Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
bpevhel |
GuSCN - 120g Tris hydrochloride - 0.1 M 100 ml EDTA - 0.2 M Triton X-100 - 2.6 g HCl - доводила до pH-8 Такой же pH в растворе (EDTA и азид Na) с магносорбентами. Пока проигрыш перед Promega на 3-5 циклов - много! ДНК теряется. Подскажите пожалуйста, как можно модифицировать лизирующий или, может быть, кому-то по секрету известен его состав от Promega? |
Pit Москва |
Я бы копал в сторону отмывок, большинство потерь именно там происходит. И не забывайте, что гуанидин сильнейший ингибитор ПЦР, так что если отмывка недостаточно эффективна, вы всегда будете лихо терять в чувствительности. |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
ship Постоянный участник Moscow |
и вот чтото мне кажется, что уже лет 10-20 назад вопрос выделения днк из микобактерий для последующего проведения ПЦР был уже решен. |
bpevhel |
Pit. Пока дополнительная отмывка результат не улучшила. Попробую еще повторы, может, и правда. МММ. Нашла рецепт: ЭДТА уменьшить до 0.02 М и Triton - раза в 2-3 - так корректнее? Ship, вопрос выделения решен с использованием буржуйских наборов, а мне надо свое, при крайне малом количестве агента в биоматериале (мокрота, лаваж). |
ship Постоянный участник Moscow |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
или нужен стандартный метод, чтобы можно было даже мою маму взять на работу днк чистить? |
bpevhel |
|
Esya Постоянный участник PA, USA |
вот над этим и подумайте бесколоночный метод никогда вам не даст такой же воспроизводимости как набор с колонками
|
ship Постоянный участник Moscow |
(bpevhel @ 15.05.2014 13:51) Нужно снизить потери той, что есть, с использованием своего набора. Доморощенными выделяют, только вот их эффективность при работе с клиническими образцами различается. но и сами клинические образцы всегда различаются по количеству материала, ибо все пациенты разные, забор производят разные люди и тп. ну сделайте в протоколе поболее циклов в чем проблема? у набор на что расчитан? количественное определение или есть-нет? |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Да, начальство Ваше я бы уволил за разбазаривание средств по изобретению велосипеда . |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Esya @ 15.05.2014 16:45) переформулируйте задачу, пожалуйста... так что вам надо, больше днки, чище, или быстрее из многих образцов?? или нужен стандартный метод, чтобы можно было даже мою маму взять на работу днк чистить? Увы, Вашей маме не повезло. Нынче магносорбенты модно на роботах юзать. И о существовании "качества" препарата пока не догадываются. Речь пока о выходе ДНК в циклах. |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(bpevhel @ 15.05.2014 16:28) Ship, вопрос выделения решен с использованием буржуйских наборов, а мне надо свое, при крайне малом количестве агента в биоматериале (мокрота, лаваж). Тогда работайте над получением лизата, зачем городить огород? |
IMK Участник |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |