 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Формалинизация эритроцитов
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 robox22 |
 31.03.2020 22:52
|
|
vb Постоянный участник |
31.03.2020 23:57
еще вместо формальдегида иногда акролеин хорошо себя показывает, но тоже есть ограничения. Сообщение было отредактировано vb - 31.03.2020 23:59
|
|
vb Постоянный участник |
01.04.2020 00:00
скорее всего придется в бумажную библиотеку ножками потопать. уж больно у вас методы старинные. |
|
Bear Постоянный участник Москва |
01.04.2020 10:19
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
01.04.2020 10:27
Каральник, Борис Вольфович. Эритроцитарные диагностикумы [Текст]. - Москва : Медицина, 1976. - 162 с. : ил.; 22 см. FB Б 76-4/1260 FB Б 76-4/1261 FB Арх |
|
Bear Постоянный участник Москва |
01.04.2020 10:32
Микробиология Хранение: FB 9 98-6/3381-6; Хранение: FB 9 98-6/3382-4; |
|
Bear Постоянный участник Москва |
01.04.2020 10:33
|
|
vb Постоянный участник |
01.04.2020 11:05
 . А с Каральником я внезапно встретился на конференции в 2014м .
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
01.04.2020 11:32
|
|
CowDoc Постоянный участник Middle East |
01.04.2020 13:03
(vb @ 01.04.2020 11:05)  Лиофилизированный препараты хранились десятилетиями, если все правильно сделать.Формалинизированные никаких проблем нет лиофилизировать (для наших определенных диагностических целей). А вот нативные, и чтобы они целенькими остались (тк с рядом вирусов, сразу садится активность, как формалинизируешь). Когда-то тж занимался. Дипломница даже у меня была по этой теме. Посмотрю, что найду. Но уже написали принцыпы. Топикстартер, концентрированный брал ф., + рН/отмывка, вот и проблемы. |
|
CowDoc Постоянный участник Middle East |
01.04.2020 13:10
Методика, предполагающая фиксацию и сенситизацию (Без этих этапов процесс лиофилизации будет более простым) Фиксация эритроцитов человека *либо формалином (при комнатной температуре смешать равные объемы 10% клеточной суспензии и 10%–го раствора формалина в PBS. Инкубация 8 часов при 37°С . Далее клетки промывают трижды в дист. воде и 1 раз в физ. растворе. Конечную 20%-ную суспензию клеток в физ. растворе стабилизируют 0,1% азидом и хранят в холодильнике в течении нескольких месяцев; *либо глютаральдегидом (заранее готовим буфер, смешиванием 1-го объема PBS, [0,15М, pH 8,] с 9-ю объемами физ. раствора и 5-ю объемами дист. воды. Этот буфер охлаждаем до +4°С и в нем готовим 1% раствор глютаральдегида. В 1%-ном растворе глютаральдегида создают 1% суспензию клеток, которую инкубируют 30 минут при +4 С. Затем клетки отмывают 5 раз дистиллированной водой, 5 раз – физ. раствором. 20%-ную суспензию клеток в физ.растворе стабилизируют 0,1% азидом и хранят в холодильнике [ ] Тонирование и сенситизация эритроцитов человека используют либо tannic acid, либо chromium chloride. Вариант сенситизации 1. Смешивают равные объемы 2% суспензии фиксированных клеток и раствор tannic acid (1/15 000), выдерживают 40 минут при 37°С. Далее клетки промывают дважды и конечный осадок взвешивают до 2%-ной суспензии в растворе антигена. Раствор антигена готовят на смеси PBS и физ. раствора. Клетки выдерживают 50 минут при 37°С. Далее клетки промывают дважды и используют сразу, либо дополнительно стабилизируют формалином (конц. не указана) для более позднего использования. Вариант сенситизации 2. Эритроциты взвешивают в виде 2% суспензии в растворе антигена. Наиболее оптимальную концентрацию раствора антигена находят в предварительных экспериментах. Время инкубации – до часа при 37°С. Далее на каждый миллилитр суспензии клеток приливают 0,4 миллилитра 0,8%-ного раствора chromium choride Cr Cl3*6H2O на дистиллированной воде. Раствор chromium choride готовят непосредственно перед использованием из 10%-ного стока. Клетки выдерживают с агентом 7-10 минут, после чего промывают дважды физ. раствором. Фиксированные клетки, сенситизированные по обоим вариантам, хранятся при 4°С несколько недель. Для более длительного хранения их лиофилизируют [ii]. Буфера для лиофилизации К 2%-ной суспензии клеток (фиксированных) в растворе антигена сразу после времени, достаточного для сенситизации, приливали равный объем 6%-ного раствора формалина. рН=7,2. Формалин вливаем плавно, медленно перемешивая. Клетки выдерживаем с формалином при 37°С , 3-4 часа. Это делается для дополнительной стабилизации комплекса эритроцит-сенситизатор. Затем клетки отмывают дважды в смеси (½ физ-раствора+1/2 PBS). Конечный осадок ресуспендировали до 6%-ной концентрации в PBS, содержащем 6% сыворотки [ii]. Полученную смесь разливают в ампулы/пенициллинки по 1-3 мл, охлаждаю на сухом льде, погружением в жидкий азот на 30 секунд или в морозильной камере до -70˚С, -80˚С. Если это не возможно, охлаждают в камере лиофилизатора до -40 ˚С со скоростью -1С/мин. Лиофилизация эритроцитов барана Забор крови барана Цельную кровь забирали в бутыль, содержащий раствор Альсевера (20,5 г глюкозы, 0.2 г NaCl, 8 г цитрата натрия, 0.55 г лимонной кислоты на 1 литр дистиллированной воды). Наполнение бутыля с раствором Альсевера проводят до тех пор, пока соотношение объемов кровь : раствор не станет 1:1. Фиксацию эритроцитов проводят обязательно в тот же день [ ]. Эритроциты следует промыть в охлажденном физ. р-ре не менее 5 раз, при скорости вращения центрифуги не более 1000 g. Время осаждения – 15 минут/цикл. Конечный осадок ресуспендировать в PBS до 10-12% концентрации. Фиксация эритроцитов барана (без сенсибилизации) К нативной крови барана, разведенной вдвое раствором Альсевера, либо к 10% суспензии промытых эритроцитов в PBS добавляют: а) равный объем 0,3-0,5% раствора глютеральдегида или б) равный объем 4% раствора формалина в цитрате натрия (0.15 M). Раствор альдегида приливают медленно, плавно перемешивая. Смесь оставляют на ночь при 37°С на шейкере в медленном режиме. Затем клетки промывали 5 раз в PBS при 1000 g в течение 20 минут. [i] Фиксация эритроцитов человека (без сенсибилизации) *либо формалином (при комнатной температуре смешать равные объемы 10% клеточной суспензии и 10%–го раствора формалина в PBS. Инкубация 8 часов при 37°С . Далее клетки промывают трижды в дист. воде и 1 раз в физ. растворе. Конечную 20%-ную суспензию клеток в физ. растворе стабилизируют 0,1% азидом и хранят в холодильнике в течении нескольких месяцев; *либо глютаральдегидом (заранее готовим буфер, смешиванием 1-го объема PBS, [0,15М, pH 8,] с 9-ю объемами физ. раствора и 5-ю объемами дист. воды. Этот буфер охлаждаем до +4°С и в нем готовим 1% раствор глютаральдегида. В 1%-ном растворе глютаральдегида создают 1% суспензию клеток, которую инкубируют 30 минут при +4 С. Затем клетки отмывают 5 раз дистиллированной водой, 5 раз – физ. раствором. 20%-ную суспензию клеток в физ.растворе стабилизируют 0,1% азидом и хранят в холодильнике [ ] ё) Наиболее эффективным методом считают двойную фиксацию эритроцитов глютаральдегидом и сульфосалициловой кислотой: стоковый раствор 25% глютаральдегида обрабатывают активированным углем, разводят до 1% смесью двух объемов PBS и одного объема воды. Эту смесь охлаждают на водяной бане и ею разбавляют отмытые эритроциты барана до формирования 2% суспензии. Экспозиция длится 30 минут при 4°С и периодическом перемешивании. Затем клетки промывают трижды PBS, ресуспендируют в PBS до 10%, вносят поливинилпирролидон до 1% и приливают равный объем 1,5% сульфосалициловой кислоты в PBS, в котором также содержится 1% поливинилпирролидона. Клетки выдерживали 30 минут при комнатной температуре, плавно перемешивая. Затем их отмывают трижды и подвергают сенситизации [ ].
|
|
CowDoc Постоянный участник Middle East |
01.04.2020 13:11
|
|
vb Постоянный участник |
01.04.2020 17:02
|
|
vb Постоянный участник |
01.04.2020 23:47
перспектива их применения в микробиологии//Ж. микробиоло- гии.-1965.-N 2.-С.100. 2.Азаренок К.С. К возможности обнаружения токсина в крови больного ботулизмом при помощи реакции пассивной гемагг- лютинации// Ж. микробиол.-1970.-N 7.-С. 112. 3.Ахметов Н.С. Общая и неорганическая химия.-М.:В.Ш., 1981.-С. 358-359. 4.Барбан П.С. Fab-фрагменты антител как основа антимикробных иммуноглобулиновых препаратов//Автореф. док. дисс.-М.-1980. 5.Барбан П.С. О механизме сенсибилизации эритроцитов белками в связи с пространственными взаимоотношениями иммуногло- булинов и их фрагментов с поверхностью танизированных эритроцитов//Ж. микробиологии.-1980.-N 6.-С.103. 6.Баяр Г.А., Коникова Р.Е., Крылов В.Н. методике постановки реакции непрямой гемаггютинации с эритроцитами, сенсиби- лизированными антителами//Ж. микробиологии.-1966.-N 7.-С. 97. 7.Березкина Г.В., Никитюк Н.М., Филимонова И.Н., Опочинский Э.Ф. Диагностическая эффективность листериозного эритро- цитарного антигенного диагностикума.//ЖМЭИ.-1993.-N 6.-С. 93-94. 8.Вайсман И.Ш. и др.Исследование реакции непрямой гемагглю- тинации на уровне ультраструктур//Ж. микробиоло- гии.-1978.-N 7.-С.136. 9.Гайдамович С.Я., Клиссенко Г.А., Шаноян Н.К. Реакция агг- лютинации сенсибилизированных антителами эритроцитов ви- русом колорадской клещевой лихорадки// Вопр. ви- - 45 - русол.-1974.-N 2.-С. 169. 10.Горисюк А.Ф., Голодюк Л.Ф. Формирование противодифтерий- ного иммунитета при иммунизации кроликов соматическими антигенами дифтерийной палочки// В кн.: Вакцины и сыво- ротки.-Киев, 1973.- вып. 7.-С. 57. 11.Дорошкевич Л.Ц. О модификации метода сенсибилизации эрит- роцитов антителами с помощью солей хрома//В кн.: Вопросы серологической диагностики.-Алма-Ата,1975.-С. 45. 12.Дьяченко Н.С.//Пассивная гемагглютинация и ее применение в вирусологии.-Киев:Наукова думка,1979. 13.Иммунологическая диагностика вирусных инфекций/Под ред. Т.В.Перадзе,П.Халонена.-М.:Медицина,1985.-С. 98-120. 14.Каральник Б.В. Научные основы изготовления эритроцитарных диагностикумов//Ж. микробиологии.-1977.-N 4.-С.29. 15.Каральник Б.В.,Трошина Г.И. О характере сил взаимо- действия эритроцитов и бактериальных сенситинов. Сообще- ние 1//ЖГМЭИ.-1969.-N 2.-С.150. 16.Каральник Б.В. Количественный анализ процесса взаимо- действия эритроцитов и бактериальных антигенов. Сообщение 8//Ж. микробиологии.-1972.-N 9.-С. 77. 17.Каральник Б.В., Царевский Ю.П., Шамардин В.А.//Эритроци- тарные белковые диагностикумы.-Алма-Ата: Наука, 1981. 18.Каральник Б.В. Эритроцитарные диагностикумы.-М., 1976. 19.Клиссенко Г.Б.,Лаврова Н.А.,Аннун К. и др. Реакция непря- мой гемагглютинации для индикации вируса Западного Нила в крови животных и комарах при экспериментальной инфекции// В кн.:Экология вирусов.-М.,1980.-С. 71-76. 21.Кондрашова З.Н. и др. Реакция непрямой гемагглютинации как группоспецифический тест диагностики некоторых ви- русных заболеваний//В кн.: Вопросы медицинской вирусоло- - 46 - гии.-М., 1975.-С. 156. 22.Коникова Р.Е., Баяр Г.А. К усовершенствованию методики консервирования эритроцитов для реакции непрямой гемагг- лютинации//Лабораторное дело.-1967.-N 4.-С. 242. 23.Коникова Р.Е.,Баяр Г.А. Методика консервирования сенсиби- лизированных эритроцитов для реакции непрямой гемагглюти- нации//Лабораторное дело.-1965.-N 2.-С.73-74. 24.Коникова Р.Е.,Носков Ф.С.,Баяр Г.А. Применение РНГА для выявления вирусов группы клещевого энцефалита//Вопр. ви- русол.-1968.-N 2.-С.159-163. 25.Коникова Р.Е.,Носков Ф.С.,Баяр Г.А. Разработка эритроци- тарных препаратов для выявления антигенов и антител в РНГА//В кн.:Реакция непрямой гемагглютина- ции.-Л.,1981.-С.13-31. 26.Корнеева Э.П.,Прозорова И.Н.,Шварцман Я.С.,Ильенко В.И.Использование РНГА для определения антител к вирусу японского энцефалита//Лабораторное дело.-1975.-N 12.-С.729. 27.Крам Д., Хэммонд Дж. Органическая химия.-М.: Мир, 1967.-С. 319-320. 28.Лакин Г.Ф. Биометрия.-М.:В.Ш.,1980. 29.Леви М.И., Орлова Г.М., Сучков Ю.Г. Серологические иссле- дования при чуме//Труды Азербайдж. противочумной стан- ции.-1962.-т. 3.- С. 281. 31.Лещук С.И. Совершенствование иммунодиагностикума для оп- ределения HBs Ag методом реакции обратной пассивной ге- магглютинации и его клинико-эпидемиологическое испытание в Восточной Сибири. Дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н. Ир- кутск, 1991. 32.Макаров К.А., Кибардин С.А. Иммобилизированные биопрепа- раты в медицине.-М, 1980. - 47 - 33.Меньшов П.И., Шмутер М.Ф. Подбор оптимальных методов фор- малинизации эритроцитов для приготовления стойких эритро- цитарных диагностикумов для чумы и бруцеллеза// Пробл. особо опасн. инф.- 1969.-вып. 6.-С. 231. 34.Образцова Е.М. Антигенные эритроцитарные препараты для обнаружения антител к Yersinia enterocolitica сероваров О:5,О:7,8;О:6,30//Ж. микробиологии эпидемиологии и имму- нобиологии.-1993.-N 6.-С. 91-92. 35.Оловников А.М. Определение содержания антигенов по агглю- тинации эритроцитов, покрытых поликонденсированными тет- раазотатом диаминодифениламина белками антисыворотки// ДАН СССР.-1966.-т. 169.-С. 1180. 37.Полевая О.Ю.,Ковалев И.Е. Принципы синтеза конъюгирован- ных антигенов//Химико-фармацевтический жур- нал.-1978.-т.12.-N 2.-С.8. 38.Полинг Л., Полинг П. Химия : пер. с англ.-М.:"Мир", 1978.-С. 482-483. 39.Радавский Ю.Л., Зайцева Л.С., Кухарь В.П. Бифункциональ- ные поперечносшивающие реагенты и методы получения конъ- югатов пептид-носитель// Биополимеры и клетка.-1993.-т. 9.-N 4.-С. 3-21. 40.Сафронов Б.Н. и др.//Лаб. дело.- 1964.-N 9.-С. 52. 42.Справочник по микробиологическим и вирусологическим мето- дам исследования/ Под ред. М.О. Биргера.-М:"Медици- на",1982. 43.Справочник химика.-М.:ГНТИХЛ, 1963.-т. 2.-С. 417-417. 44.Субботина Ю.Л., Левинсон В.И. Количественное определение - 48 - иммуноглобулинов в реакции торможения гемагглютинации. Сообщение 2. Сравнение с результатами радиальной иммуно- диффузии//ЖМЭИ.-1980.-N 6.-С. 76-81. 45.Сучков Ю.Г.,Канатов Ю.В. Сенсибилизация формалинизирован- ных эритроцитов иммунными гаммаглобулинами//Ж.микробиоло- гии.-1965.- N 8.-С.63. 47.Царевский Ю.П., Каральник Б.В. Молекулярные аспекты взаи- модействия альбумина и танизированных эритроцитов.Сообще- ние 1//Ж. микробиологии.-1975.-N 4.-С.98. 48.Химический энциклопедический словарь.-М.: "Сов. энцикло- педия",1983.-С. 133, 689. 49.Химия и функция белков/Гауровиц Ф.-М.:1965. 50.Черняев Ю.А., Бондаренко Т.В. Сенсибилизация эритроцитов для РПГА с помощью хлористого хрома и методы их консерви- рования.//В кн.: Вопросы ветеринарной вирусологии.-Влади- мир, 1976.-С. 142-143. 52.Эссель А.Е. Реакция непрямой гемагглютинации.-М., 1964. 53.Boyden S.V. The adsorption of proteins on erythrocytes treated with tannic acid and subsequens hemagglutination by antiprotein sera// J. exp. Med.-1951.-v. 93.-p. 107. 54.Edelberg R.G.// Cell. Compar. Phisiol.- 1953.-N 41.- P. 37. 55.Godal T. On the adsorption of thyroglobulin to formalinizid and tannid human erythrocytes// Acta pathol. microbiol. Scand.-1966.-v. 68.-p. 249. 56.Grmlich F., Mohring D., Muller H.E. Quantitative - 49 - Untersuchungen zur Beladbarkeit normaler und vorbehaandelter Kaninchenerythrocyten mit Humanalbumin-I(131) und gammaglobulin-I(131)//Ztscr. Hyg. Infektionskrankh.-1963.-Bd. 149.-s. 187. 57.Kozin F., McCarty D.J. Molecular orientation of immunoglobulin G adsorbed to microcristalline monosodium urate monohydrate//J. lab. clin. Med.-1980.-v. 95.-p. 49. 58.Kumagai R.N., Balducci D. Analisi dei fattori infuenzanti la sensibilita della emoagglutinazione e della inibizione della emoagglutinazione di emazie trattate co acido tannico e coningate con protein// Rend. ist. super. sanit.-1959.-v. 224. -p. 368. 59.Martiner O.V. e.a. Purfication of the extracellular opacity factor of a strain of group A Streptococcus N type 2// J. Gen. Microbiol.-1978.-v. 105.-p. 29. 60.Reddy D.R., Hariprasada R., Padma M.C., Lopal V.R. Haemagglutination test to detect Tobacco Mosaic Virus antigens // Indian J. exp. Biol.-1969.-v. 7.-p. 162. |
|
robox22 |
02.04.2020 20:41
|
|
vb Постоянный участник |
02.04.2020 22:44
(robox22 @ 02.04.2020 18:41) Большое спасибо всем кто откликнулся!ты заходи, если что. если бюджет позволяет - лучше нанять человека, делавшего это руками  , чтобы самому на все грабли не наступать
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
03.04.2020 10:47
1. использовали свежую консервированную кровь барана; 2. Кровь разбавляли раствором Олсвера; 3. К 25 % взвеси отмытых эритроцитов (400 мл), при интенсивном перемешивании, постепенно добавляли 160 мл 50% нейтрального формалина. 4. Полученную смесь два часа грели на водяной бане 37 градусов, 5. центрифугировали 3000-4000 оборотов. 6. Отмытые физраствором эритроциты выдерживали двое суток при 4 градусах. |
|
Daemonarchestratygos Постоянный участник |
15.04.2020 01:43
 
|
|
Li-Cor |
15.04.2020 21:55
(Bear @ 03.04.2020 11:47) мы использовали такой вариант:1. использовали свежую консервированную кровь барана; 2. Кровь разбавляли раствором Олсвера; 3. К 25 % взвеси отмытых эритроцитов (400 мл), при интенсивном перемешивании, постепенно добавляли 160 мл 50% нейтрального формалина. 4. Полученную смесь два часа грели на водяной бане 37 градусов, 5. центрифугировали 3000-4000 оборотов. 6. Отмытые физраствором эритроциты выдерживали двое суток при 4 градусах. "использовали свежую консервированную кровь барана" © видмед
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
15.04.2020 22:17
(Li-Cor @ 15.04.2020 22:55) "использовали свежую консервированную кровь барана" ©видмед  тут нет противоречия
|
|
Li-Cor |
15.04.2020 22:22
(Bear @ 15.04.2020 23:17) тут нет противоречияпонял
|
|
Li-Cor |
15.04.2020 22:27
(vb @ 01.04.2020 18:02) Как много у нас тут специалистов по эритроцитарным диагностикумам. А то все ПЦР да пцря формалинил эритроцыты питуха как Геном Стандарт для проточки
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
15.04.2020 22:39
Сообщение было отредактировано Bear - 15.04.2020 22:40 |
|
Li-Cor |
15.04.2020 22:44
(Bear @ 15.04.2020 23:39) Тут важно кровь свежую (сразу из барана) консервировать
|
|
Bear Постоянный участник Москва |
16.04.2020 08:32
|
|
Li-Cor |
16.04.2020 19:56
(Bear @ 16.04.2020 09:32) Li-Cor, круто, например!видмеды едят форел а не баранов |
|
Li-Cor |
16.04.2020 20:22
(Bear @ 16.04.2020 09:32) Li-Cor, круто, например!зря царя свергнули в эпоху COVIR-19 |
|
watchesbiz Постоянный участник |
 28.10.2021 06:51
|
|
IAM1688 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
28.10.2021 11:32
and arguably, more important. Good content is relatively easy to create. Most people don’t realize it, but everybody has interesting things to say. the main point of your article. It gives the reader a clear picture Good technique is harder it can seem abstract and nuanced how the main points connect with the How many times have you seen rows and rows of dense paragraphs and lost interest |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
25.12.2022 10:16
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.