Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
тугодум IP-штамп: frQtbDwjgPMwo гость |
Скажите пожалуйста, при измерении активности фермента в U, всегда берется насыщающая концентрация субстрата (несколько Km)? Если да,то почему в определении 1 U это не пишется? и чем тода активность фермента отличается от числа оборотов? Если нет, то какая тогда берется концентрация субстрата, ведь начальная скорость от нее зависит. спасибо) |
тугодум IP-штамп: frDQwa9k7riYg гость |
Неужели никто не поможет разобраться? Нужно померять активность выделенного фермента в U, не знаю как это сделать, интересны общие закономерности.... |
bukach Постоянный участник Geneva, Switzerland |
(тугодум @ 05.05.2008 11:50) Здравствуйте! Скажите пожалуйста, при измерении активности фермента в U, всегда берется насыщающая концентрация субстрата (несколько Km)? Если да,то почему в определении 1 U это не пишется? и чем тода активность фермента отличается от числа оборотов? Если нет, то какая тогда берется концентрация субстрата, ведь начальная скорость от нее зависит. спасибо) под активностью подразумевается максимально возможная скорость в данных условиях (температура, рН и т.д.). а максимальная скорость достигается при насыщающих концентрациях субстрата, тут вы правы, т.е. фактически Vmax. однако, Vmax зависит от количества фермента, поэтому энзимологи пользуются не просто U (мкмоль субстрата/мин), а удельной активностью - U/мг белка. теперь касательно "нескольких Km". обычно берут концентрацию субстрата, равную 10Km при этом скорость составляет (теоретически для михаэлисовских ферментов) 91%Vmax. однако взять из статьи значение Km, намутить в пробе концентрацию в десять раз большую, померить скорость и на этом успокоиться не получится. во-первых, потому, что значение Km для вашего фермента может отличаться от литературного (и хорошо, если в меньшую сторону), сл-но скорость вы будете мерить не при 10, а при неизвестно скольки Km. поэтому по-человечески надо построить зависимость скорости (мкмольS/мин) от концентрации субстрата от примерно 0,2 до 10 Km (фактически кривую Михаэлиса, если конечно ваш фермент подчиняется михаэлисовской кинетике) и убедиться в том, что ваши "10Km" действительно близки к насыщающим концентрациям и нет никаких выкрутасов типа субстратного ингибирования. из кривой после линеаризации получите Vmax (заодно и Km ) - вот и будет ваше желанное U а если поделите на количество мг белка в пробах, то и удельную активность. а если на моли фермента - то число оборотов. для немихаэлисовских похитрее, но идея та же. но начинать следует с подбора количества фермента - оно должно быть таким, чтобы вы уверенно и достоверно мерили начальную скорость и при 10Km (пока предполагаемых) и при 0.2 не ждали бы полдня. еще могу посоветовать почитать книжку Скоупса "методы очистки белков" - там про определение активности ферментов достаточно просто изложено. да и вообще книжка полезная). в сети она есть, но если не найдёте - могу прислать по мылу. ну и других книжек про ферменты почитать тоже не вредно будет. Диксон и Уэбб - классика )) |
тугодум IP-штамп: frQtbDwjgPMwo гость |
книгу Скоупса я нашла, там действителньо все понятно написано, а Диксона и Уэбба смотрела - там именно про единицы активности как-то мутно... |
Barselona |
Подскажите, а что такое LVU? У ферментов для промышленности активность часто выражают в LVU, а что это не могу найти ( |
Tom1 Постоянный участник |
(Barselona @ 11.04.2018 01:30) Добрый день! Подскажите, а что такое LVU? У ферментов для промышленности активность часто выражают в LVU, а что это не могу найти ( One LVU is the amount of protease that increases casein fragments in 20 ml of a filtrate of a 4% casein solution, equivalent to the action of 5.75 x 10-3 ml of 0.1 N NaOH (Determination of the activity of proteases according to Lohlein-Volhard: A. Kunzel, Gerbereichemisches Taschenbuch, 6th Edition, Dresden and Leipsig 1955) und |
Barselona |
(Tom1 @ 11.04.2018 16:25) One LVU is the amount of protease that increases casein fragments in 20 ml of a filtrate of a 4% casein solution, equivalent to the action of 5.75 x 10-3 ml of 0.1 N NaOH (Determination of the activity of proteases according to Lohlein-Volhard: A. Kunzel, Gerbereichemisches Taschenbuch, 6th Edition, Dresden and Leipsig 1955) und Большое спасибо! |
vadimchik152a Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: frpXPq5TOmUHs гость |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
vadimchik152a Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |