 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Immunohistochemistry -- DAB staining + fluorescence --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
 abime |
 09.10.2008 18:03
ХОчу спросит - кто нибудь делал ДАБ покраску (DAB) и флуоресценцию одновременно? Надо покрасить BrdU по ДАБ, и на том же срезе CD31 с лубыми вторичными флюоресцентными антителами (Алеха 555, 647, 488). Вроде говорят что такого нельзя проделат. Но очень надо. Клетки перед трасплантацией в мозг крысы были покрашены BrdU изначально, но их 2 разных линии - одна експрессирует CD31 , другая нет. Надо их различить и посчитат с помощью ДАБ. Спасибо большое. |
|
AE- Постоянный участник |
09.10.2008 23:24
(abime @ 09.10.2008 16:03)  Надо их различить и посчитат с помощью ДАБ.А почему нельзя купить флюоресцентные анти BrDU антитела? Или обратно СD31 покрасить с другой ферментативной меткой, например конъюгатом с щелочной фосфатазой. Тогда и огород городить не надо будет. На мой взгдяд вам правильно говорят не мешайте теплое с мягким. Кстати неплохо бы указать какие у вас срезы, замороженные или парафиновые. PS тему наверное можно из беседы и в тематический форум перекинуть. |
|
Irish Владимир |
10.10.2008 12:25
Спасибо! |
|
abime |
10.10.2008 14:04
Да нет, все есть, можно покрасить хоть 5 каналов с флюоресценцией. Проблема имеено визуализировать более чисто, так как я напрмер поняла что считать количество клетое по флюоресценции очень трудно, получается на половину меньше, чем когда видишь через bride field. Ну и кроме того, еще нужно выявить некотурую полиамидгликольную субстанцию (введенную при трасплантации тоже), и она выявляется только через DAB, гематоксиллин, и т.д. Птосто очень долгая история и много всего наповтыкано в мозги, поэтому не стала сразу раводить длинный разговор - извините. А крашу я срезы на слайдах уже. То есть с криостата сразу на слайды срезы апплицировала, и в -20С потом. Спаибо большое за идею. - Только можно поподробнее про щелочную фосфатазу. Это не флуоресцентная краска? и сней можно BrdU и CD31 различить крася одновременно? Спасибо! |
|
abime |
10.10.2008 14:07
не знаю как насчет вашей "зверушки".. похожа кажеться на замораживающую мокротому просто. |
|
AE Постоянный участник |
10.10.2008 14:27
(abime @ 10.10.2008 12:04) Спаибо большое за идею. - Только можно поподробнее про щелочную фосфатазу. Это не флуоресцентная краска? и сней можно BrdU и CD31 различить крася одновременно? Фосфатаза, как следует из названия, фермент. Для которого сущесвует некоторое количество субстратов, дающих нерастворимые яркоокрашеные продукты, некоторые из которых совместимы с DAB. В смысле сущесвенно различаются по цвету, чтобы можно было понять где продукт чего при двойном меченье. (чтобы не разводить здесь совсем уж ликбеза отошлю вас к каталогам ну хоть Dako или Vector). На мой скромный взгляд к ферментативным меткам нужно прибегать тогда, когда, либо по-другому ну совсем тяжко (парафиновые срезы часто дают большую автофлюоресценцию, лаба не экипирована соответсвующей аппаратурой), либо когда в каких-либо целях нужно получить препарат для длительного хранения. В остальных случаях мне кажется лучше пользоваться флюоресцентными метками. То что вы пишите про счет клеток, так это зависит не столько от метки сколько от контрстeйнинга. Точно для тех же целей что вы собираетесь использовать гематоксилин, (для неспецифической покраски ядер) вы можете использовать флюоресцентные метки, начиная с Dapi и прочими красками. Если у вас микроскоп с пятью каналами флюоресценции, то что-нибудь да подберете. |
|
abime |
10.10.2008 15:03
Спасибо за информацию, конечно мне просто хотелось знать конкретные возможности фосфотазного мечения. Отправляюсь проводить ликбез  Про множественный стэйнинг абсолютно согласна - проблемы с бекграундом всегда и пости у всех. И про классический вариант DAPI/другой маркер я тоже согластна. Но как я уже писала, другая субстанция введегная в мозг наряду с клетками требует чего либо "не флуоресцентного". Спасибо огромное. |
|
watches89 Постоянный участник |
 23.02.2023 15:38
|
| « Предыдущая тема · Биофизика и матметоды в биологии · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.