Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PCR-клонирование
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 23.05.2001 12:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Кто-нибудь клонировал гены из бактерий спомощью PCR на лигазной смеси (лигируеш хромосому, по разным рестриктазам, в вектор и ставиш PCR на лигазной смеси с праймером на консервативный участок и со стандартным)?
Я таким образом вытащил N конец(из 5-ти рестриктаз 4 дали продукт, из них 2 -нужного размера), заказал на него праймер, и с этим праймером PCR не идет(только против консервативного), перепробовал 10 рестриктаз, и две мелкощепящие с недорестриктом - глухо.
Может у кого есть идеи по этому поводу, а то у меня творческий кризис.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 23.05.2001 12:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Если можно, то поточнее исходные данные. Что это за консервативный участок?
З.Ы.А что, сиквенса данной бактерии не существует?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 24.05.2001 13:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Сиквенса данной бактерии не существует, зато существуют сиквенсы этого гена из других бактерий (не помню точно, кажется штук шесть я нашел), они друг с другом почти не гомологичны, но есть небольшой гомологичный участок, названный мною, в предыдущем послании, "консервативным".
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 30.05.2001 14:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Ага, понятно.
Теперь дальше. Как я понял ты вытащил какой-то фрагмент из бактерии, отсеквенировал, заказал на него второй праймер и ПЦР не пошел?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 31.05.2001 14:38     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Против первого праймера из этой бактерии он (PCR) идет, но он не идет против стандартного праймера на лигазной смеси.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 01.06.2001 13:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Ну во-первых, это даже не совет, - поменять праймер или его направление.Если я все правильно понял, то картинка такая:
-> <-
====:------------------============---------
MCS N-unknown conserv. unknown
-> new primer
Дальше можно заказать праймеры направленные наружу от твоего секвенированого участка и ставить следующим образом: хромосому долбить рестриктазами, которых нет внутри, сильно разводить, кольцевать и ПЦР с этих праймеров.
Или еще вариант, сделать клонотеку и гибридизовать с фрагментом.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 01.06.2001 13:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Тьфу, в картинке пробелы сожрались.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 01.06.2001 13:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Не ясно насколько ты все правильно понял т. к. пробелы действительно сожрались.
Менять праймер не имеет смысла, поскольку он нормально отжигается (против 1-го), менять его ориентацию тем более не имеет смысла, поскольку праймер на N-конец направлен в сторону C-конца, если я поменяю ориентацию, будет PCR-ится область перед геном (а мне нужен ген).
Я пробова PCR-ить с двух, частично перекрывающихся праймеров в разные стороны на закольцованом рестрикте хромосомы - ничего не вышло ( к стати - зачем "сильно разводить"?).
Остается только гибридизовать, но очень не хочется (ни разу не делал, а пока метод поставиш куча времени уйдет, а тут лето).
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 01.06.2001 18:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

"Сильно раззводить" - для того, чтоб при кольцевании у тебя не образовывались мультимеры, которые потом не амплифицируются.
Это кстати и вероятная причина неудач. Эту процедуру я провожу постоянно на разных колийных штаммах. Концентрация ДНК при этой процедуре должна быть ниже или равна 1 нг/мкл.
Рестриктазу нодо брать что-нибудь типа Sau3A. И ставить длинный ПЦР с хорошей длинной полимеразой.
(надеюсь, что у тебя частично перекрывающиеся праймеры не жгутся друг на друга).
Гибридизация штука несложная, но геморройная. Основная проблема в постановке ник-трансляции и доставании метки.
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:23     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

I was impressed by your writing. Your writing is impressive. I want to write like you.토토커뮤니티I hope you can read my post and let me know what to modify. My writing is in "토토사이트". I would like you to visit my blog.토토커뮤니티사이트
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Don't go past my writing! Please read my article only once. Come here and read it once"토토사이트".
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:25     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

I am a fan who has watched your writing from before.토토커뮤니티사이트I have learned a lot from you. Please come to my "토토사이트" and help me.토토커뮤니티
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:26     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

How did you think of this? I think you can help me. Come here to help.토토사이트
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:27     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

Thank you so much for reading your post. Your writing was helpful in my life.토토사이트You brought my life back to life. Thank you so much and thank you so much.토토사이트
Участник оффлайн! emilybyrne




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.12.2020 07:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Definitely feel whatever you stated. Your chosen justification appeared to be around the web the particular simplest factor to be familiar with. My partner and I say to an individual, My partner and I definitely acquire irked although folks consider problems which they plainly do not find out about. An individual was able to strike the particular toenail after the most notable and identified out there the whole lot with no side effect, folks can require a signature. Can likely become again to obtain additional. Thank you. bandarqq
Участник оффлайн! emilybyrne




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  22.12.2020 05:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

I loved as much as you will receive carried out right here. The sketch is tasteful, your authored subject matter stylish. nonetheless, you command get bought bandar judi bola an edginess over that you wish be delivering the following. unwell unquestionably come further formerly again since exactly the same nearly a lot often inside case you shield this increase.
Участник оффлайн! emilybyrne




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2020 14:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Just wish to state your own post is really amazing. The actual clarity inside your publish is actually just nice as well as we could presume you're a specialist CMD368 about this topic. Fine together with your authorization let me personally to seize your own feed to maintain updated along with future publish. Many thanks for the zillion as well as make sure you continue the actual rewarding function.
Участник оффлайн! emilybyrne




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  30.12.2020 09:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Thanks regarding revealing superb informations. The web site will be so great. I am pleased with the information in which you've with this web site. That unveils situs slot online just how effectively an individual perceives this kind of subject matter. Bookmarked this kind of web page, should come again regarding extra posts. An individual, my own pal, STONE! I came across simply the particular info My partner and I previously researched all over the place and also simply couldn't encounter. Just what a perfect website.
Участник оффлайн! bhuvnes




 прочитанное сообщение 31.12.2020 08:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

Я таким образом вытащил N конец(из 5-ти рестриктаз 4 дали продукт, из них 2 -нужного размера), заказал на него праймер, и с этим праймером PCR не идет(только против консервативного), перепробовал 10 рестриктаз, и две мелкощепящие с недорестриктом - глухо. https://mastercard-events.com/close-chase-account/
Участник оффлайн! emilybyrne




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  03.01.2021 07:24     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

I loved as much as you will receive carried out right here. The sketch is tasteful, your authored subject matter stylish. nonetheless, you command get bought an edginess over nonton layarkaca21 online that you wish be delivering the following. unwell unquestionably come further formerly again since exactly the same nearly a lot often inside case you shield this increase.
Участник оффлайн! bhuvnes




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  04.01.2021 15:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

In questo blog troverai l’elenco dei migliori siti di sottotitoli in italiano di film e serie TV. https://tecnotrucchi.com/siti-sottotitoli-italiano-serie-tv/
Участник оффлайн! kimkibang
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.01.2021 17:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

this is one very interesting post. I like the way you write and I will bookmark your blog to my favorites.토토커뮤니티
Участник оффлайн! kimkibang
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  31.01.2021 17:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #23 множественное цитирование

Nice information, valuable and excellent design, as share good stuff with good ideas and concepts.메이저사이트
안전놀이
IP-штамп: frsh06k.nw7gc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.03.2021 10:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #24 множественное цитирование

That's a really great post. This article will surely be of great help to many people. I would like to share it on my website 안전놀이터 and see it with many people.
먹튀검증
IP-штамп: frsh06k.nw7gc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.03.2021 10:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #25 множественное цитирование

That's a really well-organized article! Your writing is really interesting. Please continue to write a lot in the future. 먹튀검증업체 supports you.
Участник оффлайн! bondbond
Участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  21.03.2021 11:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #26 множественное цитирование

overseas spectators, saying, "I was frustrated with the holding of a full form," and "I face doubts that the event will be held.
메이저놀이터
Участник оффлайн! bondbond
Участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  21.03.2021 11:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #27 множественное цитирование

However, it is not known whether public opinion related to the hosting of the Olympics will improve with this decision, Kyodo News Agency evaluated. Asahi Shimbun also diagnosed with the abandonment of
먹튀사이트
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.09.2021 17:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #28 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 16.10.21 03:47
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft