Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* protein concentration
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 15.07.2001 08:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Rebiata, nujna ideia po izmereniu concentrasii BSA (bov.ser.alb-n). Situasia takaia: ia ximicheski adsorbiruiu BSA na poristii' material, posle reaksii i otmivania kakoe to kolichestvo BSA ostaetsia na poverxnosti por. Do six por ia izmerial polnoe kolichestvo BSA do reaksii i posle, priamim izmereniem UV Absorption dlia 280 nm. no etot metod daet neudovletvoritelnuiu oshibku, potomu chto vo pervix, adsorburuetsia malo BSA, i vo vtorix, posle otmivania concentrasia BSA v otmivochnom rastvore stanovitsia takoi', chto okazivaetsia na kraiu doveria moego spectrophotometra Cary50Bio. Concentration BSA v otmivochnom rastvore <10mkg/ml - kak gramotno izmeriaiut takie concentrasii?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 15.07.2001 18:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Exclusively iz obschikh soobrazheniy mogu suggest sleduyuschie methody:
1)Fluorescence emission (Trp, Phe, Tyr)
2)Peptide bond absorbance - D205.
Good luck.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 16.07.2001 13:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Что бы ответить на Ваш вопрос не хватает данных.
Уточните, в какой концентрации Вы наносите белок
и сколько его садится на сорбент. И самое главное,
что за сорбент Вы используете, и каким агентом
пользуетесь для иммобилизации белка, от этого зависит
способ добычи информации о связавшемся белке. По
выданным данным замечу, что, возможно, сорбент
не нужно промывать, а мерить прямо концентрацию белка
в растворе до реакции и после (исходный объем, умноженный на разность
концентраций даст вполне приемлемый результат). Есть тупой,
проломный вариант (с высокой чувствительностью),
правда сравнительно долгий: сорбент с белком подвергнуть
обработке, как при гидролизе белка, и снести на ближайший
аминокислотный анализатор. А для спокойствия то же самое проделать с
пустым сорбентом. Да, кстати, в предлагаемом мной первом варианте
можно использовать и др. методы определения белка (лоури, брэдфорд,
с флоурескамином (нужен флуориметр, но метод очень чувствительный)).
Они перечислены в порядке возрастания чувствительности это может
помочь справиться с низкими концентрациями. (Внимание! Все перечисленные
методы имеют свои ограничения и применять их можно не в любом случае.)
Успехов.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 17.07.2001 04:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Spasibo i Olegovitchu i avor'u' za idei. Osobenno mne ponravilis misli avor'a'... Kasatelno sorbenta, to eto poristue granuli ~50 mkm, pori~0.1mkm iz methacrylate co-polymer Toyopearl seria, ot TosoHaas. Ia ispolsuiu ix kak stasionarnuiu fasu v chromatographic column. Linking poverxnosti pori s BSA idet cheres glutaraldehyde, on k neschastiu, daet zamechatelnii' pik kak raz na 280 nm, kak i BSA. Posle reaksii ostavshiesia aktivnie sites ia zakrivaiu s pomoshiu ethanolamine. Rashodi takie: na ~2ml slurry sorbenta s koncentr. ~5% wt, ia ispolzuiu ~50mg BSA, skolko BSA saditsia na poverhnost - zavisit ot vsego. Sobstvenno eto to seichas mne i interesno.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 17.07.2001 18:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Мнэ-э, Совет 1) я думаю, BSA можно брать и поменьше 5-10мг.
Совет 2) Лоури с глютаром скорее всего несовместимы, поэтому
лучше в этом случае использовать осаждение белка трихлоруксусной
кислотой затем растворение в 0.1М щелочи, а потом Лоури. Это
по поводу т.н. дифференциального измерения концентрации. (все остальные
варианты, вроде, проходят(если будет избыток глютара, он может маскировать
аминогруппы по которым работают брэдфорд и флоурескамин), гидролиз может дать неудобоваримые производные
матрицы от желтого до темно коричневого цвета (насколько я знаю Toyopearl
делает свои матрицы на основе ПВС, а не ПММА , а ПВС в кислых условиях
и при высокой температуре будет деградировать, поэтому я бы использовал
солянку концентрацией 10М, но температуру не подымал бы выше 37С и на несколько
дней и под азотом обязательно или аргоном.)
Есть еще один вариант измерения непосредственно на колонке: промываешь
уже готовый(с белком) сорбент бодяжишь это дело в 50% ПЭГе
(это чтоб не оседало и рассеивалось меньше) и измеряешь поглощение
на 280 и сравниваешь с аналогичной суспензией пустого сорбента(глютар в этом случае не мешает, тк ты уже от него отмылся).
Метод не всегда надежен из-за всяких выкрутас сорбента, кроме того в твоем
случае могут мешать связи C=N(но возможно обработка боргидридом
натрия от этого спасет, если конечно она не входит в методику присоединения
белка, тогда этого делать не нужно.(Вместо ПЭГа можно использовать
глицерин или ПАА, но без биса конечно, главное чтобы они не поглощали на 280.
Дерзайте.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 18.07.2001 06:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

A vot eto, v samom dele interesno, osobenno Lowry... No nachnu so vtorogo - bodiajnogo smile.gif varianta on vigliadit poproshe, a potom Lowry. Interesno budet sravnit. Chto poluchitsia, obiazatelno napishu, mojet komu i prigoditsia. Bolshoe spasibo avor'u' za interesnie idei.
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 24.08.2001 08:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Proshel mesias, ia koe chto poproboval i problemmu s izmeremiem protein amount na slarru dlia affinity chromatography reshil, podrobnosti o problemme sm. vishe, a o reshenii nije smile.gif. Odnako do Lowry tak i ne doshel frown.gif i vot pochemu. Tak poluchilos, chto vnachale ia poproboval BCA method - rezultati prevzoshli vse ojidania i ia na nem ostanovilsia. Daje dlia takoi' izvrashennoi sistemi kak u menia - protein (BSA) sviasannii' s poverhnostiu poristoi' granuli iz polimera, BCA daet dlia koncentrasii ot 0.5 mkg/ml do 50 mkg/ml razbros ~5%, a dlia sluchaia kogda protein (BSA) prosto rastvoren v buffere ia poluchal uverenno razbros <1%. Obichno takie tochnosti dlia takix velichin daiutsia "bolshoi kroviu", kto izmerial - tot poimet.
Chto takoe etot BCA method jelaiushie mogut naiti na http://www.piercenet.com/searchcombined2.cfm - tam mnogo vsego o metode, esli est dostup k burjui'skim jurnalam, to dlia nachala mojno prochest - Smith,P.K. et al. (1985). Mesurement of protein using bicinchoninic acid, Anal.Biochem. 150,pp.76-85. Tam est dannie o neskolkix proteinax, sravnenie BCA s Lowry. Dalee, na prostorah Russii est firma Helicon Ltd. ne dalee kak vchera, ona prislala mne pismeso, o tom, chto ona mojet posposobstvovat v pokupke BCA reagent, daje kakoi'to fail proslali, vot tolko chego ia ne poimu, tak eto togo, kak eta doblestnaia firma nashla menia i moi' e-mail? nu da ladno, vo pervix eto vopros k moderatoru, a vo vtorix, informasia bila iavno v temu... Eta firma imeet WEB-page: www.helicon.ru - pishut chto oni toje vse znaiut o BCA smile.gif
Esli kto stolknetsia s affinity chromatography, to izmerenia protein concentration na polymer beads posle reaksii sviasivania mojno delat s pomoshiu BCA tak:
1) calibrovka - neaktivnie (eto vajno!) beads i bufer s proteinom, BCA smes - vse v odnom flakone, poluchit seriu grafikov absorbans(562nm) ot konsentrasii protein v takoi' razbavlennoi suspenzii dlia raznix kolichestv beads (eto potom oblegchit jizn), staratsia ulojitsia v razbrose <5% dlia 5-40 mkg/ml u menia bilo ~1-3%, ne zabivaite o blank obrazse - on mojet okazatsia ochen interesnim.
2) protein grafted - stroite grafik absrb(562nm) ot amoint beads (teper oni s proteinom), ispolsuia rez. kalibrovki vitaskivaete konsentrasiu protein na beads.
Opiat, delaite izmerenia i dlia blank - prigoditsia.
Y menia, dlia BSA, poluchalos rashojdenie ~ ot 5-10% s raschetom, osnovannim na priamom izmerenii consentrasii ostavshegosia kolichestva protein v reaksionnom rastvore.
p.s. spasibo Avoru
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:30     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

What I was thinking about was solved thanks to your writing.토토커뮤니티사이트I have written on my blog to express my gratitude to you.토토커뮤니티My site is "토토사이트". We would be grateful if you visit us.
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

I think your writing will help me, can you come to me once and help? My site is "토토사이트"
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:34     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

How can you think of this!토토커뮤니티사이트I am very shocked by your writing.토토커뮤니티The problem I've been thinking about for a long time has been solved at once. Thank you so much.토토사이트
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:35     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

I am happy to visit my site and blog. Please read my article as soon as possible. I need you.토토사이트
totosite
IP-штамп: frif60/G4Seok
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  18.12.2020 07:36     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Thanks to you, my stress has been relieved. You are really great.토토사이트 I hope I can think like you. I hope you can help me.토토사이트
안전놀이
IP-штамп: frsh06k.nw7gc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.03.2021 10:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

That's a really great post. This article will surely be of great help to many people. I would like to share it on my website 안전놀이터 and see it with many people.
먹튀검증
IP-штамп: frsh06k.nw7gc
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.03.2021 10:47     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

That's a really well-organized article! Your writing is really interesting. Please continue to write a lot in the future. 먹튀검증업체 supports you.
Участник оффлайн! bondbond
Участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  21.03.2021 10:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

overseas spectators, saying, "I was frustrated with the holding of a full form," and "I face doubts that the event will be held.
토토사이트
Участник оффлайн! bondbond
Участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  21.03.2021 10:27     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

However, it is not known whether public opinion related to the hosting of the Olympics will improve with this decision, Kyodo News Agency evaluated. Asahi Shimbun also diagnosed with the abandonment of
토토사이트
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.09.2021 17:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.09.2021 17:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.10.21 03:18
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft