 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Кросслинкеры для co-ip
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 ivkaУчастник Родина  |
 21.09.2012 00:57
Сообщение было отредактировано ivka - 21.09.2012 00:58 |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
21.09.2012 05:03
Дальше что делать будете? Огласите цель, которую вы хотите достичь? Или вы хотите пришить антитела к Белку А(G) отдельно, чтоб на блоте не мешали? Так делают, только надо аккуратно это делать(дозу сшивки подбирать), можно ненароком сильно снизить(или даже убить) их аффиность. |
|
ivka Участник Родина |
21.09.2012 06:42
EGS я довольно эффективно использую в ChIP. |
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
21.09.2012 10:40
(ivka @ 21.09.2012 06:42)  Цель и смысл аналогично вот этомуЕГС я довольно эффективно использую в ЧИП. то-то ни одного мотива под трансфаком 
|
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
21.09.2012 10:44
(ivka @ 21.09.2012 06:42) Цель и смысл аналогично вот этомуЕГС я довольно эффективно использую в ЧИП. угу - час в ЕГС плус пол-часа в формалине
|
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
21.09.2012 11:00
(ivka @ 21.09.2012 06:42) Цель и смысл аналогично вот этомуEGS я довольно эффективно использую в ChIP.
|
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
21.09.2012 11:06
(ivka @ 21.09.2012 06:42) Цель и смысл аналогично вот этомуЕГС я довольно эффективно использую в ЧИП. ну тут может и нужен ЕГС ? |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
21.09.2012 11:10
|
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
21.09.2012 11:16
(ivka @ 21.09.2012 06:42) Цель и смысл аналогично вот этомуЕГС я довольно эффективно использую в ЧИП. угу - только где мотив для трансфака ? |
|
ivka Участник Родина |
21.09.2012 14:06
(guest: ммм @ 21.09.2012 12:10) ага! хотите сшить белки in vivo, вполне можно попробовать, раз ваш опыт говорит о том, что данная сшивка проникает через мембрану. Да, а вот ингибировать сшивку трисом, как у цитируемых ребят, глупо. Насколько мне известно трис сквозь мембрану не проходит.Собственно вопрос в том как декросслинкировать перед нанесением на форез. |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
21.09.2012 14:35
А в чем проблема? Вы же им уже пользовались. Procedure for Cleaving EGS Crosslinked Compounds with Hydroxylamine•HCl This procedure is modified from the method used by Abdella, et al. (1979). A. Materials Required • Hydroxylamine•HCl • Phosphate Buffered Saline (PBS) adjusted to pH 8.5 B. Procedure 1. Prepare 2M hydroxylamine•HCl by adding it to PBS and adjusting the pH back to 8.5. Prepare this solution immediately before use. 2. Warm the hydroxylamine•HCl solution quickly to 37°C and incubate equal volumes of sample and hydroxylamine solution for 3-6 hours with stirring. Alternatively, incubate for 6 hours at room temperature; however, efficiency mightbe lower. Note: An aliquot of the hydroxylamine cleaved sample, containing 13-14µg quantities of protein, can be examined by SDS-PAGE to determine effectiveness of the cleavage вместо PBS можете использовать 0.2М Na2CO3, рН подводить щелочью. |
|
ivka Участник Родина |
21.09.2012 18:25
Есть некоторая разница с ChIP, где для декросслинкирования достаточно удалить формальдыгидные сшивки с ДНК. Хм, да, надо читать до конца Сообщение было отредактировано ivka - 21.09.2012 20:29 |
|
ivka Участник Родина |
21.09.2012 18:27
(Guest @ 21.09.2012 12:16) угу - только где мотив для трансфака ? О каком мотиве можно говорить в случае nonDNA binding protein? |
|
watchesbiz Постоянный участник |
 09.12.2021 16:10
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.