Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Градиентный гель -- опыт сборки установки --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! vooden




 прочитанное сообщение 30.05.2018 11:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте.

Есть интерес попробовать провести градиентный гель электрофорез, разделить низкомолекулярные белки (3-15 кДа). Встал вопрос как залить гель.
Кто-нибудь может поделиться опытом сборки установки для заливки геля?

Спасибо.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 30.05.2018 11:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Вот он поделился http://www.newlibrary.ru/book/osterman__l_...e)__metody.html
Участник оффлайн! vooden




 прочитанное сообщение 30.05.2018 15:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Спасибо.
Книжка прочитана. Там установка стандартная, но продавцы за два цилиндра просят столько, что весь интерес пропадает. Плюс самим нужно как получившийся гель равномерно между стеклами залить.
Поэтому интересуют практические вопросы: где можно за адекватную цену собрать смеситель, как заливать гель.
Участник оффлайн! Grinar




 прочитанное сообщение 30.05.2018 15:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Можно конечно несколько растворов геля делать с постепенным увеличением концентрации акриламида (хоть 100 штук) и по очереди наслаивать. Собирать смеситель самому этот конечно интересно...
Вообще если хотите низко молекулярные белки гнать то вам нужен трициновый гель
https://www.nature.com/articles/nprot.2006.4
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 17:15     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Начнем с того что наверняка если посмотреть вокруг у кого-нибуть в лабе имеет место быть самодельные смесители из огрстекла времен СиСиСиПи....
если есть таковые все просто аки мычание ( правда придется заливать по одному гелю).
берете трубочку и стеклянныиь капиляр его опускаите на дно собранных стекол в которыс сделана пробка из аклриламида или агарозы и заливаите гель.
Если смеситель не найден берете 2 стекляных цилидра находите стеклодува и он их соединяет стрклянноуй трубочкой и в одном делает стеклянныиь отводо на которй надеваите трубочку с крантиком ( зажимом).
пы.сы. замечание о трициновом буфере верное
http://www.electrochemsci.org/papers/vol11/110100640.pdf
http://www.fechem.uzh.ch/MT/pdf/Tris-Tricine.pdf
https://www.sciencedirect.com/science/artic...5872?via%3Dihub
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 30.05.2018 17:56     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Да подобная "установка" делается за пол-часа просто "на коленке". Берёте 2 пластиковых стаканчика (размер прикиньте по объёму геля), проковыриваете в одном у дна 1 дырку (1), во втором - 2 дырки (2). Через дырки путём плотного впихания силиконовой трубочки соединяете 2 стаканчика, а второй отвод из стаканчика (2) - в камеру. На трубочки вешаете мед.зажимы, всё ставите на магн.мешалку. Магнит кидаете в стаканчик (2). Проверяете - всё ли нормально течёт куда надо и не течёт откуда не надо. Далее элементарно - на трубочку "в камеру" вешаете капилляр до дна камеры (или длинную иглу, особенно хороша для взятия пункции - но зависит от камеры), в (1) высококонц. гель, в (2) - низкоконц. Открываете трубочки, по мере смешения гелей и получаете градиент: сначало идёт низкоконц. гель из (2), потом он будет подниматься вверх всё более конц. из (1). Тут ещё нюанс есть подобрать конц. инициатора и катализатора, чтоб всё это дело и не заполимеризовалось в процессе, и градиент не потерять. Всё регулируется скоростью истекания, подбирайте по своей камере уже. В зависимости от кривизны рук раза с 3 даже у меня нормально получалось. Лично я ещё сверху ещё заливал "концентрирующий гель", чтоб фронт белка потоньше был. А можно и просто гребёнки сунуть, сверху, обычно, %% 2 должно быть. Зависит от материала и задачи. Если нужен 2D-форез с градиентом - просто аккуратно оставляете сверху запас под вырезанный гель и его туда заполимеризовываете. Так что поэкспирементируйте, не бойтесь - и всё у Вас получится!

Сообщение было отредактировано dk - 30.05.2018 18:01

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Tom1
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 30.05.2018 19:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

На самом деле вам не нужен градиент. Ведь вам не нужно одновременно видеть и 200кДа и 2кДа.

Вам нужна трициновая система. Но кроме нее нужна ступенька(не градиент) в геле. Самый низ геля делаете по особенному где-то 15-20% от общей длины. Концентрация акриламида там порядка 18-20%, а вместо SDS 3-4M мочевина, остальной гель обычный трициновый с концентрацией акриламида 15-16%.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): dk
Участник оффлайн! vooden




 прочитанное сообщение 31.05.2018 09:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(Grinar @ 30.05.2018 16:46)
Ссылка на исходное сообщение  Можно конечно несколько растворов геля делать с постепенным увеличением концентрации акриламида (хоть 100 штук) и по очереди наслаивать. Собирать смеситель самому этот конечно интересно...
Вообще если хотите низко молекулярные белки гнать то вам нужен трициновый гель
https://www.nature.com/articles/nprot.2006.4

Да, на трициновый буфер присматриваюсь.
Градиент хочется попробовать, чтобы увеличить разрешения. Фокусировка на концентрирующем геле (даже с увеличением pH и T) на низкомолекулярных белках как-то не очень работает.
В идеальном варианте это будет трицин с градиентом. Трицин обеспечит разделение, градиент - разрешение.

Сообщение было отредактировано vooden - 31.05.2018 11:10
Участник оффлайн! vooden




 прочитанное сообщение 31.05.2018 09:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(dk @ 30.05.2018 18:56)
Ссылка на исходное сообщение  Да подобная "установка" делается за пол-часа просто "на коленке". Берёте 2 пластиковых стаканчика (размер прикиньте по объёму геля), проковыриваете в одном у дна 1 дырку (1), во втором - 2 дырки (2). Через дырки путём плотного впихания силиконовой трубочки соединяете 2 стаканчика, а второй отвод из стаканчика (2) - в камеру. На трубочки вешаете мед.зажимы, всё ставите на магн.мешалку. Магнит кидаете в стаканчик (2). Проверяете - всё ли нормально течёт куда надо и не течёт откуда не надо. Далее элементарно - на трубочку "в камеру" вешаете капилляр до дна камеры (или длинную иглу, особенно хороша для взятия пункции - но зависит от камеры), в (1) высококонц. гель, в (2)  - низкоконц. Открываете трубочки, по мере смешения гелей и получаете градиент: сначало идёт низкоконц. гель из (2), потом он будет подниматься вверх всё более конц. из (1). Тут ещё нюанс есть подобрать конц. инициатора и катализатора, чтоб всё это дело и не заполимеризовалось в процессе, и градиент не потерять. Всё регулируется скоростью истекания, подбирайте по своей камере уже. В зависимости от кривизны рук раза с 3 даже у меня нормально получалось. Лично я ещё сверху ещё заливал "концентрирующий гель", чтоб фронт белка потоньше был. А можно и просто гребёнки сунуть, сверху, обычно, %% 2 должно быть. Зависит от материала и задачи. Если нужен 2D-форез с градиентом - просто аккуратно оставляете сверху запас под вырезанный гель и его туда заполимеризовываете. Так что поэкспирементируйте, не бойтесь - и всё у Вас получится!

Спасибо. Думал есть какая-нибудь хитрость избежать подбора времени полимеризации и скорости заливки. Буду пробовать.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 11:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Хитрости как раз - не существует. Даже в неградиентные гели нужно подбирать количества ТЕМЕД и персульфата от партии к партии.

Никакого фатального улучшения разрешения градиентный гель не дает, особенно в области малых размеров. Так картинка визуально посимпотичнее, но зато гель имеет форму веера.
Участник оффлайн! vooden




 прочитанное сообщение 31.05.2018 12:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(MMM @ 31.05.2018 12:20)
Ссылка на исходное сообщение  Хитрости как раз - не существует. Даже в неградиентные  гели нужно подбирать количества ТЕМЕД и персульфата от партии к партии.

Никакого фатального улучшения разрешения градиентный гель не дает, особенно в области малых размеров. Так картинка визуально посимпотичнее, но зато гель имеет форму веера.


А почему веер? заливка не равномерно идет, от капилляра к краям?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 13:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Да потому что, когда вы гель фиксируете и промываете водой и уксусом, он там где больше концентрация АА больше набухает и больше увеличивается в размерах и получается такой веер.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Tom1
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 15:42     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

(vooden @ 30.05.2018 23:32)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо. Думал есть какая-нибудь хитрость избежать подбора  времени полимеризации и скорости заливки. Буду пробовать.

Свежий ПСА всегда и будет счатье....
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 15:44     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(MMM @ 31.05.2018 03:04)
Ссылка на исходное сообщение  Да потому что, когда вы гель фиксируете и промываете водой и уксусом, он там где больше концентрация АА больше набухает и больше увеличивается в размерах и получается такой веер.

Большой любитель резких запахов....
давно уже не промываю уксусом....
1 минута в воде в микрофолновке перед краской ну и 2-5 минут в воде там же после краски....
цвиточек выдан по ошибке...
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 31.05.2018 17:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

--  Большой любитель резких запахов....
Посему-то вы решили в соседнем топике , что я настаиваю на отмывке горячим уксусом.
smile.gif
Эта рас. А двас, если отмывать водой, то "веер" никуда не денется.

---давно уже не промываю уксусом....1 минута в воде в микрофолновке перед краской ну и 2-5 минут в воде там же после краски....

С возрастом вы становитесь более ленивее.

--цвиточек выдан по ошибке...

Поздняк метаться. Здеся - это наобратимо. smile.gif
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 17:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 16:45
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft