Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Буферы для хранения белков
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Astate
IP-штамп: frTlWdNmzlEpc
гость



 прочитанное сообщение 18.02.2018 15:31     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте, подскажите пожалуйста, в чем можно растворять и хранить белки, после выделения тризольным методом?
После выделения белки требуется измерить методом Брэдфорда, а затем определить повреждения от окислительного стресса (карбонильные группы). Поэтому добавлять восстанавливающие и окисляющие агенты нельзя, а без них очень плохо растворяется даже после нагревания.

Заранее спасибо.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.02.2018 16:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Белки тризольным методом лучше не выделять.

Растворяйте кипячением в SDS долгим и многократным. Потом измеряйте концентрацию по Лоури. Брэдфорд для SDS не подходит.

Карбонилы как определять собираетесь?
Участник оффлайн! Blaid
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.03.2018 12:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

А зачем их выделять?
Непосредственно с образцами, содержащими белки, нельзя работать?
Метод, скорее всего, с использованием 2,4-динитрофенилгидразина, в котором - после инкубации образцов с этим самым 2,4-ДНФГ - белки осаждаются ТХУ. Так, может, и выделять вовсе не надо?..
Guest
IP-штамп: frjQ2JohnsuSs
гость



 прочитанное сообщение 20.03.2018 19:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Я часто выделяю белок из Trizol, потому что мне и РНК оттуда тоже нужен. RSBT протокол конечно быстрее, но и с тризолом проблем нет. После добавки этанола эекземпляры в центрифугу и осадок промываю в GHCl три раза в комнатной температуре по 20 мин, потом 70 процентов этанол тоже 20 мин, опять центрифуга, потом даю белку высохнуть и добавляю 10М Urea. Оставляю так не трогая на ночь на столе. На след день добавляю 1:1 2xSDS и в соникатор. И нанодроп. Чтобы использовать нанодроп, надо НЕ добавлять BPB в 2xSDS. Это из-за него нанодроп не получается. А после расчетов добавляю эти белки в 1x SDS уже с BPB, чтобы видно было цвет. Все отлично получается. Уже 8 лет так работаю.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.03.2018 20:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

--Я часто выделяю белок из Trizol, потому что мне и РНК оттуда тоже нужен.
Тризол и для рнк не лучший вариант , а белки из него воще дрянь.

---RSBT протокол конечно быстрее,
Интересно что скрывается за этими 4 буквами confused.gif shuffle.gif


--- но и с тризолом проблем нет.
Видать вы выделяете из клеточных культур и смотрите qPCR на фрагментах 100-120нп. А для этого ваще можно ничего не выделять и без тризола обойтись.

--После добавки этанола эекземпляры в центрифугу и осадок промываю в GHCl
Интересно сколько у вас там молей гуанидин хлорида и сколько он с промывками белка отсасывает. mol.gif

-- три раза в комнатной температуре по 20 мин, потом 70 процентов этанол тоже 20 мин, опять центрифуга, потом даю белку высохнуть и добавляю 10М Urea. Оставляю так не трогая на ночь на столе. На след день добавляю 1:1 2xSDS и в соникатор. И нанодроп.

Нанодроп?! в 5М мочевине?! ню-ню! разве что рассеяние от нерастворившейся суспензии посмотреть. И вот пишет человек "2хSDS" и по отношению к чему он двукратный это мы наверное телепатически должны прочесть.

--Чтобы использовать нанодроп, надо НЕ добавлять BPB в 2xSDS. Это из-за него нанодроп не получается.
Интересно кто такое BPB? И зачем его в SDS добавлять. Нанодроп загнется от 5М мочевины. Может это бромфеноловый синий? Это ж кому в голову то может придти: измерять поглощение белка на 280нм в растворе БФС!? mad.gif lol.gif

А после расчетов добавляю эти белки в 1x SDS уже с BPB, чтобы видно было цвет. Все отлично получается. Уже 8 лет так работаю.

Так себя мучить - 8 лет! weep.gif frown.gif
guest: Ольга
IP-штамп: frjQ2JohnsuSs
гость



 прочитанное сообщение 20.03.2018 21:13     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Прошу прощение. Так и знала, что не смогу объяснить. Мне просто стало интересно почитать что-нибудь из того, чем я занимаюсь - по-русски. Я уехала в 27 лет и мол биологию уже изучала в штатах с нуля и по русски ни слова сказать не могу. Нашла этот форум. Мне показалось, что я что-то понимаю. smile.gif Да ладно, что вы придираетесь? Говорю же, что работает. Нанодроп получается. Пики от экземпляра к экземпляру совпадают. Ponceau S показывает ровные и равные bands. Я ни на что не претендую, заезд с неба не хватаю, но очень счастлива, что моя работа - это мое хобби. У меня такие картинки получаются (не только Western), что мой профессор комплементы получает на встречах и все мои картинки во всех публикациях из-за качества. Так что не хотите - не верьте. Соникатор - ручной, не ванна. 10 процентов по 10 sec 2 раза достаточно. SDS - 1 percent final. Правда не смейтесь. Я уже вижу, что зря поделилась.
Guest
IP-штамп: frjQ2JohnsuSs
гость



 прочитанное сообщение 20.03.2018 21:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(guest: Ольга @ 20.03.2018 21:13)
Ссылка на исходное сообщение  Прошу прощение. Так и знала, что не смогу объяснить. Мне просто стало интересно почитать что-нибудь из того, чем я занимаюсь - по-русски. Я уехала в 27 лет и мол биологию уже изучала в штатах с нуля и по русски ни слова сказать не могу. Нашла этот форум. Мне показалось, что я что-то понимаю. smile.gif Да ладно, что вы придираетесь? Говорю же, что работает. Нанодроп получается. Пики от экземпляра к экземпляру совпадают. Ponceau S показывает ровные и равные bands. Я ни на что не претендую, звезд с неба не хватаю, но очень счастлива, что моя работа - это мое хобби. У меня такие картинки получаются (не только Western), что мой профессор комплементы получает на встречах и все мои картинки во всех публикациях из-за качества. Так что не хотите - не верьте. Соникатор - ручной, не ванна. 10 процентов по 10 sec 2 раза достаточно. SDS - 1 percent final. Правда не смейтесь. Я уже вижу, что зря поделилась.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.03.2018 22:01     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

добавте тупо и храбро счелочи 10 М слегонца имха все растворится....
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 05:04
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft