 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* TransformAid Bacterial Transformation Kit -- В чем секрет? --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость  |
 22.10.2013 20:00
Упомянутый в заглавии набор весьма удобен в использовании, ибо позволяет получать компетентные клетки быстро, и что, наверное, еще более важно результаты он дает более-менее постоянные. Проблема, как всегда, в деньгах. Стоит дороговато, учитывая, что ничего кроме растворов он не содержит. Денег как всегда мало, а работать нужно много. Я пытался найти подобную экспресс-методику в интернете, но везде попадается только классика в различных вариантах. Может быть, кто-нибудь кинет в меня подходящей ссылкой? На раскрытие коммерческой тайны Ферментаса я особо не рассчитываю, хотя воспринял бы ее с балгодарностью. PS: с классикой хорошо знаком, но в больно уж много времени уходит, к тому же всегда есть шанс, что получится какая-нибудь фигня с низкой эффективностью, и тогда опять все делать заново. |
 shipПостоянный участник Moscow |
22.10.2013 21:01
(Notostira @ 22.10.2013 18:00)  PS: с классикой хорошо знаком, но в больно уж много времени уходит, к тому же всегда есть шанс, что получится какая-нибудь фигня с низкой эффективностью, и тогда опять все делать заново. уж больно много - это один день ненапряжной работы. не вижу никаких преимуществ в этом ките. каждый раз компетешки делаются с нуля, написано или из колонии или из овернайт культуры. а откуда вы их возьмете? это значит надо постоянно иметь живую культуру? а по классике -наморозил аликвот и достаешь когда надо, никаких телодвижений, время на трансформацию - 1.5 часа, эффективность те же 10 в 7. да один кит на 40 реакций - это маловато. можно сделать scale-up классического протокола - и вообще наморозить вагон аликвот, если в планах много трансформаций. если денег мало - а работать много, то классика как раз для вас. если уж хотите чттото заказывать - то лучше тогда сразу готовые компетентные, если есть возможность. по меньшей мере, эффективность будет 10 в 9 или чтото около того. |
|
kloun IP-штамп: frfmrU8oUAU2w гость |
23.10.2013 05:52
Что значит дорого - копейки, если сравнить со всем остальным) Любая обратная транскриптаза стоит намного дороже. |
|
R.J. Dio Постоянный участник |
23.10.2013 10:01
|
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
23.10.2013 13:09
|
|
xenopus Постоянный участник Moscow |
23.10.2013 14:10
(R.J. Dio @ 23.10.2013 08:01) почему-то home-made клетки более х10в7 не выходятУ кого как 
|
|
R.J. Dio Постоянный участник |
23.10.2013 14:14
|
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
23.10.2013 15:24
 Сообщение было отредактировано -Ъ- - 23.10.2013 15:24 |
|
Tom1 Постоянный участник |
23.10.2013 17:32
(-Ъ- @ 23.10.2013 05:24) Ясен пень чистота реактивов - попробуйте трансформировать неочищенной от токсинов плазмидой... Коллега вы имели ввиду трасформацию млеков???? |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
23.10.2013 19:17
(Tom1 @ 23.10.2013 18:32) Коллега вы имели ввиду трасформацию млеков????Ах да, о чем это я - тема же о Bacterial Transformation. |
|
Notostira IP-штамп: frgvky0F7mhh2 гость |
25.10.2013 01:36
Пока вернулся к классике. Жаль что секрет не раскрыт. ЗЫ: набор от Zymo Research никаких преимуществ не дает. Та же тягомотина, что и обычно, только еще надо за это доп. деньги платить. Transformaid реально экономит время. |
|
R.J. Dio Постоянный участник |
25.10.2013 12:28
|
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
27.10.2013 18:04
|
|
R.J. Dio Постоянный участник |
27.10.2013 22:28
|
|
ASDF Постоянный участник |
27.10.2013 22:33
(Notostira @ 25.10.2013 02:36) ЗЫ: набор от Zymo Research никаких преимуществ не дает. Та же тягомотина, что и обычно, только еще надо за это доп. деньги платить. Transformaid реально экономит время. А какая тягомотина ???? Добавил плазмиду к клеткам и сразу на теплую чашку что может быть проще  Это реально хороший кит, я лично не видел большей эффективности, да с такой простотой.... Причем у меня эти киты просроченные на год-два не хуже работали. |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
28.10.2013 05:26
(R.J. Dio @ 27.10.2013 14:28) в электронном - нет. Кто бы оцифровывал книгу 90-х годов издания? Не Пелевин, чайона была на дисках молбиола, но ничего супербыстрого в ней нет я посмотрю, может и найду |
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
29.10.2013 22:06
|
|
Vassili Постоянный участник |
30.10.2013 14:16
Файл/ы:
|
Novoe_v_Klonirovanii_DNA.djvu
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
30.10.2013 14:26
|
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
30.10.2013 14:33
только оптические плотности я беру большие, он и при OD>1 неплохо работает, и вместо DMSO - 10% глицерин мне лично эффективности хватает на все, всех дел на 5 минут, дальнейшая процедура 1 час (для ампициллина, хлорамфеникола), полтора-два для некоторых других маркеров |
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
30.10.2013 17:26
О да, с Чанга я как раз начинал. Vassili, спасибо за книжку. Жалко только что там этих методов в нет. |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
30.10.2013 17:29
|
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
31.10.2013 03:07
(Esya @ 30.10.2013 17:29) а чем не понравился?Да все с ним в порядке. Однако потом захотелось побыстрее, тем более что клонировать приходилось изредка и стал пользоваться TransformAid-ом, который очень неплохо выручал в условиях недостатка времени. Теперь вот стало нужно больше клонировать больше. Посмотрел вокруг (лаборатория другая), а PEG-а нет. Все, TSS не приготовить. Вот пришлось перейти на Инуэ, по крайней мере, пока. При выращивании на 37 градусах клетки эффективность получается такая же как и у Чанга. В принципе те же эллипсоиды только сбоку. Но оптическую плотность клеток измерять ненавижу, особенно если для этого надо пробегать половину здания туда и обратно. Надо будет попробовать кривую роста построить и снимать культуру по часам. Ну или научиться на глаз определять  Но вообще киты, конечно, развращают, это да. |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
31.10.2013 03:23
для кальция и тсс (и для индукций) я на глаз плотность определяю
|
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
31.10.2013 04:20
|
|
Notostira IP-штамп: frzLlyCkNUswU гость |
31.10.2013 04:21
|
|
distemper Постоянный участник |
04.11.2013 08:08
|
|
watchesbiz Постоянный участник |
 04.12.2021 08:29
|
|
watchesonline89 Постоянный участник |
28.12.2022 11:31
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.