molbiol.ru -> Димеры праймеров

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Димеры праймеров -- Димеры в ГЦ богатых праймерах --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

AlbertGainetdinov

01.06.2021 14:57

URL #1

Добрый день уважаемые коллеги!
Подскажите, получаю постоянные димеры.
Помогите понять, с чем связано?
На фото форез после ПЦР:первая колонка маркёр, 16 последующих-образцы, последняя колонка тоже маркер.

Размер ампликонов около 100 п.н.
F: GATCTGCCCTGCACTTCG

R:GCTCATCCCACACCGCTA
Праймеры подобраны к бактерии туберкулезной палочке (не мной). Моя задача получить соотвествующий ожидаемому выход продукта в 100 п.н. без димеров и шмеров.

Маркер длин 100+bp
Протокол Амплификации:
Предденатурация 95-5 минут, денатурация 94-15 секунд,отжиг 56-15 секунд,элонгация 72-40 секунд.
Использую готовую пцр смесь screen mix evrogen. Готовлю общую смесь на 25 мкл: 15 мкл (Screen mix 5 мкл+ каждый праймер по 2,5 мкл+h20 5мкл) и 10 мкл днк матрицы(рекомендовано было добавлять всего 5 мкл матрицы днк в инструкции к смеси screen mix,но в таком случае выхода пцр продукта практически не было).

Сообщение было отредактировано AlbertGainetdinov - 02.06.2021 00:23

Файл/ы:

08_05_21__6.bmp
размер: 1.27мб
кол-во скачиваний: 49

08_05_21.bmp
размер: 1.27мб
кол-во скачиваний: 41

semi
Постоянный участник
Москва

06.06.2021 16:57

URL #2

Какая концентрация праймеров в реакции? Указанные вами мкл делу не помогают, так как непонятно, какая у вас концентрация стока праймеров.
Снизьте до 150-200 nM.
И зачем так долго держать реакцию на элонгации?

Сообщение было отредактировано semi - 06.06.2021 16:57

watchesbiz
Постоянный участник

10.09.2021 15:32

URL #3

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

ASDF
Постоянный участник

10.09.2021 20:01

URL #4

Димеров не видно на форезе. Неспецифика на 300 но.

Guest
IP-штамп: frpXPq5TOmUHs
гость

12.09.2021 11:08

URL #5

It only takes a few minutes to apply. You can now bet on บาคาร่า various casino games. More importantly, สูตรบาคาร่า You can apply for free, absolutely free WM CASINO online gambling game at the service user Must be known very well, of course, because the game is easy to play. The rules are not complicated. Suitable for new players who just pay attention to invest in casinos today are ready to open for service to everyone in full, with dealers (Dealer) more than 100 beautiful girls waiting to rotate To provide you with the most wonderful service 24 hours a day.
of charge. When you become a member with allbet บาคาร่า and don't forget to come and receive สูตรบาคาร่าonline gambling game at the service user Must be known very well, of course, because the game is easy to play. The rules are not complicated. Suitable for new players who just pay attention to invest in casinos today are ready to open for service to everyone in full, with dealers (Dealer) more than 100 beautiful girls waiting to rotate To provide you with the most wonderful service 24 hours a day.

many benefits as well, it is definitely worth the price.

4. You can try casino games for free. Allbet Once you have successfully subscribed But still notAll bet new online gambling service website that has stepped into providing full service to Thai players. You can apply for membership To play at 123VEGA ready to serve you in full formula. full betting All in one website including famous online casino camps gathered from all over the world Our website has the readiness and professional potential to meet the needs of Thai players as much as possible. If you want to cheer for the right team, your favorite sport, 123VEGA has it all for you. Service with modern system

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

22.09.2021 12:37

URL #6

1. Пара праймеров близка к идеальной, но, правда, есть один селф-димер F-праймера, который можно устранить убрав концевой G и, соответственно, начальный G R-праймера для выравнивания Т пл.
2. В данном ките нет хот-старта (как можно такое продавать...

), так что "горбатого..." сами знаете, пардон.
3. Для GC-богатых праймеров (и матрицы M.tub) слишком низкая темп. отжига 56 град. Можете смело довести до 60-62 град и, к тому же, в составе смеси не вижу денатурирующих компонентов, снижающих Т пл. Или же все параметры остаются как есть, но добавляете в смесь ДМСО хотя бы до 5%.
4. Согласен с semi - рекомендую сократить вдвое время на элонгации.
пы сы: Картинки у Вас отвратительного качества, пардон.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.