Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Когда используют немеченый изотипический контроль?
Компания Biocommerce - официальный дистрибьютер продукции компаний Miltenyi Biotec GmbH (Германия) и RanD S.r.l. (Италия).
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 28.05.2013 12:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги!

А можно использовать немеченый (неконъюгированный с FITC, например) изотип-контроль? Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела? Почему же все-таки все используют меченые изотип-контроли? И зачем производят немеченые?
Участник оффлайн! Annabel
Участник
Бостон, США



 прочитанное сообщение 28.05.2013 21:30     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Можно ли забить Fc-неспецифику (точнее, конечно, Fc-специфику smile.gif) изотипом? Можно, наверное, но лучше FcBlock (http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/uses_of_fcblock.jsp).

Меченые изотип-контроли используют не для забития Fc связывания, а чтобы учесть в общем флуоресцентном фоне долю неспецифического связывания меченого антитела И связывания антитела Fc-рецеторами. В ИДЕАЛЕ изотип-контроль всем таков же, каково ваше меченое антитело, только без специфики Fab. В РЕАЛЬНОСТИ все бывает по-разному smile.gif

Немеченые изотип-контроли кто-то использует на первом этапе двуступенчатого окрашивания, параллельно с немечеными специфическими антителами. Та же история - чтобы оценить, сколько к клетке прилипнет неспецифики, которая на втором этапе окрашивания вся засияет как настоящая smile.gif.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 29.05.2013 17:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Annabel, большое спасибо за ответ. Не могли бы Вы рассказать поподробнее про двуступенчатое окрашивание параллельно с немечеными специфическими антителами. Какая цель у такого окрашивания?
Участник оффлайн! Annabel
Участник
Бостон, США



 прочитанное сообщение 29.05.2013 19:13     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Допустим, у вас есть рецептор АБВГД, к которому меченые антитела не продают. Вы берете свое, скажем кроличье, анти-АБВГД антитело и инкубируете с клетками. Потом берете анти-кроличье FITC-меченое вторичное антитело и красите. Параллельно вы инкубируете клетки с неспецифическим (изотипом) кроличьим антителом и тоже красите анти-кроликом FITC. Флуоресценция во второй пробирке - ваш фон, то есть неспецифика+Fcсвязывание+аутофлуоресценция клеток.
Участник оффлайн! Chrus
Участник



 прочитанное сообщение 30.05.2013 09:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Спасибо, Annabel, теперь все ясно!
Участник оффлайн! Леонид В
Постоянный участник
Квебек



 прочитанное сообщение 10.05.2018 19:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

ответ уже дан, но попробую досунуть пять копеек

(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  
А можно использовать немеченый (неконъюгированный с FITC, например) изотип-контроль?

можно и нужно как контроль для непрямой иммунофлюоресценции


(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  Можно в одну пробирку добавить немеченный изотип, забивающий всю Fc-неспецифику, и меченые целевые антитела?

можно, но не понятно зачем.
Вам забить=блокировать или проконтролировать?
если забить, то надо забивать (специфику = эпитоп да не тот / специфику другого конца (FC) / неспецифику). Соответственно использовать специфический белок, пептид / иммуноглобулин / BSA, желатин, температуру, детергент и паки и паки

проконтролировать это радикально из другой оперы и именно для этого
(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение  все используют меченые изотип-контроли


(Chrus @ 28.05.2013 05:58)
Ссылка на исходное сообщение И зачем производят немеченые?

как контроль для непрямой ИФ

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер
Участник оффлайн! Tomter




 прочитанное сообщение Сообщение на английском  12.07.2018 13:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Your project is an interactive tarot deck which is filled with beautiful and symbolic imagery, the history and myths of the universe. I want to know more about your projects and i would like to share this information in Marketing Assignment Help
London Assignment writers
IP-штамп: frieWuSjXiOuw
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  14.07.2018 13:25     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

The London Assignment Writers at Students Assignment Help are the great degree holder and Ph.D. degree professionals. We are perfect to finish all your work within the offer time line.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Клеточные технологии · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.07.18 05:22
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft