Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Ответ в Хранение праймеров

Иконка сообщения*  [ Без иконки ]   Важно!   Вопрос   Информация     Обмен опытом   Шутка, забавная история     Поздравления, благодарности   Возмутительно!   Проблема   Картинки, фотографии
Введите имя

 [вст. закрывающие теги*

*


*



Смайлик: согласен Смайлик: не согласен Смайлик: улыбка Смайлик: пожалуйста, умоляю! Смайлик: помираю со смеху Смайлик: подмигивание Смайлик: подшучивать, дразнить Смайлик: смущение Смайлик: мне стыдно Смайлик: жуть! Смайлик: не понял Смайлик: закатывать глаза Смайлик: недовольство, огорчение Смайлик: рёв в три ручья Смайлик: злость Смайлик: супер Смайлик: умник Смайлик: чайник Смайлик: сходка Смайлик: Ура! Смайлик: не получается!
Перевод выделенного текста из латиницы в кирилицу. Текст в квадратных скобках '[]' не преобразуется

Пример: biologija -> биология [b] - полужирный шрифт

Пример: [b]полужирный[/b] [i] - курсив

Пример: [i]курсив[/i] [u] - подчёркнутый

Пример: [u]подчёркнутый[/u] [sup] - верхний индекс

Пример: температура 37[sup]o[/sup]C [sub] - нижний индекс

Пример: H[sub]2[/sub]O - вода [QUOTE] - применяется для цитирования чужих сообщений, цитата вставляется с небольшим отступом от края текста

Пример: [QUOTE]цитата[/QUOTE] [code] - форматирование как при вводе
Применяется для вывода теста как он есть, с предотвращением форматирования (автопереноса на новую строку), без интерпретации кодов форума и смайликов; вставляется с небольшим отступом от края текста.

Пример: 
[code]
программный код
	1 строка
	2 строка
[/code] [list] - список:
возможны опции: 1, a, A, i, I
[list] неупорядоченный; 
[list=1] нумерованный; 
[list=A] упорядоченный по буквам A-Z

Пример:
[list=1]
[*] первая строка;
[*] вторая строка;
[/list] Тег [hr] - горизонтальная разделительная линия

Пример: 
Абзац 1
[hr]
Абзац 2 [url] - гиперссылка

Примеры:
[url]www.ncbi.nlm.nih.gov[/url]
[url=http://www.ncbi.nlm.nih.gov/]NCBI[/url] [email] - ссылка на адрес электронной почты

Пример: [email]masha@mail.ru[/email] Тег [img] - рисунок
[img] - в строке;
[imgL] - выравнивание по левому краю; 
[imgR] - выравнивание по правому краю.

Пример:
[img]http://molbiol.ru/izo/rl.gif[/img] [ru] - только для русских читателей

Пример:
[ru]это увидят только те, кто использует русский интерфейс[/ru] [en] - только для английских читателей

Пример:
[en]это увидят только те, кто использует английский интерфейс[/en] [self] - текст виден только вам и администрации

Пример:
[self]это увидите только вы сами[/self]
[left] - выравнивание по левому краю

Пример: [left]текст слева[/left] [center] - выравнивание по центру

Пример: [center]текст в центре[/center] [right] - выравнивание по правому краю

Пример: [right]текст справа[/right] [just] - выравнивание по обоим краям

Пример: [just]выровненный текст[/just]

     размер сообщения / макс. размер:  / 15360


Последние 10 сообщений [ в обратном порядке ]
watchesonline89 Отправлен 25.12.2022 10:40
  https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300647.html
https://list.ly/i/8020067
https://wakelet.com/wake/FbtgXuYkRErMzQ1HUDcgZ
https://fortunetelleroracle.com/fashion/exc...a-online-737625
https://omegawatches89.blog.hu/2022/11/13/u...log_hu-n_109243
https://trello.com/w/omegawatches891/account
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/notre-produit
https://blog.udn.com/omegawatches89/176226699
https://omegawatches89.seesaa.net/article/490300795.html
https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756688272.html
https://www.vingle.net/posts/4647040
https://wakelet.com/wake/H0vWrtoDDLsN1D3RnAjp6
https://penzu.com/p/5778d3b5
https://telegra.ph/Exciting-Deals-Offered-O...ca-Online-08-03
https://omegawatches89.simplesite.com
https://ameblo.jp/omegawatches89/entry-12756647075.html
https://omegawatches89.simplesite.com/452939039
https://telegra.ph/Amazing-Offers-Available...es-Online-08-03
watchesbiz Отправлен 10.11.2021 18:36
  https://www.uptrennd.com/post-detail/hints-...-watch~ODY3MDU2
https://anotepad.com/note/read/mqg8p5jm
https://www.crokes.com/replicarolexwatches/profile/
https://ko-fi.com/post/Watches-Shopping-Gui...-Watc-E1E13PZV9
https://www.merchantcircle.com/blogs/replic...x-Watch/1966540
https://www.nairaland.com/6427528/watches-s...de-finding-fake
https://www.vingle.net/posts/3587193
https://fortunetelleroracle.com/sport/replica-watches-280478
https://www.goodreads.com/story/show/132736...ake-rolex-watch
https://www.diigo.com/item/note/85twz/phwr?...2395edb2dac07ea
https://github.com/ReplicawatchesUK/Replica...ake-Rolex-Watch
https://www.reddit.com/user/Bestreplicawatc...ke_rolex_watch/
https://slashdot.org/submission/13306958/wa...ake-rolex-watch
https://www.wattpad.com/1030107359-replica-...guide-finding-a
https://www.instructables.com/member/Fakero...licPreview=true
Carbon Copy Отправлен 26.08.2019 17:43
 
(DK. @ 19.08.2019 21:05)
  У кого какие опыт/соображения на сей счет, кроме как "сами дальше и тестируйте"? smile.gif

Иногда свойства праймеров и проб меняются при хранении. Залепили как то тест по опубликованным (более того - рокомендованным CDC) праймерам и Такманам. Свежие реакции с праймерами и пробами из стоков работали нормально, но, стоило primer/probe mix постоять денёк в холодильнике на 4 оС - начинала лезть неспецифика на поздних циклах. То же было, если mix многократно замораживали/оттаивали. Чем объяснить - непонятно, скорее всего взаимодействием однонитевой ДНК в растворе в силу частичной комплиментарности сиквенсов. Оставили Такман и поменяли праймеры на самопальные - всё заработало нормально. Вобщем мораль - всё обязательно нужно тестировать и валидировать. Если лаба диагностическая, стабильность primer/probe mix, или в Вашем случае PCR mix, - валидация с подробной документацией обязательна. Кстати я бы лучше хранил приготовленные реакции на - 80 оС, а не - 20 оС.
elektrikvasilij Отправлен 20.08.2019 19:55
 
(X34 @ 20.08.2019 14:24)
Ссылка на исходное сообщение  да все просто, чистые прямые руки. вот и все. по своим ощущениям праймеры, валяющиеся на +4 после синтеза (врать не буду) НО! -надцать лет работали получше свежих от современных евросинтологенов
ну и стоки конечно вьюношам в руки не давать
хотя не спорю, есть отдельные структуры (последовательности) которые сами сыпятся через пару дней после синтеза, но, как горит Карпов "наливай, сейчас я тебе что-то интересное расскажу, ты не поверишь, но бывает...."

угу я в германии однажды заказал килограмм 60 нт олигов спотит микроарреи все сиквенсы перепутаны и фейк smile.gif

правда потом извинилис? но полгода онанизьма smile.gif
-Ъ- Отправлен 20.08.2019 17:33
 
(X34 @ 20.08.2019 14:24)
Ссылка на исходное сообщение   но, как горит Карпов "наливай, сейчас я тебе что-то интересное расскажу, ты не поверишь, но бывает...."

lol.gif lol.gif lol.gif
X34 Отправлен 20.08.2019 13:24
 
(DK. @ 20.08.2019 00:05)
Ссылка на исходное сообщение  

У кого какие опыт/соображения на сей счет, кроме как "сами дальше и тестируйте"? smile.gif


да все просто, чистые прямые руки. вот и все. по своим ощущениям праймеры, валяющиеся на +4 после синтеза (врать не буду) НО! -надцать лет работали получше свежих от современных евросинтологенов
ну и стоки конечно вьюношам в руки не давать
хотя не спорю, есть отдельные структуры (последовательности) которые сами сыпятся через пару дней после синтеза, но, как горит Карпов "наливай, сейчас я тебе что-то интересное расскажу, ты не поверишь, но бывает...."
DK. Отправлен 19.08.2019 23:05
  Спрошу здесь. чтобы не множить темы.
У нас для q-PCR используется небольшой инструмент "Nano" от Roche - четыре ряда для "цепочек" на 8 проб (7 образцов и контроль). Вдохновившись тем, что существуют киты с праймерами, лиофилизованными в лунках, стали разливать праймеры (4 мкл для конечной реакции 20 мкл) сразу на 12 и даже 24 "цепочки" (chains), залеплять плашку с "цепочками" плотно plate sealer-ом, центрифугировать, чтобы собрать раствор на дне - и хранить при -20С, используя по мере необходимости и избегая многократного размораживания-оттаивания и манипуляций с основным раствором праймеров. Удобно. Результаты между свежеразлитыми и хранившимися(по крайней мере до двух недель) праймерами ОК, в пределах ожидаемого разброса. Но все-таки это не лиофилизация - может, мне просто повезло со стабильностью праймеров?

У кого какие опыт/соображения на сей счет, кроме как "сами дальше и тестируйте"? smile.gif
ship Отправлен 13.02.2019 12:38
  праймеры для сиквенса стоят разведенные на -20С годами и переживают десятки замораживаний-оттиваний. некоторые праймеры стоят по 10 лет - и работают на сиквенсе без проблем.
считаю проблемы развала и деградации праймеров надуманной, если вода чистая и ничего не занесли, то ничего им и не будет.
по поводу урны - зачем дерьмо хранить в чистой зоне? обычно мусорные ведра всегда стоят рядом, на полу. но если у вас лентивирусы например, то тогда, да, лучше скидывать все в урны под ламинаром, и потом это все дезинфицировать и тп.
KCN Отправлен 12.02.2019 12:28
  С мечеными праймерами не работал, использовал только обычные + SYBR GREEN,
как лиофилизированные так и разведенные аликвоты хранил на -20, желательно в nuclease free water если аликвотишь. Обычная ДНК не боится видимого света, только УФ, но стекло окон его большей частью не пропускает, поэтому во время работы вполне могут стоять на столе или в ламинаре.
Но УФ , не убрав любую ДНК, включать нельзя.
И, кстати, на трансилюминаторе ДНК в агарозе по часу тоже не желательно держать, нужно фоткать или резать быстро. Есть разные типы трансилюминаторов, отличаются по длине волны. Те, где волна короче, подсвечивают этидий бромид лучше, но и ДНК калечат быстрее.
-Ъ- Отправлен 12.02.2019 12:21
  Кстати, о птичках...
Недавно решил испытать лиофилизованные PCR мастермиксы, которые валялись более года на свету на столе, с TaqMan, даже с двумя - с FAM и ROX, и был "приятно удивлен" - незначительное статистически снижение сигнала!
В деталях лень разбираться - это полимераза с антителами, dNTP, гидролиз праймеров-зондов или наконец фотолиз confused.gif .
Так что не так страшен черт... yes.gif
Посмотреть тему (откроется в новом окне)

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 11:44
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft