Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Asterix Постоянный участник |
Плохо растет Ну тут такое дело , сделал я два вектора для трансформации растений и поместил их в агробактерию. Один содержит ген ГФП, а другой ген фаговой трансгликозилазы которя понятно дело токсична для грам-отрицательный бактерий к коим и агробактер относится поэтому я вставил туда еще и интрон бета-глобиновый от кролика , ни чтоб не экспрессировался этот яд в бактерии. Так вот странное дело ... Требуется помощь специалистов и людей с опытом. В Е. Коли вообще проблем нет .. А в Агробактерии необычно как-то ... если засевать жидкую культуру, с антибиотиком конечно же , с чашки, то вроде обе агробактэрии растут , одна чуть хуже другой , ну та что с ядом чуть хуже растет. Но если сделать пересев из жидкой культуры опять в жидкую .. то наблюдается огромная разница ... та что с ядом растет существенно хуже чем та что с ГФП. Но ведь яд-то не может работать , там интрон стоит, или таки с этого интрона агробактерия таки синтезирует что-то ? типа как криптичерский промотор он работает? Там яд высокоэффективный , насколько молекул достаточно на бактерию. Вот что бы такое умное придумать по-этому поводу? так чтоб без сложных экспериментов , а то у нас денег мало на науку выделяют. |
MMM Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано MMM - 14.05.2019 09:01
|
Asterix Постоянный участник |
[ST-LS1 intron IV2 Potato locus light-inducible tissue-specific ST-LS1 concensus g-gt.....ag-g 2641 gcccaag---gtt tgtttctgct tctacctttg atatatatat aataattatc attaattagt 2701 agtaatataa tatttcaaat atttttttca aaataaaaga atgtagtata tagcaattgc 2761 ttttctgtag tttataagtg tgtatatttt aatttataac ttttctaata tatgaccaaa acatggtgat gtttag----ggaa intron DNA incertion poin is AGG /GGA Arg-Gly in the beginning of protein just after signal peptide to provide concensus environment for introne g/gt-----ag/g . ST-LS1 second intron IV2. Potato locus, light-inducible tissue-specific protein.] Единственно что может в конце интрона какой-то слабый промотор оказался и от него время от времени снимается функциональная копия последующей за ним части способная к трансляции в белок., но его достаточно чтоб мутить мне воду в агробактериях. вот этот например кусок похож на промотор [ ctaata tatg]. Или же сама РНК может интерферирует, хотя с чего бы , это синтетический ген, оптимизированный под экспрессию в растениях ,а не природный из фага , неужели случайно так получилось? |
MMM Постоянный участник |
(Asterix @ 14.05.2019 14:51) Там стоп-кодон на стоп кодоне , как его можно пройти рибосоме без терминации трансляции? Сложно себе такое представить. Игра напоминает игру в военном училище. Даю новую вводную: Интрон не интрон, а поли стоп кодон. Ну, в общем, мы поняли - дело темное. Собственно вы зачем этот ген ставили под промотор, если вакм не нужна его экспрессия? Его можно было вообще не в экспрессирующий вектор вставить. Сообщение было отредактировано MMM - 14.05.2019 14:27 |
Asterix Постоянный участник |
Этот яд гидростатически взрывает бактерию разрушая ее клеточную стенку. Ну так же как и фаг это делает , Это фаговый литический фермент с многократно усиленным потенциалом и измененым функционалом способный проникать через внешние мембраны бактерий в периплазматическое пространство и проедать дыру в клеточной стенке. Вот здесь можно подробно почитать про эти химерные антиибактериальные белки, если интересно , чтоб мне оттуда сюда не переписывать научно-популярную часть. Там они красиво все рассказывают и показывают. Кстати наш ген оригинально приехал из ИБХ, они там много с фаговыми литическими белками работают. Ищут их и характеризуют. Сообщение было отредактировано Asterix - 14.05.2019 15:10 |
Asterix Постоянный участник |
|
MMM Постоянный участник |
(Asterix @ 14.05.2019 15:42) Ген предназначен для экспрессии в растениях после переноса его туда, в геном , методом агробактериальной трансформации. Он находится под растительным вирусным промотором и в агробактерии экпрессироваться не должен Понятно! Судя потому что вы описываете он там и не экспрессируется. А экспресируется что то другое, но тоже не очень вкусное. |
Asterix Постоянный участник |
И мои ГМО показывали бы что их хрен сьешь... зубы коротки |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |