)
Ссылка на исходное сообщение
Нет, для тканей нужны именно тканеспецифичные, для опр. возраста не обязательно, главное, чтоб были стабильные.

Т.е. думаете, не оч страшно, что экспрессия заданного маркера (ов)не стабильная, лишь бы не было "кроссреактивности" по разным тканям?

Стабильные - в смысле устойчивые к деградации. Не обязательно, что все миРНК в этом смысле одинаковы. Помимо небольшого размера, что общее их свойство, свою роль играет связывание с белками и компартментализация в клетках, которые могут различаться. Собс-но, насколько я знаю, систематически толком не проверялось.
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.10.2015 18:29     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #34 множественное цитирование

(blij @ 13.10.2015 17:45)
Ссылка на исходное сообщение  Вы не задумывались почему меня приглашали рецензентом для десятков статей подобной тематики?  lol.gif

Да это очевидно по всему что вы (да, таких вас много) регулярно пишете.
А ваше хамское отношение к коллегам и их работам наверное в сочетании с вашими "лучшими" качествами даже приносит пользу и помогает на такой работе.

Жаль только что самое главное качество у своих хозяев и вдохновителей не переняли: они всегда смотрят на данные и то, что эти данные позволяют утверждать. Но уж никак не на личности авторов. Которые в приличных журналах анонимизируются для ревьюеров и неочевидны поначалу.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 18:44     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #35 множественное цитирование

(NMR-guy @ 13.10.2015 17:29)
Ссылка на исходное сообщение ... всегда смотрят на данные и то, что эти данные позволяют утверждать. Но уж никак не на личности авторов.

... если некие авторы (не буду говорить, что именно эти smile.gif) представляют результаты qPCR, полученные Такманом (с гидролизной пробой меченой FAM-TAMRA) в премиксе, содержащем SYBR green, то мне лично глубоко пофиг, что именно их данные якобы позволяют утверждать. После таких ляпов (а это только один из), мнение об их личностях у меня однозначное и ооочень далекое от уважительного )))
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 18:50     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #36 множественное цитирование

Стабильные - в смысле устойчивые к деградации.
Я-то под стабильностью вот что имел в виду. Цвета - это разные испытуемые, и маркер "ездит" вверх/вниз. Где-то совсем его не видно.

Сообщение было отредактировано LMP - 13.10.2015 18:54

Картинки:
картинка: 1.jpg
1.jpg — (62к)   

Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.10.2015 19:17     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #37 множественное цитирование

(LMP @ 13.10.2015 17:50)
Ссылка на исходное сообщение  Я-то под стабильностью вот что имел в виду. Цвета - это разные испытуемые, и маркер "ездит" вверх/вниз. Где-то совсем его не видно.

Если совсем не видно, то очевидно что стабильным его не назовешь ни в каком смысле, как и специфичным smile.gif
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.10.2015 13:28     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #38 множественное цитирование

(blij @ 11.10.2015 21:18)
Ссылка на исходное сообщение   надо на NGS, причем работать с дегр. ДНК.
А почему думаете, что НГС подключать надо, если с ДНК? Больше локусов/данные по митохондриальной ДНК добавляются? Кстати археологические образцы по мтДНК анализируют, а для менее древней - анализ ее деградации не подойдет?
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 14.10.2015 20:10     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #39 множественное цитирование

Да ладно вам НГС, давай полногеномку в каждую экспертизу! wink.gif Бабла больше попилите!

SYBR Green позволяет оценить общее количество ампликонов, а зонд - количество специфических по праймерам. Такмановские пары праймеров хороши когда образец стерилен, а не гнил 3 месяца под водой или грунтом и несет в себе кучу всего живого без гарантии несоответствия праймерам... wink.gif
Это как раз понятно почему они так делали. Скажите спасибо что с СИБРом а не с этидием wink.gif

Беда ваша в том что все что не понимаете - начинаете сводить к оскорблениям.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.10.2015 21:14     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #40 множественное цитирование

(NMR-guy @ 14.10.2015 18:10)
Ссылка на исходное сообщение  Да ладно вам НГС, давай полногеномку в каждую экспертизу! wink.gif Бабла больше попилите!
в каждую рано, а в 1-2 центрах можно, да уже и есть.
SYBR Green позволяет оценить общее количество ампликонов, а зонд - количество специфических по праймерам. Такмановские пары праймеров хороши когда образец стерилен, а не гнил 3 месяца под водой или грунтом и несет в себе кучу всего живого без гарантии несоответствия праймерам... wink.gif
Если вы про количественное тестирование то оно давно изобретено для форенсиков..
Это как раз понятно почему они так делали. Скажите спасибо что с СИБРом а не с этидием wink.gif
Это вы про что?
Беда ваша в том что все что не понимаете - начинаете сводить к оскорблениям.
А этого я вообще не понял eek.gif
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.10.2015 21:19     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #41 множественное цитирование

(LMP @ 14.10.2015 12:28)
Ссылка на исходное сообщение  А почему думаете, что НГС подключать надо, если с ДНК? Больше локусов/данные по митохондриальной ДНК добавляются? Кстати археологические образцы по мтДНК анализируют, а для менее древней - анализ ее деградации не подойдет?

У мтДНК копийность в сотни раз больше, чем у ядерной, соот-но шансов на ее обнаружение в археологических образцах больше, поэтому она так популярна. Можно ли это свойство митохондриалки для оценки деградации использовать не знаю, проблема все-таки в том, что копийность ее хоть и высокая, но варьировать может очень сильно.
NGS нужно, чтобы сразу кучу методических вопросов решить. Можно конечно классически взять длинный и короткий ампликон и по их соотношению оценивать деградацию. Но, непонятно какой именно длины ампликоны использовать и какие именно участки генома брать. Последнее может быть важным, очевидно, что sequence context будет роль играть (сайты связывания белков, сайты чувствительные к нуклеазам и пр.). Для РНК давно была идея испльзовать стабильные транскрипты или их участки для отбора устойчивых к деградации тканевых маркеров. А на днях статья появилась, где с помощью NGS такие стабильные транскрипты отбирались (кстати, от моих "любимых" авторов, но у них там похоже умный китаец завелся, надеюсь хоть он не лажает).

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): LMP
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.10.2015 21:22     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #42 множественное цитирование

(NMR-guy @ 14.10.2015 19:10)
Ссылка на исходное сообщение  
Беда ваша в том что все что не понимаете - начинаете сводить к оскорблениям.

Заметьте, я вот сейчас совершенно не понял, что Вы пытались сказать, но оскорблять не стану, просто проигнорирую. Хотя, это конечно надо умудриться ни одной буквы не угадать lol.gif
Участник оффлайн! NMR-guy
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 16.10.2015 09:58     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #43 множественное цитирование

(LMP @ 14.10.2015 21:14)
Ссылка на исходное сообщение  в каждую рано, а в 1-2 центрах можно, да уже и есть.
Если вы про количественное тестирование то оно давно изобретено для форенсиков..
Это вы про что? А этого я вообще не понял  eek.gif

Это я нашему "международному ревьюеру/Х-перду", который, как выясняется, не понимает зачем сибр сыпют при рыл-тайме одновременно с зондами... wink.gif И при этом все кто что-то непонятное делает у него клоуны.

(blij @ 14.10.2015 21:19)
Ссылка на исходное сообщение 
NGS нужно, чтобы сразу кучу методических вопросов решить.

Ага, а главный из этих "методических" вопросов которые нужно решить - на нее нужно (и МОЖНО!) много бабла. Причем скоро это кино закончится, как только безамплификационные секвенаторы появятся. Потому окно времени для того, чтобы "решить кучу методических вопросов"(с) резко сужается. shuffle.gif

Еще раз: деградация ДНК в разлагающихся биообразцах НЕЛИНЕЙНО связана со временем. Единственное что способно помочь в обезпечении временной линейности ее потери - это анализ замурованной куда-то намертво ДНК, где она недоступна для биоразложения и где выполняются (более-менее) условия для квази-стационарного ее распада (то есть распада с одинаковой скоростью во времени). Да и то, если температура в этих условиях меняется ожидать линейности функции распада сложно исходя из базовых химических и физических законов.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 10:47     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #44 множественное цитирование

(NMR-guy @ 16.10.2015 07:58)
Ссылка на исходное сообщение  Единственное что способно помочь в обезпечении временной линейности ее потери - это анализ замурованной куда-то намертво ДНК, где она недоступна для биоразложения и где выполняются (более-менее) условия для квази-стационарного ее распада
Ну вот мы исходно этот момент и начали обсуждать. Один вопрос если валидировать распад ДНК из разных источников (особенно мягких тканей), выдержанных при разных условиях и временных факторах, то - да здесь наверное сложно: определить какую-тот корреляцию. С другой стороны м/быть как раз-таки вариант с "замурованностью", например кости или зубы и при этом имеет место быть массовое захоронение одномоментно погибших и с момента гибели прошло не так много времени (например крупная катастрофа). Вот для такого момента, наверное можно было бы обойтись и без НГС. Ну по крайней мере у нас в стране, где судебные наборы от Илумины еще только обсуждаются. Даже пусть не очень точный будет метод: хотя бы прикинуть приблизительный период. Кстати, НГС-то не точно определяет тот же цвет глаз. Там же диапазон определяется, например в 100 раз вероятней серый, чем черный и т.д.
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 13:51     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #45 множественное цитирование

(LMP @ 16.10.2015 09:47)
Ссылка на исходное сообщение Ну вот мы исходно этот момент и начали обсуждать. Один вопрос если валидировать распад ДНК из разных источников (особенно мягких тканей), выдержанных при разных условиях и временных факторах, то - да здесь наверное сложно: определить какую-тот корреляцию. С другой стороны м/быть как раз-таки вариант с "замурованностью", например кости или зубы и при этом имеет место быть массовое захоронение одномоментно погибших и с момента гибели прошло не так много времени (например крупная катастрофа). Вот для такого момента, наверное можно было бы обойтись и без НГС. Ну по крайней мере у нас в стране, где судебные наборы от Илумины еще только обсуждаются. Даже пусть не очень точный будет метод: хотя бы прикинуть приблизительный период. Кстати, НГС-то не точно определяет тот же цвет глаз. Там же диапазон определяется, например в 100 раз вероятней серый, чем черный и т.д.

Цвет глаз - это вообще о другом тема. Сейчас Irisplex работает на SNapShot'ах, НГС совсем не обязателено и точность предсказания не повысит. Оно понадобится, чтобы одновременно генотипировать тысячи маркеров для других признаков, когда они будут установлены, причем маркеров разного типа.
Для оценки ДНС НГС может быть полезно, чтобы не заниматься бесконечными итерациями в подборе оптимальных маркеров и их характеристик, а сразу найти оптимальные. Потом для них можно будет подешевле и попроще методы подобрать. Для повышенной точности оценок использование НГС вовсе и не обязательно.
Опять-таки повторюсь, что саму идею об использовании ДНК для оценки ДНС считаю неперспективной. Замурована ли она в клыках мамонта или в его более мягких частях smile.gif Сами посудите, работ по ancient DNA полно, датировки возраста останков известны, но ничего аппликабельного для форензикс так и не предложено.
Соб-сно, по ancient DNA можете сами глянуть: http://rspb.royalsocietypublishing.org/con.../rspb.2012.1745
Лучшае модель (кстати, экспоненциальная, а не линейная) с R2=0.386 и это при том, что условия захоронения в достаточно стабильных условиях (это были кости моа из Новой Зеландии). Ошибка в статье не дается, но с таким R2 практическая ценность почти никакая. И это еще на удивление большая корреляция сравнительно с другими работами.
Вообще, статей-то по этой теме тьма, посмотритрите сами

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): LMP
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 13:53     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #46 множественное цитирование

(NMR-guy @ 16.10.2015 08:58)
Ссылка на исходное сообщение  Это я нашему "международному ревьюеру/Х-перду", который, как выясняется, не понимает зачем сибр сыпют при рыл-тайме одновременно с зондами...  wink.gif

Слушайте, постыдились бы. Сюда все-таки дети могут зайти, женщины, могут даже студенты заглянуть...
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 14:26     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #47 множественное цитирование

(blij @ 16.10.2015 11:51)
Ссылка на исходное сообщение  Цвет глаз - это вообще о другом тема. Сейчас Irisplex работает на SNapShot'ах, НГС совсем не обязателено и точность предсказания не повысит.
Кстати, раз заговорили про Irisplex, детерминирующие Снипы у скандинавов и, например, у центральных европейцев - сильно отличаются?
Участник оффлайн! blij
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 14:33     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #48 множественное цитирование

(LMP @ 16.10.2015 13:26)
Ссылка на исходное сообщение  Кстати, раз заговорили про Irisplex, детерминирующие Снипы у скандинавов и, например, у центральных европейцев - сильно отличаются?

В оригинальном Irisplex вообще ancestry на точность предсказания не влияет. Хотя, попыток улучшить много, может и нашли какие-нибудь популяционные маркеры, я уже плотно не слежу. В любом случае, улучшение, если и есть, то совсем небольшое.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 16.10.2015 15:53     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #49 множественное цитирование

NMR-guy, Было бы интересно почитать про применение qPCR с одновременным исользованием SYBR и Taq-манов. Но только со ссылками на статьи, методички производителей и тп.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 16.10.2015 16:48     Сообщение для модератора  Сообщение для куратора темы       Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #50 множественное цитирование

Да ладно вам smile.gif , ну погорячился человек, с кем не бывает?
Вот со мной один раз случай был - жесть. Звонит врачиха из областной по поводу консультаций при колоректальном раке и говорит: нужно больному ген ars проверить. Вот это был ппц... у нас сначала все мозги сломались, еще мы ей 4 раза перезванивали с одним и тем же результатом ("да его все знают и странно что вы...."), потом мы весь пабмед перевернули (от отчаяния). Пока наконец не дошло, что тетя английские буквы по-русски читает.....

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.04.24 14:58
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft