Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
DeaRiate |
Может кто сталкивался с проблемой - при поставновке ПЦР-реал тайм слетает полплашки, сигнала просто нет, словно контроль. Реакция генотипирования с двумя зондами, ставила эту систему не один раз. Но сейчас переклинило и все пошло по одному месту. В верхних рядях почему-то пропал сигнал, и появляется по нарастающей к нижним рядам - где все окей. Смесь одна и та же, пробовала менять образцы местами - картина та же, внизу плашки образец проходит, сверху - практически нет. Сначала думали, что проблема с детекцией (несмотря на то, что такая проблема только у меня). Прибор откалибровали. Снова та же картина. Проверила на форезе - реакция не идет, почему то что-то ее ингибирует, но вопрос, что? Как? Я уже всю голову сломала.... Пока перешла на стрипы, с ними хоть как-то. Но опять же, выборочно сверху в 4-8 столбиках 1-3 ряд некоторые ячейки имеют более слабый сигнал у техн. повторов. Но ставить постоянно на стрипах не вариант, у кого-то была подобная ситуация? В чем может быть проблема? Что я такое могу заносить в реакцию? |
dk Постоянный участник Россия |
|
DeaRiate |
Когда я ставила 6 стрипов - тоже все прошло. Ставлю плашку - верхние ряды лежат... То есть какой-то косяк при постановке, но вот хоть убейте не понимаю в чем именно. Микс - рабочий, образцы тоже. Я уже просто отчаялась понять что не так Сообщение было отредактировано DeaRiate - 26.04.2021 00:01 |
dk Постоянный участник Россия |
У вас в настройках программы точно никакой градиент не включился случайно? Если у Вас верхние ряды не идут - очень уж похоже... Сообщение было отредактировано dk - 26.04.2021 10:51 |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
Я тоже склоняюсь к тому, что сказал dk - термоблок "чудит", т.е. работает на грани. У других проходит - значит, программа у них с запасом по времени, а у Вас на грани, балансируете со своим генотипированием и зондами в одной пробирке. Совет мой - добавьте для каждой температуры еще по 20 сек, а на денатурации доведите температуру до 95-96. Если все пойдет нормально на такой программе, везите прибор на починку. Дело только в нем (сказал он с умным выражением лица). |
banned sceptique-NMRguy Постоянный участник временной жизни |
Еще вариант: поставьте в планшете с "юбкой" или "полуюбкой" - если опять начнет всё получаться - то это точно термоблок. Проверьте, не проминаются ли Ваши пробирки в верхних рядах при их зажатии крышкой прибора. Если Ваши и других коллег пробирки отличаются и прибор откалиброван по высоте пробирок под другие - ваши анализы могут не идти. Сообщение было отредактировано banned sceptique-NMRguy - 27.04.2021 14:07 |
watchesbiz Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |