Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


страницы (9): < 1 2 3 4 5 > »  
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 30.11.2007 17:24     Сообщение для модератора       

Это камера хеликоновская, если мне не изменяет память, сходите на их сайт, если там недостаточно материала. Звоните прямо им, они вам все должны рассказать, тем более они очень гордятся, что выпускают эти изделия.
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 30.11.2007 19:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

точно, хеликоновская.Спасибо за идею, но на сайте у них ничего про проливку и слова не написано. Зато про то как готовить гели, просто учитайся. :)
Guest
IP-штамп: fr0CXODQM332o
гость



 прочитанное сообщение 30.11.2007 20:50     Сообщение для модератора       

готовите агарозу 2%
плавите
собираете камеру (стекла-спейсеры-зажимы)
расплавленную агарозу наливаете на канавки
пока она не застыла, ставите собранные стекла нижней частью прямо в нее
ждете, пока застынет, не трогаете, заливаете гели
Guest
IP-штамп: fr0CXODQM332o
гость



 прочитанное сообщение 30.11.2007 20:50     Сообщение для модератора       

готовите агарозу 2%
плавите
собираете камеру (стекла-спейсеры-зажимы)
расплавленную агарозу наливаете на канавки
пока она не застыла, ставите собранные стекла нижней частью прямо в нее
ждете, пока застынет, не трогаете, заливаете гели
Участник оффлайн! polly




 прочитанное сообщение 30.11.2007 21:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

спасибо, но имела в виду не то как делать агарозную пробку, а как сделать так, чтобы камера не текла :)
Участник оффлайн! ужик




 прочитанное сообщение 01.12.2007 18:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Кто-нибудь занимается 2-D электрофорезом (первое направление по заряду, второе - по Лэммли). у меня молекулярные массы сильно отличаются от одномерного.
guest: Гость
IP-штамп: frHVRS/ao5Sko
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 16:35     Сообщение для модератора       

Кто может за вознограждение провести форез
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 17:59     Сообщение для модератора       

--Кто может за вознограждение провести форез

Я!
Ъ
IP-штамп: frNwv0U1khjS.
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 18:19     Сообщение для модератора       

(guest: Гость @ 06.12.2007 15:35)
Ссылка на исходное сообщение  Кто может за вознограждение провести форез

И я тоже lol.gif lol.gif lol.gif Вознаграждение какое будет? confused.gif
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 06.12.2007 21:36     Сообщение для модератора       

Ять! Зачем тебе целый воз гражданских ног?
И вообще в очередь. Вас здесь нестояло.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.12.2007 21:45     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Почем опиум для народа?????
"Восприемник" сходил бы лутше в топик что кислород может как быший химик что-то умное сказал бы....
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 06.12.2007 23:47     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ

(guest: Гость @ 06.12.2007 16:35)
Ссылка на исходное сообщение  Кто может за вознограждение провести форез


а Вам какой? по Лэммли, трициновый, по Шванку и Мункресу, по Дэвису, по Шагеру (blue и colorless), по Веберу и Осборну, нативный в гомогенной системе (несколько разных), изоэлектрофокусирование в нативных или денатурирующих условиях? или ещё какой? возможно в градиентных гелях, по желанию в присутствии мочевины.

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): distemper, grumbler
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 07.12.2007 11:16     Сообщение для модератора       

--Восприемник" сходил бы лутше в топик что кислород может как быший химик что-то умное сказал бы....

Ты! Думаешь я его не читал. пока ничего красивого в голову не лезет, вот и молчу в тряпку.
Участник оффлайн! Ёлкин

Пермь - Москва - Пущино



 прочитанное сообщение 10.02.2008 22:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Люди знающие! Сегодня дал студентам сделать PAGE по прописи с этой странички, вроде как они все сделали правильно, но вот форез идет безобразно: бромфеноловый синий расплывается по вертикали, и чуть ниже него идет тонкая красно-оранжевая полоса.

Вопрос: за что именно проугать студентов, если завтра утром я буду переделывать этот форез вместо того чтобы счастливо ставить блот? confused.gif

PS: Сам по этой прописи регулярно ставлю форезы, все прекрасно получается.

Картинки:
 картинки уже нет на сайте: PAGE_unusual.jpg PAGE_unusual.jpg — (46.09к) 10.02.2008 — 24.02.2008  
Участник оффлайн! bukach
Постоянный участник
Geneva, Switzerland



 прочитанное сообщение 10.02.2008 22:46     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  ICQ

имхо, просто перебухали бромфенолового. сие не есть смертельно.
покрасьте гель для полной уверенности в том, что всё ок.

з.ы. и вот нечего детей заставлять по воскресеньям работать wink.gif
Guest
IP-штамп: frPanb9Lvzu1g
гость



 прочитанное сообщение 10.02.2008 22:55     Сообщение для модератора       

Это SDS-PAGE, судя по тонкой нижней полосе? - так идут мицеллы SDS и все, что туда налипло. Бромфенол не сконцентрировался, очевидно - или много соли в образце, или "не получилось" pH-скачка, или там, где должен быть только глицин,по ошибке появился и хлор ( кстати, может, старый верхний буфер использовали, смешав с нижним от предыдущего фореза ?).
Участник оффлайн! HACTEHKA




 прочитанное сообщение 26.02.2008 19:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Подскажите, пожалуйста.

При проведении электрофореза идет все как нужно, но при окраске Кумасси выясняется, что снизу есть большая темная синяя полоса примерно 1,5 см, и по всей видимости, белки идут только до ее начала.

При вестерне на границе с началом этой полосы определяются белки по всей ее длине на одном уровне вне зависимости от их молекулярной массы.
С чем это может быть связано?
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 26.02.2008 19:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

это называется фронт миграции
Участник оффлайн! HACTEHKA




 прочитанное сообщение 26.02.2008 19:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

(comp3v @ 26.02.2008 19:28)
Ссылка на исходное сообщение  это называется фронт миграции

И как его избежать? При этом при прохождение электрофореза, если следить за краской, то все в порядке, а на самаом деле белки не дошли.
Участник оффлайн! comp3v
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 26.02.2008 19:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

да никак не избежать, просто гнать дольше. В норме фронт миграции - идёт вместе с бромфеноловым (то есть то что вы видите как полосу краски), но часто оказывается что реальный фронт белков чуть выше (у меня это обычно бывает с маленькими биорадовскими гелями). Не знаю, как это объясняется, я просто гоню так чтобы краска полностью вышла, и всё. А если интересующий белок маленький и идёт в этой самой области, то надо процентность геля побольше брать.
Это всё если, конечно, мы об одном явлении говорим.
Участник оффлайн! HACTEHKA




 прочитанное сообщение 26.02.2008 23:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Да-да, именно маленькие биорадовские гели))
Участник оффлайн! Бору
Постоянный участник
Киев. обл., Украина



 прочитанное сообщение 28.02.2008 22:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Вертикальная камера, розделяющий гель залит, но не очень плотно пристает к боковым стенкам (те которые не стеклянные), после заливки концентрирующего тот уходит в образованные щели, и доходит до самого низу. Это не страшно?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.02.2008 22:56     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

рАзделяющий...
Не смертельно....
Guest
IP-штамп: fr4I3qoC2Qq4.
гость



 прочитанное сообщение 29.02.2008 01:20     Сообщение для модератора       

(Бору @ 28.02.2008 21:02)
Ссылка на исходное сообщение  Вертикальная камера, розделяющий гель залит, но не очень плотно пристает к боковым стенкам (те которые не стеклянные), после заливки концентрирующего тот уходит в образованные щели, и доходит до самого низу. Это не страшно?


А как это выглядит в концентрирующем геле? У Вас при этом крайние лунки целые получаются, или вытекают?
Участник оффлайн! Бору
Постоянный участник
Киев. обл., Украина



 прочитанное сообщение 29.02.2008 08:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Гель вытекал по краям немного, периодически доливали, пока не застыл. Все это случилось я думаю по двум причинам: 1) слишком рано начали заливать конц. гель, а разделяющий еще не засыл полностью 2) когда удаляли слой воды над розд. гелем вылили его полностью (в том числе и незастывший розд гель из всех щелей) а надо было просто промокнуть бумагой сверху и все.

Сообщение было отредактировано Бору - 29.02.2008 08:30
Guest
IP-штамп: fr4I3qoC2Qq4.
гость



 прочитанное сообщение 29.02.2008 10:34     Сообщение для модератора       

Попробуйте, когда вставите гребенку, залепить по краям пластилином (чтобы пространство между крайней лункой и спейсерами было закрыто небольшими кусочками пластилина). Делать это надо сразу, как вставите гребенку. Мне помогает.
Участник оффлайн! Ёлкин

Пермь - Москва - Пущино



 прочитанное сообщение 25.03.2008 21:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Маленькое дополнение: титровать TGB не надо.
Участник оффлайн! Beonick
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.04.2008 12:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Как готовить пробы для SDS фореза из ткани? По одной прописи к гомогенату нужно кроме ингибитора протеаз прибавлять SDS, что потом мешает при определении белка. Кроме того SDS есть в Loading buffer, подскажите плз нужен он вообще при приготовлении проб где то, кроме как в Loading buffer, и как добиться нужного уровня разрушения клеток и екстракции белков, если исключить его?

Сообщение было отредактировано Beonick - 02.04.2008 13:17
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 02.04.2008 13:50     Сообщение для модератора       

--нужен он вообще при приготовлении проб где то, кроме как в Loading buffer,

Не нужен "кроме, как в Loading buffer"

--и как добиться нужного уровня разрушения клеток и екстракции белков, если исключить его?

Дезинтеграция, дезинтеграция и еще раз дезинтеграция, Батенька. Любыми доступными спосбами, это архиважно для текущего момента. smile.gif

Ну, и не забывайте о неионных детергентах и 8М мочевине, но последнюю все же лучше перед нанесением подразбавить раза в два.
Участник оффлайн! Бору
Постоянный участник
Киев. обл., Украина



 прочитанное сообщение 03.04.2008 21:39     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

При проведении электрофореза под лунками в конц геле выпали белые полосы осадка; после окрашивания проявился только размытый тяж от начала разд. геля.
user posted image

Полагаю причина в использованиии не оч. свежего ДСН. (В растворе буфера для образцов где конц. ДСН 2% находится в виде осадка при комнатной температуре). Как его перекристализируют?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 04.04.2008 11:54     Сообщение для модератора       

Полагаю что вы забыли ДСН в электродный буфер добавить..

Перекристализовывают из горячего спирта.
Участник оффлайн! Бору
Постоянный участник
Киев. обл., Украина



 прочитанное сообщение 04.04.2008 12:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

300г на 7 л спирта, спасибо я уже нашел.
Нет, в электродный буфер и гель вносили 0,1% ДСН. Если мне не изменяет память smile.gif
Гость
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 09.04.2008 18:51     Сообщение для модератора       

МММ, подскажите, пожалуйста, почему при форезе по Лэмли может закисляться нижняя часть геля? Гоню минигель, на последних миллиметрах часть фронта BpB желтеет; после окраски кумасси видно, что в том месте, где гель закислился, белки останавливаются.
Акриламид свежий, pH всех растворов в норме. Сомнения вызывает только буфер для нанесения - рН 6,9
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 09.04.2008 20:21     Сообщение для модератора       

--на последних миллиметрах часть фронта BpB желтеет; после окраски кумасси видно, что в том месте, где гель закислился, белки останавливаются.

ЭЭЭ, часть фронта? Поперек поля или вдоль?

Вообще-то после вхождения в разделяющий фронт разделяется на 2 границы впереди бежит хлор, сзади глицин, мелкие белки бегут с глицином БФС бежит между ближе к глицину(если не изменяет память). Бывает ,что БФС грязный и у него появляется желто-коричневая полоса(примеси) во фронте глицина.
Гость
IP-штамп: frGqyYT8IU7LU
гость



 прочитанное сообщение 09.04.2008 20:37     Сообщение для модератора       

---ЭЭЭ, часть фронта? Поперек поля или вдоль?

Часть фронта. Поперек поля.
Другими словами, желтеет не часть БФС по всей ширине форнта, а весь БФС в какой-то части фронта.
Участник оффлайн! Dimych
Постоянный участник
Kr-sk - Puschino - NYS - Calgary... Круг замкнулся



 прочитанное сообщение 10.04.2008 04:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Бору @ 03.04.2008 18:39)
Ссылка на исходное сообщение 
Полагаю причина в использованиии не оч. свежего ДСН. (В растворе буфера для образцов где конц. ДСН 2%  находится в виде осадка при комнатной температуре). Как его перекристализируют?

Эээээ.... Не очень свежий это как? Годами стоит на полке в растворе и ничего ему не делается. В сухом виде десятилетиями. Довольно стабильная фиговина. Не майтесь дурью с перекристаллизацией. Осадок в 2% растворе при КТ наводит на мысли о наличии в растворе калия. Когда муть видна? При смешивании с образцом? Или "на клетке с буйволом надпись слон". В том смысле, что у Вас вместо ДСНа непонятная смесь.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Бору
Участник оффлайн! Бору
Постоянный участник
Киев. обл., Украина



 прочитанное сообщение 10.04.2008 19:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ

Да счет идет именно на десятилетия smile.gif
Для того чтобы сделать 2%-ный раствор надо нагревать, при комнатной температуре выпадает осадок. Калия нигде не даем.
После кипячения с пробами (и остывания) мути будто бы не видно. В лунках тоже ничег оне остается, вся проблемма в том, что он выпадает после вхождения в гель. Акриламиду третий год, может причина в его "чистоте"? А может сделать деионизацию мочевины перед добавлением в гель?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 10.04.2008 20:18     Сообщение для модератора       

---Часть фронта. Поперек поля.

Никогда не сталкивался с таким. Там неоткуда браться кислоте, разве что закисление анодного пространства, если анод расположен близко к гелю, а электродный буфер не новый и плохо перемешивается, но это так маловероятно.
Участник оффлайн! fagot-bsu




 прочитанное сообщение 18.04.2008 17:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

У меня несколько вопросов:
1) и самое важное: кто-нить когда-нить сушил гели ПААГ, есси да отпишитесь как мона подробнее как енто делать
2) очень важно. Если кто-то работал в программах серии Amersham (tatal lab, Image quant) ОООООООгромная просьба откликнуться и ответить какой метод выбора background substaraction юзаете вы и почему (не могу выбрать rollingball или Image rectangle)
3) мой научник посоветовал мне увеличить молярность буферов на 30%, оно и пнятно напряженность при переходе концентрирующий гель - рабочий гель padaet eshe silnee, но в результате получилось, что часть белковые полосы начали демонстрировать самые разные отклонения. Однако я не уверен, что причина таких выкрутасов именно в етом,есси когда-тоделали что-то подобное отпишитесь
4) возможно ли построить калибровку, степень окрашенности от молекулярной массы ispolzuya Kumassi g250 ili Dameral serebro

PS sry za translit (debilniy komp v labe)
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 18.04.2008 21:05     Сообщение для модератора       

--1) и самое важное: кто-нить когда-нить сушил гели ПААГ, есси да отпишитесь как мона подробнее как енто делать

http://molbiol.ru/protocol/17_06.html
http://molbiol.ru/protocol/17_13.html
http://molbiol.ru/protocol/17_12.html

Ключевым является использование целлофана(регенерированной целлюлозы) и вымачивание геля в растворе для сушки.(кстати я пользуюсь другими растворами, но и этот должен работать)

--2) очень важно. Если кто-то работал в программах серии Amersham (tatal lab, Image quant) ОООООООгромная просьба откликнуться и ответить какой метод выбора background substaraction юзаете вы и почему (не могу выбрать rollingball или Image rectangle)

Забейте, попробуйте крякнутый софт типа Bioplot, Totallab или open soft типа ImageJ, где взять крякнутый спросите в разделе форума биософта.

--3) мой научник посоветовал мне увеличить молярность буферов на 30%, оно и пнятно напряженность при переходе концентрирующий гель - рабочий гель padaet eshe silnee, но в результате получилось, что часть белковые полосы начали демонстрировать самые разные отклонения. Однако я не уверен, что причина таких выкрутасов именно в етом,есси когда-тоделали что-то подобное отпишитесь.

Не делал не советую, Лэмли и так в 2 раза увеличил концентрации по сравнению с исходной системой, ничего кроме дополнительного разогрева или удлинения времени фореза это не даста результат диффузия. Это оправданно при высоких нагрузках по белку и высокой соле в пробе. И концентрирование происходит вовсе не при переходе в разделяющий, а на границе глицин хлор уже в концентрирующем. Если у вас не очень острые зоны, а буфера проверены и перепроверены из лучших реактивовов, то виноват акриламид. Деионизуйте его над смешанным ионообменником и будет вам счастие.

--4) возможно ли построить калибровку, степень окрашенности от молекулярной массы ispolzuya Kumassi g250 ili Dameral serebro

Несовсем понял. Вы думаете, что интенсивность окраски зависит от размера белка.

Нет! Кумаси красит на массу белка(с вариациями, см топик про Брэдфорд). Строго говоря, он красит лизины и аргинины, и немного пептидную связь. Если подобрать более менее адекватный белок-стандарт для градуировки и работать на ее линейном участке, то кумаси позволяет определять количество довольно прилично с вариацией процентов 10. Но не размер, а зачем вам размер у вас Лэмли по размеру разделяет. Серебро загадочно в окраске. Вот оно не любит например красить актин. Но если вам известно, как красится какой-то конкретный белок и есть чистый-стандарт белка, то можно строить градуировку по серебру. Но у серебра очень короткий участок линейности и сильная зависимость от проявления к проявлению.
Участник оффлайн! fagot-bsu




 прочитанное сообщение 20.04.2008 08:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

1) Не могли бы вы указать состав раствора в котором необходимо вымочить гель при сушке, единственный раствор указанный в тех методиках на метаноле, а работать с етим реактивом ни желания ни возможности. У меня есть глицерин, уксусная кислота и этиловый спирт

2) позволю себе не согласиться, концентрирование однозначно происходит при переходе концентрирующий разделяющий, ето объясняется скачком подвижности обусловленным:

-разной пористостью
-разной молярностью буфера
-перераспределением заряда между трисом и глицином в концентрирующем геле, в результате чего большая часть глицина пришедшего на смену хлорид-аниона превращается в цвиттер-ион (два последних повышенная напряженность в концентрирующем геле)

см. Остерман ("... назначение формирующего геля- собрать смесь белков в узкую полосу, толщина которой может составлять сотые доли миллиметра, независимо от объема исходного препарата. Для рабочего геля она является исходной зоной фракционирования, что резко повышает его разрешающую способность)

3) Я неправильно выразил свою мысль. Я вообще- то хотел спросить можно ли построить калибровку окрашенности от КОЛИЧЕСТВА белка. По кумасси получилось, а вот ссеребром проблема, если кто-то делал нечто подобное пожалуйста отзовитесь. Или просто посоветуйте метод с высокой линейностью и воспроизводимостью (время окраски не существенно).

Сообщение было отредактировано fagot_bsu - 20.04.2008 08:17
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 21.04.2008 13:44     Сообщение для модератора       

1) Можете смело использовать 40% этанол 3% глицерин остальное вода. Гель сжимается если использовать 20% спирт сжатие меньше. Так же можно использовать 20% ПЭГ 4000 или 10000 или даже ПЭГ115(это торговая марка промышленного продукта, на самом деле это ПЭГ 4000-5000). В спиртовых раствора при увеличении процентности геля надо увеличиват концентрацию глицерина начиная с 12-15 процентного геля нужно использовать 5-7% гдицерин.

2)Вы несовсем правы, но для обяснения недостаточно места на полях этого форума.
3) С кумаси возможно. Да и серебром наверное возможноглавно подобрать условия.
Гость
IP-штамп: frOCLgZ.AxHok
гость



 прочитанное сообщение 21.04.2008 15:31     Сообщение для модератора       

Вопрос глупый-глупый - а TGB 5х, это его перед использованием розбавить надо? Извените.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 21.04.2008 17:29     Сообщение для модератора       

--Вопрос глупый-глупый - а TGB 5х, это его перед использованием розбавить надо? Извените.

А в каком контексте вы это читате. И что сие буквосочетание значит.

SSС 20х , а разводят чаще всего в 5 раз smile.gif

Состав 5хTGB в студию, тогда и поговорим.
guest: Гость
IP-штамп: frOCLgZ.AxHok
гость



 прочитанное сообщение 22.04.2008 12:42     Сообщение для модератора       

А спасибо Вам за ответ, я просто немножко 5х перед TGB не заметила, ну и все из этого вытекающее.. :mol: :wall: :) . Я больше такое спрашивать не буду...
Почему
IP-штамп: frOCLgZ.AxHok
гость



 прочитанное сообщение 22.04.2008 15:26     Сообщение для модератора       

У меня при окраске на форезе (если не доганять до конца) остаються полосы горизонтальные при отмывке они темного цвета, выглядит как-будто нижний и верхний буферы не дошли до места встречи, почему это так и куда это можна деть?
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 22.04.2008 16:36     Сообщение для модератора       

--У меня при окраске на форезе (если не доганять до конца) остаються полосы горизонтальные при отмывке они темного цвета, выглядит как-будто нижний и верхний буферы не дошли до места встречи, почему это так и куда это можна деть?

В смысле в самом конце, геля? Если так, то это просто развал и низкомилекулярная фракция, ее можно выгнать вместе с БФС, а можно оставит на любителя.
Участник оффлайн! fagot-bsu




 прочитанное сообщение 27.04.2008 20:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Пжалуйста подскажите метод окраски серебром, который характеризуется прежде всего повышенной воспроизводимостью и линейностью, если вы еще и укажите диапазон в котором ента линейность наблюдается то это будет просто замечательно.
Очень жду вашего ответа и буду за него благодарен.
guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость



 прочитанное сообщение 28.04.2008 11:07     Сообщение для модератора       

--Пжалуйста подскажите метод окраски серебром, который характеризуется прежде всего повышенной воспроизводимостью и линейностью, если вы еще и укажите диапазон в котором ента линейность наблюдается то это будет просто замечательно.
Очень жду вашего ответа и буду за него благодарен.

К сожалению не могу сказать ничего определенного. Мы в лабе пользуемся окраской аммиакатами. Воспроизводимость при любой окраске(не только серебром) никакая, поэтому обычно пробу гоняют одновременно с раститровкрой градуировочного белка на одном геле.

Чувствмтельность окраски аммиакатами, зависит от концентрации исходного нитрата серебра, и от сенсибилизации геля формалином или глютаром. И колеблется от 0.1нг до 1нг (реально воспроизводится 0.5-1нг) на зону. Что касается линейности, то она соблюдается до нг 10-50. Но как чувствительность, так и линейность еще очень сильно зависит от "личного отношения" конкретного белка к окраске серебром.
Гость
IP-штамп: frZa2jpwcO5Kk
гость



 прочитанное сообщение 08.05.2008 19:25     Сообщение для модератора       

SDS-PAGE все-таки, наверное, правильнее, хотя на полимеризацию это не влияет :)

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 16.02.19 09:44
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft