Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Chrus Участник |
А можно использовать немеченый (неконъюгированный с FITC, например) изотип-контроль? Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела? Почему же все-таки все используют меченые изотип-контроли? И зачем производят немеченые? |
Annabel Участник Бостон, США |
Меченые изотип-контроли используют не для забития Fc связывания, а чтобы учесть в общем флуоресцентном фоне долю неспецифического связывания меченого антитела И связывания антитела Fc-рецеторами. В ИДЕАЛЕ изотип-контроль всем таков же, каково ваше меченое антитело, только без специфики Fab. В РЕАЛЬНОСТИ все бывает по-разному Немеченые изотип-контроли кто-то использует на первом этапе двуступенчатого окрашивания, параллельно с немечеными специфическими антителами. Та же история - чтобы оценить, сколько к клетке прилипнет неспецифики, которая на втором этапе окрашивания вся засияет как настоящая .
|
Chrus Участник |
|
Annabel Участник Бостон, США |
|
Chrus Участник |
|
Леонид В Постоянный участник Квебек |
(Chrus @ 28.05.2013 05:58) можно и нужно как контроль для непрямой иммунофлюоресценции (Chrus @ 28.05.2013 05:58) Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела? можно, но не понятно зачем. Вам забить=блокировать или проконтролировать? если забить, то надо забивать (специфику = эпитоп да не тот / специфику другого конца (FC) / неспецифику). Соответственно использовать специфический белок, пептид / иммуноглобулин / BSA, желатин, температуру, детергент и паки и паки проконтролировать это радикально из другой оперы и именно для этого (Chrus @ 28.05.2013 05:58) (Chrus @ 28.05.2013 05:58) как контроль для непрямой ИФ
|
Dudley95 |
|
seomind Постоянный участник |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
seomind Постоянный участник |
|
seomind Постоянный участник |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
seomind Постоянный участник |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
shzz IP-штамп: frJ29JTBlItMA гость |
|
Luz IP-штамп: frYUDxQtTmM0s гость |
|
« Предыдущая тема · Клеточные технологии · Следующая тема » |