Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Almost |
|
MMM Постоянный участник |
|
R-J-Dio Постоянный участник |
|
Austin1819 |
|
Austin1819 |
|
MMM Постоянный участник |
Недостатки образования. Биологи(не зависимо от того где они получили образование) часто страдают отсутствием системного знания в области физики, химии и биохимии.
|
genseq Постоянный участник |
|
Austin1819 |
(genseq @ 12.06.2017 10:21) тут уж точно нет |
avial Постоянный участник |
|
sceptique Постоянный участник временной жизни |
(MMM @ 12.06.2017 10:05) Не знают. Недостатки образования. Биологи(не зависимо от того где они получили образование) часто страдают отсутствием системного знания в области физики, химии и биохимии. Этот крокодил крошит всё, и без активатора-кальция, и в 4М-мочевине. Последняя даже увеличивает её активность. Изучайте структурную биологию и биокатализ - не будьте такими самоуверенными по поводу силы своего так называемого "образования". Сообщение было отредактировано sceptique - 13.06.2017 12:43
|
Horse-radish Участник |
+1 к предыдущему оратору.
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Horse-radish @ 13.06.2017 14:10) Кем проверено? В 2-4 М GTC собственноручно проверял, пытался приспособить "продвинуть" к своим китам - масло масленное. Черпаем знания из Вики! |
sceptique Постоянный участник временной жизни |
P.S. Аутоинактивации протеаз никто не отменял. Вы просто могли криво проверять не в том диапазоне концентраций. Сообщение было отредактировано sceptique - 13.06.2017 14:18 |
MMM Постоянный участник |
(sceptique @ 13.06.2017 13:40) Этот крокодил крошит всё, и без активатора-кальция, и в 4М-мочевине. Последняя даже увеличивает её активность. Изучайте структурную биологию и биокатализ - не будьте такими самоуверенными по поводу силы своего так называемого "образования". Ну если очень хочется можно проверить на сывороточном альбумине. Но, даже википидейной статье про ГТЦ написан 1М may increase the activity several times, like the addition of 0.5–1% sodium dodecyl sulfate (SDS) or Guanidinium chloride (3 M), Guanidinium thiocyanate (1 M) and urea (4 M). К сожалению или нет, но 4М ГТЦ не равно 4М мочевина. Ну и там чушь написана про увеличение активности. Активность фермента с хаотропами и ПАВами растет незначительно(скорее незначительно падает), а вот доступность субстрата для атаки активным центром фермента возрастает действительно иногда в разы. Но ничто не вечно под луною. С ростом концентрации детергента(хаотропа) нарушается структура активного центра и привет.
|
Horse-radish Участник |
(-Ъ- @ 13.06.2017 11:46) Кем проверено? В 2-4 М GTC собственноручно проверял, пытался приспособить "продвинуть" к своим китам - масло масленное. Черпаем знания из Вики! Мной проверено. Сожрать кусок ткани за 20 минут, конечно, не сожрет, но понадкусает знатно. |
sceptique Постоянный участник временной жизни |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(sceptique @ 13.06.2017 15:34) Ъ, не портьте свои киты протеиназой К, они и без нее отлично работают. А так станут еще дороже и недоступнее для большинства. Не бойтесь, те изыскания мною проводились практически 20 лет назад, ну примерно через некоторое время после выхода в свет этой злополучной статьи, вокруг чего эта дискуссия. Протеиназа К в лиофилизованном виде идет в другом ките для экспресс пробоподготовки и, кстати, вполне себе бюджетный кит, несмотря на дорогостоящие компоненты. В лизирующем растворе на основе 4 М и выше GTC с детергентами при правильном приготовлении некоторые ткани, свернувшаяся кровь, гели агарозные солюбилизируются практически без остатка и без Протеиназы К. Об обратимой инактивации ферментов в таком растворе я ничего не могу сказать, но возможно ДНК- и РНК-азы там действительно воскрешают при разбавлении этого раствора..., а Протеиназа К, которая легко дохнет при нагревании до 70-80 град - нет. За отзыв - |
MMM Постоянный участник |
(Horse-radish @ 13.06.2017 15:25) ГТЦ и без протеиназы неплохо растворяет белки. Это очень грязный опыт, который ничего не доказывает. Чистый опыт это, когда вы берете чистенький субстрат например актин или альбумин варите его в разных условиях и сравниваете на белковом форезе результат.
|
Horse-radish Участник |
(MMM @ 13.06.2017 16:12) ГТЦ и без протеиназы неплохо растворяет белки. Это очень грязный опыт, который ничего не доказывает. Чистый опыт это, когда вы берете чистенький субстрат например актин или альбумин варите его в разных условиях и сравниваете на белковом форезе результат. Выход РНК/ДНК из ткани значительно возрастает при обработки протеиназой в денатурирующих условиях, естественно по сравнению с выделением БЕЗ протеиназы. Надеюсь ТС сделал для себя выводы. А курсовую работу с "чистым опытом" по влиянию детергентов на активность протеиназы мне кажется в литературе описали уже не раз, но если хотите повторите и докажите всем, что я не прав. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |