Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* метки в ДНК
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Eastern Wanderer

Казань



 прочитанное сообщение 18.02.2013 12:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Добрый день!
Мне необходимо ввести метку в ДНК (думаю С) для проведения анализа ЭПР. есть нативная ДНК человека. подскажите, пожалуйста, процедуру введения метки. возможно метить другим элементом или соединением. в статье одной применяли azide-alkyne.
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 18.02.2013 13:48     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Вас интересует конкретная последовательность ДНК или ДНК вообще?
Вы хотите ввести радиоактивную, изотопную(например с нечетным числом протонов С13, спиновую, флуоресцентную или наконец любую хоть какую химическую метку?
Участник оффлайн! Eastern Wanderer

Казань



 прочитанное сообщение 18.02.2013 15:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

(guest: ммм @ 18.02.2013 14:48)
Ссылка на исходное сообщение  Вас интересует конкретная последовательность ДНК или ДНК вообще?
Вы хотите ввести радиоактивную, изотопную(например с нечетным числом протонов С13, спиновую, флуоресцентную или наконец любую хоть какую химическую метку?


для ЭПР анализа необходимо ввести в ДНК металл с неспаренными электронами либо нитроксильный радикал. Лучше последнее, но конкретно методику пока не могу найти (пошаговое описание с количеством веществ и условиями)
Участник оффлайн! Eastern Wanderer

Казань



 прочитанное сообщение 18.02.2013 15:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(Eastern Wanderer @ 18.02.2013 16:29)
Ссылка на исходное сообщение  для ЭПР анализа необходимо ввести в ДНК металл с неспаренными электронами либо нитроксильный радикал. Лучше последнее, но конкретно методику пока не могу найти (пошаговое описание с количеством веществ и условиями)



интересует ДНК вообще, конкретная последовательность не принципиальна
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 18.02.2013 16:12     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Тогда предлагаю следующий вариант.
ДНК берем любую.
Для мечения нужно аминоалил dUTP и набор для ник трансляции
И самое главное нитрозоароматика, химически активированная для взаимодействия с первичной аминогуппой(например паранитрозо фенилизотиоцианат или гидроксисукцинимидный эфир паранитрозобензойной кислоты. Соединения взяты от балды так, что не нужно бросаться их искать в каталогах). Вот где взять такое производное сказать не могу, но по идее они должны существовать для введения спиновых меток по аминогруппам лизина в белки.

Алгоритм такой: берем любую ДНК хоть из спермы лосося, хоть из кишечной палочки.

Включаем в нее аминалил dUTP с помощью кита(можно и без кита, там всего то ДНКаза и ДНК полимераза и набор dNTP(нуклеотид трифосфатов), но нужно будет подбирать концентрацию ДНКазы.) Как в протоколе к киту написано.

Затем переводим ДНК в буфер для меченья. Опять возможны варианты: например с помощью силка колонок или диализом, или гельфилтрацией на сефадексе Г25 или обработкой фенол хлороформом и переосаждением спиртом и затем растворением в нужном буфере. Буфер для меченья - это буфер не содержащий первичных аминогрупп(например трис недопустим) и имеющий рН 8.5-9 можно использовать борат или карбонат.

Следующий этап это добавление вышеуказанной модифицированной(активированной) метки. Метку обычно добавляют в многократном избытке по отношениию к аминогруппам аминоалила. При ник трансляции включается примерно 30-70% букв Т с аминоалил группами. Подержать метку с ДНКой 1-2ч на комнате и опять почистить ДНК(как перед переводом в буфер для меченья, можно даже просто спиртом переосадить.)
все!
Участник оффлайн! Eastern Wanderer

Казань



 прочитанное сообщение 20.02.2013 14:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(guest: ммм @ 18.02.2013 17:12)
Ссылка на исходное сообщение  Тогда предлагаю следующий вариант.
ДНК берем любую.
Для мечения нужно аминоалил dUTP и набор для ник трансляции
И самое главное нитрозоароматика, химически активированная для взаимодействия с первичной аминогуппой(например паранитрозо фенилизотиоцианат или гидроксисукцинимидный эфир паранитрозобензойной кислоты. Соединения взяты от балды так, что не нужно бросаться их искать в каталогах). Вот где взять такое производное сказать не могу, но по идее они должны существовать для введения спиновых меток по аминогруппам лизина в белки.

Алгоритм такой: берем любую ДНК хоть из спермы лосося, хоть из кишечной палочки.

Включаем в нее аминалил dUTP с помощью кита(можно и без кита, там всего то ДНКаза и ДНК полимераза и набор dNTP(нуклеотид трифосфатов), но нужно будет подбирать концентрацию ДНКазы.) Как в протоколе к киту написано.

Затем переводим ДНК в буфер для меченья. Опять возможны варианты: например с помощью силка колонок или диализом, или гельфилтрацией на сефадексе Г25 или обработкой фенол хлороформом и переосаждением спиртом и затем растворением в нужном буфере. Буфер для меченья - это буфер не содержащий первичных аминогрупп(например трис недопустим) и имеющий рН 8.5-9 можно использовать борат или карбонат.

Следующий этап это добавление вышеуказанной модифицированной(активированной) метки. Метку обычно добавляют в многократном избытке по отношениию к аминогруппам аминоалила. При ник трансляции включается примерно 30-70% букв Т с аминоалил группами. Подержать метку с ДНКой 1-2ч на комнате и опять почистить ДНК(как перед переводом в буфер для меченья, можно даже просто спиртом переосадить.)
все!



большое спасибо. все четко объяснили.
guest: ммм
IP-штамп: frQlBxj4iQSg.
гость



 прочитанное сообщение 20.02.2013 21:52     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Ну не совсем четко, ибо импровизировал немного. Я посмотрел наиболее популярные спиновые метки ориентированы на SH-группы белков. Но это не беда. Полученные как описано раньше NH2 -группы на ДНК можно превратить в SH, с помощью еще одного метода модификации специальным реагентом Traut'а, только ДНК надо будет еще раз почистить от амино алил dUTP перед этим любым из выше предложенных методов.
Участник оффлайн! abdula
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 21.02.2013 02:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(guest: ммм @ 20.02.2013 22:52)
Ссылка на исходное сообщение  Ну не совсем четко, ибо импровизировал немного. Я посмотрел наиболее популярные спиновые метки ориентированы на Ш-группы белков. Но это не беда. Полученные как описано раньше НХ2 -группы на ДНК можно превратить в Ш, с помощью еще одного метода модификации специальным реагентом Траутьа, только ДНК надо будет еще раз почистить от амино алил дУТП перед этим любым из выше предложенных методов.


smile.gif
Участник оффлайн! Asmadei




 прочитанное сообщение 01.03.2013 12:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

а ведь есть, наверное, коммерческие наборы для введения меток в ДНК для ЭПР-анализа. может кто-нибудь работал, знает?
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  07.12.2021 15:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch
nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.05.2022 06:57     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

The first sentence has nigoal one single purpose ลิงค์รับทรัพย์ to entice the reader to sexy gaming Write in a semi-informal dream gaming read the next sentence. ka gaming rewarding to satisfy curiosity.

it sets the tone for 123goal the rest of the article 11hilo hooking the reader in 123bets choose the best three or four. pggame123 one step at a time. big gaming are intrigued by a question
guest: 123
IP-штамп: frJhOCvSv9ICE
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  02.06.2022 12:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

For years there 123VEGA have been FA CHAI SLOT calls for Asia - which JILI SLOT is home to some PRAGMATIC PLAY of the world's สล็อตPG biggest CO2 emitters - to ditch fossil fuels 11HILO to help tackle climate AMB CASINO change. Countries in the region - including FC SLOT its three biggest economies 88KTC China, Japan and India - were criticised last year 123GOAL for not making a bigger.
Участник оффлайн! 123goal 123goal
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  10.06.2022 13:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

You need to work on yourself if 123GOAL you are lacking inner confidence. This takes 11hilo time, but the rewards are worth it. Every สล็อต 123 time you think pggame123 negatively about yourself, counter that thought big gaming with a positive one, or when you feel 123dic a negative thought coming on – list three 11 ไฮโล things that you are appreciativeslotxo of. Believe in yourself. Make it maintaining a long ambslot part of your morning routine to compliment yourself when you slotonline see your reflection in the mirror. The more confident you are, the more likely you will feel comfortable showing other people the real you!
Участник оффлайн! 123goal 123goal
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  13.06.2022 10:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

What is the goal 123GOAL of your content? You should สล็อต 123 always be driving your audience to pggame123 a next step – whether that’s viewing another บาคาร่าออนไลน์ blog post, signing up for a newsletter, or sharing the 11 ไฮโล content. Good content is actionable เกมสล็อต because it asks the person 123dic viewing it to do something. Every big gaming piece of content you produce should provide a clear, actionablect855 next step. To make your 123bets content actionable.
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.09.2022 11:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Three weeks after แทงบอล168 meeting Xi in Beijing and just รูเล็ต days after the Winter Olympics ดรีมเกมส์ ended, Putin launched aff 1688ด a full scale invasion of Ukraine. ufa1688 He had expected a quick victory Pragmatic Play but seven months in 1688.com Russia is far from winning. Its forces Manna Play are exhausted, demoralized Gamatron and fleeing territories they ลิงค์รับทรัพย์ have occupied for months.
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.05.2023 06:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

While the Patriot ปั่นสล็อต system has been successful เกมสล็อต in countering ballistic missiles สูตรสล็อต its ability to stop air-launched ทาง เข้า ufabet hypersonic missiles was ufabet vip purely theoretical before last week. Ukraine’s ทาง เข้า ufabet มือ ถือ intercept has now provided a real-world แฮนดิแคป คือ demonstration of that capability 123goal something that has been viewed nigoal123 within the Pentagon as a major app aff1688 development, the source

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.04.24 09:52
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft