Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Леонид В Постоянный участник Квебек |
Идет скрининг концентрация/время на токсичность. Образцов много, сил мало, т.е. вручную, посадкой 30-ти нанолаборантов с микропипетками не сделаешь. Плашка 96 л в ней HEK. Нужно, не убирая среды с сывороткой (!) добавить нечто (кокаин, лидокаин, аккутазу не предлагать по финансовым соображениям), чтоб клетки отклеились, но ни одной мертвой не прибавилось. Сначала думал, что простой встряски плашки будет достаточно. CytoFlex трясет плашку так, что у меня, будь я одноклеточным адгерентным, голова бы сразу отлетела. НЕК-и в особой адгерентности не замечены, но не отлипают. По краям лунки остаётся много прилипших, а мертвые, само-собой смываются все. Результаты, соответственно, неадекватные. Активное пипетирование 12-каналкой даёт слишком много агрегатов клеток (SSC-W двойной и больше), а мертвые учитываются по одиночке. Результаты, соответственно, неадекватные. Заливали EDTA, не убирая среды с сывороткой. он убивает клетки за милую душу. Добавляет десяток процентов мертвых (контролем служит фото лунки, где есть hoechst и PI. На фото 1% мертвых, с EDTA - 10%) Sigma, туды ея в качель, не открывает секрет элексира в котором цитрат, EDTA и почему-то глицерол (зачем ???). Можно, конечно, протестировать кучу-тучу концентраций этих трёх магических веществ, но прежде, чем это делать имею желание спросить. Может кто-нибудь уже бился лбом о подобное? “Если вы не отзовётесь, мы напишем в researchgate" |
Annabel Участник Бостон, США |
|
Леонид В Постоянный участник Квебек |
(Annabel @ 31.03.2018 00:31) Прямо в таком виде не бились, но похожий протокол у меня есть. В нем конечная концентрация цитрата - 15 mmol, а EDTA - от 2 до 5 mmol. О! обошлись без “спортлото“, спасибо ... А у протокола есть ссылка? Вдруг статья будет, рецензенты не любят без ссылки. А конечная концентрация работает в присутствии сыворотки? Ведь в ней, родимой, вся загвоздка. И кальций тоже в ней. Он же, по совместительству, и загвоздка. Кстати, а какие мысли по поводу глицерола? Что он делает у Сигмы в растворе? (ну, плавает, это понятно, а кроме ?) Сообщение было отредактировано Леонид В - 31.03.2018 09:21 |
Annabel Участник Бостон, США |
Цитратный буфер я бы просто нагуглила. Вот, например (под лозунгом "не надо так делать со стволовыми клетками!) - Сообщение было отредактировано Annabel - 31.03.2018 23:45
|
Annabel Участник Бостон, США |
|
Леонид В Постоянный участник Квебек |
(Annabel @ 31.03.2018 16:42) под лозунгом "не надо так делать со стволовыми клетками!) - Спасибо! “всё чудесатее и чудесатее“ интересно, какова роль гипертоничности раствора? Сжимает клетки и они отлипают “под давлением“. Может и глицерол каким-то схожим образом действует? Да-с ... наука - сложная штука. И почему я не пошел в ассенизаторы. Сидел бы сейчас, пил пиво и мечтал бы о судьбе великого ученого, который не как я, в г...не, а весь в белом халате, в высоких материях витает и высокую зарплату получает. Ну хорошо, допустим у Сигмы 5% glycerol. Он уже не вязкий, т.е. практически как вода. Пипетируется без проблем. Итого, если верить гуглу и калькулятору стибренному у сынишки: 5g/100ml glycerol = 92.09 g/mol 5/92.09 ~ 0.05 mol of glycerol in 100ml = 0.5 mol/l = 0.5 M Glycerol is a non-electrolyte, so, its osmolarity and molarity are the same. 0.5 M = 0.5 osM Осмотическое давление это π = MRT M is the molar concentration of dissolved species (units of mol/L). R is the ideal gas constant (0.08206 L atm mol-1 K-1, or other values depending on the pressure units). T is the temperature on the Kelvin scale. будем считать, что идеальный газ и температура, непременно по Кельвину, в Walkersville US и на рідной квебенщине одинаковые. В статье оптимум, который они доводят хлоридом калия — 0.570 osM Вам эта цифра ничего не напоминает? или я совсем химию забыл и нажимаю мимо кнопок в куркуляторе ? Сообщение было отредактировано Леонид В - 01.04.2018 03:35 |
Guest IP-штамп: frRDqEnu8dhhI гость |
(Леонид В @ 01.04.2018 03:01) Спасибо!
“всё чудесатее и чудесатее“ интересно, какова роль гипертоничности раствора? Сжимает клетки и они отлипают “под давлением“. Может и глицерол каким-то схожим образом действует? Да-с ... наука - сложная штука. И почему я не пошел в ассенизаторы. Сидел бы сейчас, пил пиво и мечтал бы о судьбе великого ученого, который не как я, в г...не, а весь в белом халате, в высоких материях витает и высокую зарплату получает. Ну хорошо, допустим у Сигмы 5% glycerol. Он уже не вязкий, т.е. практически как вода. Пипетируется без проблем. Итого, если верить гуглу и калькулятору стибренному у сынишки: 5g/100ml glycerol = 92.09 g/mol 5/92.09 ~ 0.05 mol of glycerol in 100ml = 0.5 mol/l = 0.5 M Glycerol is a non-electrolyte, so, its osmolarity and molarity are the same. 0.5 M = 0.5 osM Осмотическое давление это π = MRT M is the molar concentration of dissolved species (units of mol/L). R is the ideal gas constant (0.08206 L atm mol-1 K-1, or other values depending on the pressure units). T is the temperature on the Kelvin scale. будем считать, что идеальный газ и температура, непременно по Кельвину, в Walkersville US и на рідной квебенщине одинаковые. В статье оптимум, который они доводят хлоридом калия — 0.570 osM Вам эта цифра ничего не напоминает? или я совсем химию забыл и нажимаю мимо кнопок в куркуляторе ? |
« Предыдущая тема · Клеточные технологии · Следующая тема » |