Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Gariaev Постоянный участник |
(Alexus @ 08.01.2018 13:39) Спасибо за ответ. Синтез белка будет осуществляться в клетках яичника китайского хомячка (СНО), соответственно брал последовательности с пометкой murine, проблем с фолдингом нехимерных форм по идее возникнуть не должно. Раз с линкерами подгадать не получается, придется видимо пробовать различные комбинации. Еще такой вопрос - если в обоих белках присутствует сигнальная последовательность, то ее из второго (с СООН-конца) следует вырезать, верно я себе это представляю? Тут большая многолетняя дискуссия идет, сильно запакощенная троллями. Фишка в том, что 31 из представителей животного мира имеют несколько различающиеся триплетные коды, но не принципиально. Хотя, кто его знает...Особенно, если различия имеются по не синонимическим кодонам (омонимам, они же сиомы. СМ мои темы). Там могут быть сюрпризы в коллинеарностях - триплеты-аминокислоты. Что может выйти боком для вашей работы. Идёт пересмотр кишпалочковой СТАНДАРТНОЙ таблицы ген. кода. Почему стандартной для кишпалочки, а не человека разумного? Вот такая забавная кишечная история с истериками троллей, отстаивающих канон таблицу ген. кода кишпалочки, как святыню. |
Gariaev Постоянный участник |
(Alexus @ 08.01.2018 13:47) Планирую заказать плазмиду у компании, с HIS-тэгом на конце последовательности (коллеги говорят попробовать cleavable версию - чтобы исключить влияние на конечный продукт после пурификации, не имею опыта утверждать, влияет ли этот маленький аминокислотный мотив на активность гибридного белка). Далее плазмида амплифицируется в трансформированной хемокомпетентной колонии кишечной палочки, затем липофектамином трансфецируются клетки СНО и далее синтез идет в такой транзиентной линии. По протоколу кажись были энхансеры на этом этапе, еще не пробовал ускоренный вариант. Потом очистка, гель, блот и специфические тесты на активность каждой части гибрида. Надо в основах сначала разобраться, а потом уж энхансеры, промоутеры, фолдинги и пр. бантики на коробке с сюрпризами. |
R-J-Dio Постоянный участник |
|
Alexus |
(Gariaev @ 08.01.2018 15:04) Тут большая многолетняя дискуссия идет, сильно запакощенная троллями. Фишка в том, что 31 из представителей животного мира имеют несколько различающиеся триплетные коды, но не принципиально. Хотя, кто его знает...Особенно, если различия имеются по не синонимическим кодонам (омонимам, они же сиомы. СМ мои темы). Там могут быть сюрпризы в коллинеарностях - триплеты-аминокислоты. Что может выйти боком для вашей работы. Идёт пересмотр кишпалочковой СТАНДАРТНОЙ таблицы ген. кода. Почему стандартной для кишпалочки, а не человека разумного? Вот такая забавная кишечная история с истериками троллей, отстаивающих канон таблицу ген. кода кишпалочки, как святыню. Хм, про такое не слышал, разве что термофишер проводят оптимизацию кодонов для заказанных плазмид сами. Вроде как работает, система работала до меня на отдельных негибридных протеинах. |
« Предыдущая тема · Мусорница · Следующая тема » |