Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
kglebov Постоянный участник Германия Гёттинген |
Подскажите ,пожалуйста, дешевый и быстрый способ выделения ДНК их мух. Но только без жидкого азота и Prot.K Заранее спасибо.... <img src="graemlins/shuffle.gif" border="0" alt="[смущение]" /> |
Veshka Постоянный участник Москва |
|
|
|
VSK Участник |
-------------- Выделение геномной ДНК из личинок и имаго Musca domestica методом солевой экстракции Одну личинку или муху растирали в 200 мкл лизирующего буфера (160 мМ сахароза, 100 мМ Tris-HCl pH=8.0, 80 мМ EDTA pH=8.0, 0,5% SDS) с добавлением протеиназы К до конечной концентрации 0,5-1,0 мг/мл и инкубировали при 58-60оС ночь. К лизату добавляли 1V (200 мкл) 4,5 М NaCl и хорошо перемешивали, а затем добавляли 0,75 V (300 мкл) смеси хлороформа и изоамилового спирта (24:1), после чего интенсивно встряхивали. и центрифугировали 5 мин при 14000 об/мин. Водную фазу отбирали в чистую пробирку, добавляли 2,5 V 96% этанола для осаждения ДНК, перемешивали и центрифугировали 3 мин 14000об/мин. После удаления супернатанта осадок промывали 0,5 мл 70% этанола (охлажденным до -20оС). После удаления этанола осадок высушивали 30-40 мин при комнатной температуре а затем ресуспендировали в 50-200 мкл тридистиллированной воды или буфера ТЕ. |
Ufa1688 Постоянный участник |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |