Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Евгеша |
|
ship Постоянный участник Moscow |
про колориметрический блот вообще первый раз слышу. вторичные обычно конъюгнируют с красненьким и зеленьким флуорохромами, а у вас 302 нм для этидия. ну и стоят вторичные тоже нормальных денег - так зачем пытаться все делать все через одно место? |
MMM Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано MMM - 19.01.2017 12:27 |
MMM Постоянный участник |
(ship @ 19.01.2017 13:22) про колориметрический блот вообще первый раз слышу. Мосье никогда не красил ПХ ДАБ/Н2О2 и ЩФ BCIP/NBT???!!!! Кстати! Автор!! Возможно коньюгаты с ЩФ и субстрат BCIP/NBT вас спасут. Эта парочка раз в 10-30 чувствительнее ДАБ.
|
Евгеша |
(ship @ 19.01.2017 15:22) Вот этим красим: Immun-Blot® Opti-4CN™ Colorimetric Kits от Bio-Rad Сообщение было отредактировано Евгеша - 20.01.2017 05:52 |
MMM Постоянный участник |
(Евгеша @ 20.01.2017 06:09) Immun-Blot® Opti-4CN™ Colorimetric Kits от Bio-Rad Ничего особенного, обычный набор с хлорнафтолом по чувствительности наравне с диаминобензидином(ДАБ). |
Евгеша |
И как статистически обработать изображение? Засунуть его в наш гель-док? Сообщение было отредактировано Евгеша - 20.01.2017 11:39 |
plurgene Постоянный участник |
|
plurgene Постоянный участник |
|
plurgene Постоянный участник |
|
LMP Постоянный участник |
(Евгеша @ 20.01.2017 09:32) Подскажите, пожалуйста, где купить плёнку и проявитель? Плёнку я, допустим, нашла у термофишер, но где взять проявитель к ней и как он вообще называется? А закрепитель нужно? А красный фонарик где взять? в магазине фототоваров? А что в современных НИИ фотолабораторий больше нет? |
ship Постоянный участник Moscow |
(Евгеша @ 20.01.2017 03:09) ну хорошо, вопрос только в том зачем это делать, если известно, что это нечувствительный метод? я реально первый раз о таком слышу, тк даже в 2000 году, в периоды максимальной бедноты у нас был ECL+ от amersham. проявитель и фиксаж можно использовать обычный российский. красный фонарь - в фототоварах. пленка - всегда исользовали kodak, что в РФ, что в США. |
MMM Постоянный участник |
Если вы умете закупать химию у продавцов реактивов типа Мосреактив и т.п. или у вас остались запасы фотореактивов с советских времен, то вы можете изготовить проявитель и фиксаж самостоятельно. Проявитель:!!! Kodak D-19 High contrast film developer Water approx 50C 500 ml Metol .............................................................2 g Sodium Sulfite (anhydrous)......................90 g Hydroquinone..............................................8 g Sodium Carbonate (monohydrate*)......52.5 g Potassium Bromide...................................5 g Water to make 1000 ml Mixing Instructions: Add chemicals in specified sequence. Dilution: Use undiluted. Use between 65F/18C and 70F/21C for best results. Usage: Starting point dev time: 6 mins. Notes: *multiply amount by 0.833 if using Sodium Carbonate in anhydrous form. Фиксаж: Ну например такой: Тиосульфат натрия ................................................250г Сульфит натрия .....................................................20г хлорид аммония(сульфат аммония )...............50(63)г Уксусная кислота(пищевая эссенция 70%)...12мл см также последнее сообщение в этой теме По поводу обсчета пленки. Если у вас в гель-доке есть белый люминесцентный экран для кумасевых гелей, то вы можете воспользоваться вашим гель-доком и Image Lab, который к гель-доку должен прилагаться. Если у вас этого нет, вы можете пойте двумя способами: 1) соорудить подсветку снизу для просвета пленки насквозь. Как вы это сделаете это ваше дело: -Можно снимать пленку напротив неба прикрепив ее к стеклу скочем, -можно положить стекло на две подставки на стекло положить тонкую белую бумагу или кальку(а можете вместо бумаги использовать молочное(матовое) стекло или оргстекло(оно может плавится если лампа снизу будет его сильно греть)), а снизу подсвечивать стекло лампой. -можно купить промышленный светильник с люминесцентными лампами(или светодиодами) и матовым экраном(на 4 трубки квадратный) и подсвечивать пленку им снизу. -Можно купить фирменный просмотровый фотостолик далее вы фотографируете пленку на просвет на любое цифровое фотоустройство, начиная со смартфона(планшета) и заканчивая ФФ фотокамерами типа Sony A7 или A99,Canon 6D, Nikon D600(700,750) И загоняете файл для обсчета в open soft, который вам уже посоветовали выше ImageJ(Fiji) 2)Вы используете планшетные сканеры на просвет например Epson perfection серии "V" или их предыдущие поколения. Пленка сканируется в цифровое изображение и вы опять можете обработать это изображение в программе ImageJ(Fiji) Сообщение было отредактировано MMM - 20.01.2017 15:02
|
MMM Постоянный участник |
(ship @ 20.01.2017 15:10) Ну, во-первых в более чем 50% случаев чувствительность ECL избыточна. Во-вторых - это во много раз дешевле. В-третьих - Реактивы хранятся оочень долго. В-четвертых - блот можно сканировать практически на любом дешевом планшетном сканере для документов. В-пятых не нужна никакая фото комната, фото реактивы и рентген-пленка, Или дорогой хемидок. |
ship Постоянный участник Moscow |
(MMM @ 20.01.2017 12:51) Ну, во-первых в более чем 50% случаев чувствительность ECL избыточна. Во-вторых - это во много раз дешевле. В-третьих - Реактивы хранятся оочень долго. В-четвертых - блот можно сканировать практически на любом дешевом планшетном сканере для документов. В-пятых не нужна никакая фото комната, фото реактивы и рентген-пленка, Или дорогой хемидок. ну для лабораторий, у которых нет денег и которые не занимаются наукой, - это отличный вариант, не спорю. либо когда люди на потоке делают одно и тоже и там гарантировано сильный сигнал и не надо ничего обсчитывать. но что делать, если вдруг не хватило чувствительности? Ответ как раз в этой ветке - пытаться либо както изощрятся, либо по новой заводить всю кухню, с пленкой, ECL и тп. реагент от биорад стоит не сильно дешевле ECL от миллипор. и хранятся ECL долго, лет 5 точно. |
MMM Постоянный участник |
Это не взаимоисключающие, а взаимодополняющие методы. Ко всему должен быть разумный подход. |
gold |
(Евгеша @ 19.01.2017 13:03) Здравствуйте! Ставим блоттинг. Для визуализации в наличии только гель-док, оснащенный Epi-White и UV-Trans 302 nm. При окрашивании блота колориметрическим субстратом, не видно белков интереса, не хватает чувствительности. При использовании хемилюминесцентного субстрата видно, но нет хеми-дока. Если использовать вторичные антитела с флюорохромами, можно ли будет что-нибудь увидеть с помощью нашего гель-дока? UV-Trans для этого подойдёт? Добрый день! как я понимаю у вас geldoc XR+ При использовании экрана ( вроде как там фильтр и очки в комплекте) можно увидеть Alexa Fluor 488 и тд (если возьмете вторичку с этой меткой). |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
and technical language to help |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |