Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG электрофорез белков -- comments to a permanent page of the site --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Тема связана с: SDS PAAG
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.03.2015 13:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

-- Точных формул расчета нет?
Попробуйте выведите. Что вы будете оптимизировать, выводя формулу??? smile.gif
--Как я понял, параметры подобраны эмпирически, в каких-то статьях.
lol.gif mad.gif wall.gif

Как бы это помягче то сказать..... Закон Ома знаете? Диффузию понимаете?
В чем ваш вопрос? Почему так и не иначе? Все до безобразия просто. Можно иначе. Но либо все будет долго и расплывётся, либо все будет кипеть и расплываться. Степень неприятностей зависит от уровня вашего мазохизма.

--А что по силе тока в ячейке?
Закон Ома! Ну, почитайте про носители заряда в растворах и о буферных системах в Лэмли форезе. А лучше поставьте форез и посмотрите, что происходит с током, если напряжение постоянно во время фореза или что происходит с напряжением при постоянном токе. А потом подумайте о причинах наблюдаемых вами явлений. И как это можно использовать на практике.
Ну, невозможно здесь лекции писать.

-И в некоторых приборах можно стабилизировать мощность, в ваттах, зачем это?
Это вроде АБС на машине или подушек безопасности. Мощность ограничивают сверху, что бы предотвратить перегрев системы. В Лэмли это обычно используется крайне редко. В некоторых других ЭФ приложениях может быть весьма полезным.
X
IP-штамп: fr2Aj2u1X7jjo
гость



 прочитанное сообщение 05.03.2015 18:32     Сообщение для модератора       

Ясно, спасибо =) Я понимаю, что стабилизировать ток можно только по одному параметру, как раз по закону Ома импульсник держит значение либо силы, либо величины напряжения, опираясь на сопротивление системы. Вопрос был не об этом, а как раз о зависимости скорости диффузии от параметров тока. Действительно, проще и полезней посмотреть мне в спец. литературе эту зависимость диффузии от параметров ЭТ в ячейке, чем вам лекции писать.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 05.03.2015 20:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

А диффузия мало зависит от тока(как известно это молекулярно кинетическое явление). Следовательно она зависит только от температуры, размера, частицы и вязкости среды. Вот скорость движения заряженной частицы под действием электрического поля зависит от напряженности эл поля(а также заряда, размера и вязкости среды ), которая(напряженность) есть сложная функция состава среды(от которого зависит эл сопротивление) тока и напряжения.......
Участник оффлайн! Botrytis




 прочитанное сообщение 07.04.2015 11:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите, пожалуйста, где можно приобрести джентльменский набор для электрофореза в ПААГ. У химреактивщиков что-то есть а чего-то нет.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 07.04.2015 19:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Botrytis @ 07.04.2015 12:43)
Ссылка на исходное сообщение  Подскажите, пожалуйста, где можно приобрести джентльменский набор для электрофореза в ПААГ. У химреактивщиков что-то есть а чего-то нет.

http://helicon.ru/catalog/section.php?IBLO...&SECTION_ID=902
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1344
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1287
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...&SECTION_ID=716
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1319
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1295
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1332
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1291
http://helicon.ru/catalog/new-spisok.php?I...SECTION_ID=1305
ИЛИ

http://dia-m.ru/lab/elektroforez-vertikalnye-sistemy/
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=16850
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14858
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14109
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=15872
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14289
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14489
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14913
http://dia-m.ru/reactive.php?productid=14146

http://www.dna-technology.ru/dnaproducts/e...nts/volta/elf4/
http://helicon.ru/catalog/spisok.php?IBLOC...&SECTION_ID=898
http://dia-m.ru/lab/elektroforez-istochniki-pitaniya/
Участник оффлайн! Botrytis




 прочитанное сообщение 08.04.2015 19:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Спасибо большое! В аспирантской юности работал по вот этому: https://cloud.mail.ru/public/5317c7e4e36c/%...D0%B5%D0%B7.pdf Из ошибок не 21,24 г трис, а наоборот 24,21. В целом все работало, но имеются разночтения с сегодняшними методиками. На какие стоит обратить внимание.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.04.2015 20:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

http://biomed.spbu.ru/user/methods/1d-page...trophoresis.php
Участник оффлайн! Botrytis




 прочитанное сообщение 09.04.2015 19:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Спасибо, уважаемый!
Участник оффлайн! ##Анастасия##




 прочитанное сообщение 28.05.2015 19:17     Сообщение для модератора         Личное письмо

Здравствуйте! У меня такой вопрос: какую форму будет иметь пятно глицина при электрофорезе при рН=6, если приложить сильное напряжение?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 29.05.2015 05:59     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(##Анастасия## @ 28.05.2015 20:17)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте! У меня такой вопрос: какую форму будет иметь пятно глицина при электрофорезе при рН=6, если приложить сильное напряжение?

1)Вопрос учебный?
2) Тема, в которой вы задали вопрос, посвящена Э/Ф белков в полиакриламидном геле. Глицин не белок и электрофорез его в ПААГе никто никогда не проводил.

В связи с 1) - сами то что думаете по этому поводу. В связи с 2) - надо было для вашего вопроса создать отдельную тему.
Участник оффлайн! ##Анастасия##




 прочитанное сообщение 03.06.2015 20:43     Сообщение для модератора         Личное письмо

Да, вопрос учебный. По биохимии. Я думала, что пятно глицина расползется равномерно в разные стороны и примет форму овала, т.к. при рН=6 глицин существует в форме цвиттер-иона. Но моё предположение преподаватель отверг.
Участник оффлайн! Botrytis




 прочитанное сообщение 27.07.2015 18:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Подскажите как вы гели после окраски денситометрируйте. Сама пластинка геля тонкая, ломается, при сканировании и обработке на денситометре Сорбфил надо белую бумажку подкладывать, но она намокает и искажает изображение. Поделитесь опытом.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 27.07.2015 21:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

-- Сама пластинка геля тонкая, ломается
У вас какой процентности гель. Даже с 7% гелем еще можно работать аккуратно без разрывов.

Есть три подхода первый дорогой: покупаете что вроде GELDOC ОТ Bio-Rad. И все!

Второй покупаете китайский плоский светодиодный фонарь( панель )типа:
http://l-energy.ru/offer_details_184.html
Цифровой фотик.

Кладете свой гель на прозрачный бухгалтерский файлик, файлик - на светодиодную панель и фоткаете.

Третий покупаете планшетный сканер типа Epson 700V
прозрачную пленку для лазерного принтера. кладете на пленку гель, пленку на сканер и сканируете.

Обработка обсчет и тд. производится opensoft - imageJ, Если у вас Geldoc у него фирменный софт ImageLab

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Daemonarchestratygos
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 10.04.2017 17:09     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Взял старый биорадовский ПСА , а с ним застывание происходит совершенно уроганно, минут за 10, раньше полимеризация занимала не менее получаса.
Оно конечно хорошо, что быстро, но
1. такое чувство, что гели стали получаться "немного другими", полосы быстрее убегают
2. для заливки градиентных гелей - времени не хватает.
(дегазацию не производил)
можно ли как то замедлить процесс ? конечно можно наверное охлаждать гель, но может просто возможно уменьшить кол-во ТЕМЕДа ?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 06:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Нееееет!!!!!! Уменьшать надо количество ПСА!!!! И это принципиально!!! ПСА - это инициатор цепи полимера. Чем больше ПСА, тем больше цепей. Чем больше цепей, тем они короче. Чем короче цепи, тем меньше сопротивление среды белку.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.04.2017 11:21     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

А почему старый биорадовский персульфат "столь бодр" то ?
Сколько вообще "нормально" гель должен застывать?
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.04.2017 12:00     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Сильно ли можно уменьшать концентрацию ПСА ? в 1,5, в 2 раза?
Что бы не сказывалось негативно на качестве геля.
Участник оффлайн! criplenie
Участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 12:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(metrim @ 11.04.2017 12:21)
Ссылка на исходное сообщение
Сколько вообще "нормально" гель должен застывать?

Зависит от температуры. Чем выше тем быстрее - я раствор для разгоняющего геля в холодильнике храню (Акриламид + трис + вода без SDS), поэтому застывает он у меня минут 15 на еще реахимовском ПСА (аликвоты храню в морозильнике, переношу в холодильник по мере исчерпания). Если теплый да дегазированный (чем ниже температура воды тем больше в ней кислорода), может застыть в процессе заливки.
Концентрацию ПСА и ТЕМЕДа можно смело уполовинить.
Участник оффлайн! criplenie
Участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 12:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(MMM @ 11.04.2017 07:35)
Ссылка на исходное сообщение  Нееееет!!!!!!  Уменьшать надо количество ПСА!!!! И это принципиально!!!  ПСА - это инициатор цепи полимера. Чем больше ПСА, тем больше цепей. Чем больше цепей, тем они короче. Чем короче цепи, тем меньше сопротивление среды белку.

А разве поперечные сшивки не сильнее влияют на процесс? Делал помимо традиционного 1:29 бискариламида/акриламида, 1:19 для маленьких белков. Так даже маленькие белки в нем продвигались с трудом. А вот вариация ПСА (плюс-минус два раза в обе стороны) ни на что особо не влияла - разброс других параметров поболее будет.
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 14:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(metrim @ 10.04.2017 15:09)
Ссылка на исходное сообщение конечно можно наверное охлаждать гель, но может просто возможно уменьшить кол-во ТЕМЕДа ?
можно ТЕМЕД перед самой заливкой добавлять (чтобы успеть морально приготовиться smile.gif )

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): MMM
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 14:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(metrim @ 11.04.2017 12:21)
Ссылка на исходное сообщение  А почему старый биорадовский персульфат "столь бодр" то ?
Сколько вообще "нормально" гель должен застывать?

Персульфат очень плохой по части устойчивости и качества реактив. И если по чеснаку с каждой новой партией ПСА надо подбирать его концентрацию.

Время примерно не меньше 10 минут и не больше 60. При чем чем выше концентрация тем полезнее медленее полимеризовть гель

Сообщение было отредактировано MMM - 11.04.2017 14:15
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 14:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(criplenie @ 11.04.2017 13:19)
Ссылка на исходное сообщение  А разве поперечные сшивки не сильнее влияют на процесс?

А я разве где-то утверждал обратное? Одно не противоречит другому.
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.04.2017 14:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(LMP @ 11.04.2017 15:00)
Ссылка на исходное сообщение  можно ТЕМЕД перед самой заливкой добавлять (чтобы успеть морально приготовиться smile.gif )

Чем дольше стоит смесь с ПСА без TEMED, тем короче лаг фаза процесса полимеризации

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): LMP
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 12.04.2017 10:16     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

Я мешаю все компоненты перед заливкой (АкА, бис, вода, темед), а за пол-минуты добавляю ПСА. Никогда проблем не было. Смысла в заренее приготовленных мастер-миксах не вижу. Согласен, ПСА очень зависит от партии. Хотя и на "Реаналовских" (кто помнит) реактивах работал - проблем не было. После первых ста гелей "запороть" ПААГ уже надо постараться.
Участник оффлайн! AMK




 прочитанное сообщение 19.02.2018 10:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Добрый день всем)
Я в электрофорезе полный ноль.
Вообще я списки для закупок составляю. Мне дано задание заказать все реактивы для электрофореза (определение фитогормонов и подобного) для камеры Хеликон VE-10.
Ищу уже несколько дней но все равно не понимаю что и в каких количествах надо. Помогите составить список, пожалуйста, что нужно если нет ничего). И я не поняла что такое ТРИС-буфер и как он выглядит в списке химреактивов.
Из сотрудников никто помочь не может, потому что разбирается еще меньше чем я. Но начальство сказало делать...и все, никуда не деться...
Guest
IP-штамп: frG1gE1TohpHQ
гость



 прочитанное сообщение 19.02.2018 13:07     Сообщение для модератора       

(AMK @ 19.02.2018 10:29)
Ссылка на исходное сообщение 
Из сотрудников никто помочь не может, потому что разбирается еще меньше чем я. Но начальство сказало делать...и все, никуда не деться...

это всё очень печально, надеюсь вы работаете в нии, а не на фирме

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): X34
Участник оффлайн! Blaid
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.02.2018 13:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Основное, что вам понадобится:
- акриламид
- бисакриламид
- трис (трис(гидроксиметил)аминометан)
- трис-НСl (либо соляная кислота вместо трис-гидрохлорида)
- додецилсульфат натрия (он же SDS)
- персульфат аммония
- глицерин
- бромфеноловый синий
- бета-меркаптоэтанол или дитиотрейтол
- глицин
- протеиновый маркер молекулярных масс
- TEMED (тетраметилэтилендиамин)
- н-бутанол (или 96% этанол)
- дистиллированная или бидистиллированная вода
Если будете ставить нативный форез (ну, это обычно юзают для определения активности ферментов), то ещё понадобятся компоненты для буферной системы, обеспечивающей оптимальный рН в геле.
А вот если Вы не будете ограничиваться только форезом (вероятно, так и будет, исходя из содержания вашего вопроса), то Вам понадобится довольно много чего ещё (за форезом могут последовать перенос белков на мембрану и собственно сам иммуноблоттинг).
Перечисленные реагенты относительно дёшевы и общедоступны (как правило, они есть в большинстве молекулярных и биохимических лабораторий). Вполне можно найти и выпросить (хотя бы на первое время). Если будете покупать (заказывать), то лучше брать реактивы категории for molecular biology или bioultra (но и что попроще и, соответственно, подешевле тоже сойдёт).
А тип форезной камеры имеет второстепенное значение (форез он везде одинаков и тип камеры на него не влияет).
Участник оффлайн! X34
Участник



 прочитанное сообщение 19.02.2018 16:17     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(AMK @ 19.02.2018 11:29)
Ссылка на исходное сообщение  Добрый день всем)
Я в электрофорезе полный ноль.
Вообще я списки для закупок составляю. Мне дано задание заказать все реактивы для электрофореза (определение фитогормонов и подобного) для камеры Хеликон VE-10.
Ищу уже несколько дней но все равно не понимаю что и в каких количествах надо. Помогите составить список, пожалуйста, что нужно если нет ничего). И я не поняла что такое ТРИС-буфер и как он выглядит в списке химреактивов.
Из сотрудников никто помочь не может, потому что разбирается еще меньше чем я. Но начальство сказало делать...и все, никуда не деться...

it makes me cry mad.gif
Цитата тыц раз "Из сотрудников никто помочь не может, потому что разбирается еще меньше чем я"
цитата тыц два "я не поняла что такое ТРИС-буфер"
и это люди с явно высшим образованием, это ***ец ***, можете меня баниить
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 21.02.2018 12:09     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

Как я понимаю требуются реактивы для э/ф в полиакриламидном геле? Набор реактивов зависит от задач. Например, чем будете инициировать полимеризацию - персульфатом или УФ-рибофлавином? Какой буфер - ТЭБ, трис-HCl, трис-глицин? Для чего собираются использовать камеру (для ферментов, например, нужны ещё свои реактивы, часто очень недешёвые). В общем поищите под кого Вы реактивы закупаете - и конкретно у этого человека всё выясните.
А то вообще может оказаться, что Вам не для ПААГ заказывали, а для горизонтального э/ф на агарозе или крахмале. Науке такие случае известны: "У нас есть камера!" - "Какая именно?" - "Хеликон" - "Не производитель, а тип: вертикалка, горизонталка?" - "А не всё ли равно?"
Участник оффлайн! AMK




 прочитанное сообщение 22.02.2018 09:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Спасибо) Список есть, теперь буду искать откуда заказать. Все конечно печально, и я несколько утрировала что вот уж прям никто помочь не может, скажем так, никто не хочет. У всех есть свои задачи. Я новый сотрудник в отделе и ни разу в жизни никогда не сталкивалась с такими задачами. Еще раз спасибо)
Дешевизна реагентов тут уже не моя проблема) Камера для вертикального фореза. Но наверное это все зря, потому что камеру то они притащили а источника питания к ней нет)
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.02.2018 10:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(AMK @ 22.02.2018 07:45)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо) Список есть, теперь буду искать откуда заказать. Все конечно печально, и я несколько утрировала что вот уж прям никто помочь не может, скажем так, никто не хочет. У всех есть свои задачи. Я новый сотрудник в отделе и ни разу в жизни никогда не сталкивалась с такими задачами. Еще раз спасибо)
Дешевизна реагентов тут уже не моя проблема) Камера для вертикального фореза. Но наверное это все зря, потому что камеру то они притащили а источника питания к ней нет)

Вообще довольно странный подход. Обычно первичную заявку делает тот, кто выполняет контроль, иссследование, анализ. Потому что, как выше сказали , электрофорезов разных очень много в зависимости от задач. Я вот, например, вообще нё в курсе, что фитогормоны электрофорезом анализируют. Думал типа вэжх. Ну и менеджер по закупкам или там лабменеджер не в состоянии знать все нюансы методов.
да, возвращаясь, и именно непосредственный потребитель реактивов должен быть больше всех заинтересован в том, что придет именно то, что нужно и тогда, когда нужно.
но, если их не интересует результат, то... либо они ничего не делают и всем реально похрену, что вы закупите, либо ситуация заранее провальная, а неумеху-закупщика хотят выставить виновником провала.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 22.02.2018 11:05     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Перечитал еще раз ваше сообщение. То есть вы типа лабменеджер со специальным образоварием? Я бы сделал так:
1. Потребовал СОП/инструкцию по выполнению метода. В нем обязательно должен быть раздел "материалы/реактивы" с описанием количества, квалификации и даже иногда каталожными номерами конкретных производителей. Согласно этому документу сделал бы заказ.
2. Если инструкции нет или в ней недостаточно описаны реактивы, то доложил бы руководству о несоответствии внутренних документов требованиям ИСО и здравому смыслу и продолжил работу после оформления такого документа. Если ваше положениё не позволяет встать в позу, то можно составить заявку с примечаниями везде, где можно "ориентировочно, так как недостаточно информации".
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 22.02.2018 23:03     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

Вообще девушку-закупщицу жалко. Мы вот сами и реактивы ищем, и где подешевле, и для госзакупок документы. А тут - есть манагер а ей приносят камеру - типа "вот такой, только с перламутровыми пуговицами". Охренеть.
Уважаемая АМК, похоже Ваш заказчик или идиот (это не лечится), или хочет Вас подставить (т.к. работать не хотят и ищут причину "почему не сделано").
Иначе это совсем уж вариант Алисы и Чеширского Кота: " — А куда ты хочешь попасть? — А мне все равно, только бы попасть куда-нибудь. — Тогда все равно куда идти. Куда-нибудь ты обязательно попадешь. "
Прислушайтесь к совету уважаемого vb и при закупке "того, не знаю чего" максимально себя обезопасьте.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 03.03.2018 13:58     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

Вопрос по выставлению тока в камерах
Есть блок питания (фармациевский еще) с выходами для двух камер.
Когда я использовал одну камеру, ставил ток 200В 60мА для двух гелей.
Правильно ли я понимаю, что при постановке двух камер с 4 такими же гелями нужно будет оставить вольтаж тот же , а предел по амперам удвоить?
Я так понимаю, что блок врят ли по каждому отдельному каналу регулируется, вероятно то что выдается и отражается на табло это сумарный ток системы?
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 03.03.2018 15:21     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

Если это что-то отечественное (вроде Б-5-50) то там идёт стабилизация или по току, или по напряжению. Что вполне понятно, т.к. ток в начале и в конце фореза сильно разный в связи с истощением буфера. Там ещё был индикатор, показывающий по какому параметру идёт стабилизация. На выходы подавалось всё одинаково, просто прибор делался с 2-м запасом по мощности. Как у Вас - не знаю, но можно померять с нагрузкой обычным тестером.
Участник оффлайн! rafaomx

Москва



 прочитанное сообщение 09.03.2018 04:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

--Меркаптоэтанол можно заменить Dithiothreitol?
МОНА!!!
---Какая здесь разница?
а) ДТТ можно класть в два раза меньше чем МЭ по молям.
б) ДТТ раз в 10 или больше дороже чем МЭ
в) ДТТ менее летучь, менее вонючь, менее токсичен, не требует вытяжки.
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.01.2019 14:27     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

А такой вот вопрос: можно ли гели "заправленные" с SDS под Лэмли использовать для BN ? Вроде как SDS доволжен довольно быстро "вымываться" из геля током?
Суть в том, что у меня камера для заливки градиентных гелей под 10 сэндвичей. Мне весьма геморно делать десяток под Лэмли, десяток - под нативный и хранить их. Вот если бы можно было сделать одинаковый (с SDS) градиентный разделяющий, запечатать и хранить, а потом просто разный концентрирующий заливать и юзать в соответствии с потребностями - вот это было бы сподручней.
Участник оффлайн! Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 08.01.2019 13:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

(metrim @ 02.01.2019 12:27)
Ссылка на исходное сообщение  А такой вот вопрос: можно ли гели "заправленные" с SDS под Лэмли использовать для BN ?

Проще использовать гели без SDS для денатурирующего фореза. SDS в буфере и образце достаточно, чтобы форез был денатурирующем.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): metrim
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.01.2019 00:41     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

(Vadim Sharov @ 08.01.2019 14:48)
Ссылка на исходное сообщение  Проще использовать гели без SDS для денатурирующего фореза. SDS в буфере и образце достаточно, чтобы форез был денатурирующем.

Есть ли уверенность, что SDS из концентрирующего геля будет достаточно, что бы уравновесить разделяющий гель перед фронтом образца?
Если по идее "можно не добавлять", почему во всех рецептурах SDS в разделяющий гель прописан и не встречается примечаний "в приципе можно и не добавлять".
Разумеется универсальный ответ: "попробуй сам , посмотри на результат", но у меня недостаточно квалификации, что бы предусмотреть различные варианты и вовремя заприметить , что "что то идет не так". Маркеры разумеется я прогоню, цитохром.

Еще вопрос возник: иногда в рецептурах в низкопроцентные гели встречается добавление глицерина. Я попробовал добавить 5 и 10%, результат мне понравился, гели стали более эластичными, прочыми. Вопрос: есть ли ограничения в этой добавки, в каких масштабах стоит использовать глицерин, почему он если так хорош - не является стандартным компонентом рецептур?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.01.2019 07:46     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(metrim @ 11.01.2019 01:41)
Ссылка на исходное сообщение  Есть ли уверенность, что SDS из концентрирующего геля будет достаточно, что бы уравновесить разделяющий гель перед фронтом образца?
Если по идее "можно не добавлять", почему во всех рецептурах SDS в разделяющий гель прописан и не встречается примечаний "в приципе можно и не добавлять".

Есть! Проверено экспериментально. Ведь SDS прет в гель из электродного буфера, а там его до попы.

(metrim @ 11.01.2019 01:41)
Еще вопрос возник: иногда в рецептурах в низкопроцентные гели встречается добавление глицерина. Я попробовал добавить 5 и 10%, результат мне понравился, гели стали более эластичными, прочыми. Вопрос: есть ли ограничения в этой добавки, в каких масштабах стоит использовать глицерин, почему он если так хорош - не является стандартным компонентом рецептур?

Ограничения есть! Начиная с 25-30% начинают ползти рН в гелях и резко возрастают
электро сопротивления в гелях что влияет на концентрирование в зонах, иногда появляются шлейфы из-за худшей растворимости белка в зонах концентрирования.

Что касается стандартного улучшайзинга. То прошли те времена 50х-70х годов, когда улучшайзинг становился предметом научных исследований и достоянием общественности ботанов-научников. Теперь этим занимаются технические "Маши с трудоднями" на R&D компаний, а улучшайзиг превращается в знаюкаки компаний.

Сообщение было отредактировано MMM - 11.01.2019 08:17

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): metrim
Участник оффлайн! metrim
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 11.01.2019 11:18     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail

(MMM @ 11.01.2019 08:46)
Ссылка на исходное сообщение 
Ограничения есть! Начиная с 25-30% начинают ползти рН в гелях и резко возрастают
Ну т.е. процентов до 10 глицерина в 6-10-15% гелях проблем быть не должно?

Что касается стандартного улучшайзинга. То прошли те времена 50х-70х годов, когда улучшайзинг становился предметом научных исследований и достоянием общественности ботанов-научников. Теперь этим занимаются технические "Маши с трудоднями" на R&D компаний, а улучшайзиг превращается в знаюкаки компаний.
Ну это то да, но продолжают же издаваться учебные пособия и там все без изменений с 70-х годов или там "афффтары" тупо бездумно перепечатывают чужое?
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.01.2019 12:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(metrim @ 11.01.2019 12:18)
Ну это то да, но продолжают же издаваться учебные пособия и там все без изменений с 70-х годов или там "афффтары" тупо бездумно перепечатывают чужое?

А почему бы и нет. Требований новизны к учебным пособиям не предъявляются
Участник оффлайн! Vadim Sharov
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 12.01.2019 16:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

В биохимии принято, что буфер в геле должен совпадать с форезным буфером.
Нормальный автор пособия никогда не напишет "можно не добавлять", потому что опыт обязан быть единообразным, а значит повторяемым. Каждое " можно не" снижает методическую однообразность эксперимента. То, что эксперименты 70х прошлого века методически сходны с современными позволяет их достоверно сравнивать, а значит не переповторять.

Все остальные "можно не" из области "примочек" "tips". Объект обмена опытом на профессиональных форумах. Более того, стандартность позволяет работать с электрофорезом исследователям, не получавшим химического или биохимического образования, не заморачиваясь скоростью и направлением диффузии заряженных молекул под воздействием электрического поля.

Как верно написал МММ, то что гель без SDS берет SDS из буфера многими (включая меня) проверено на собственной практике. Но пользоваться этим знанием нет смысла, на SDS нелепо экономить.
Ставит производство одинаковых гелей для разных методик на поток я считаю нецелесообразным. Проще в заливочную камеру на 10 гелей вставить стандартную вкладку (они поставляются с большинством стандартных наборов для заливки). Если у вас заказная самоделка, то целесообразней заказать пластиковый параллелепипед - вставку, а не заливать все 10 гелей.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): dk
Участник оффлайн! hopfen
Участник



 прочитанное сообщение 08.06.2019 18:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Vadim Sharov @ 12.01.2019 17:19)
Ссылка на исходное сообщение  В биохимии принято, что буфер в геле должен совпадать с форезным буфером.
Нормальный автор пособия никогда не напишет "можно не добавлять", потому что опыт обязан быть единообразным, а значит повторяемым. Каждое " можно не" снижает методическую однообразность эксперимента. То, что эксперименты 70х прошлого века методически  сходны с современными позволяет их достоверно сравнивать, а значит не переповторять.

Все остальные "можно не" из области "примочек" "tips". Объект обмена опытом на профессиональных форумах. Более того, стандартность позволяет работать с электрофорезом исследователям, не получавшим химического или биохимического образования, не заморачиваясь скоростью и направлением диффузии заряженных молекул под воздействием электрического поля.

Как верно написал МММ, то что гель без SDS берет SDS из буфера многими (вклячая меня) проверено на собственной практике. Но пользоваться  этим знанием нет смысла, на SDS нелепо экономить.
Ставит производство одинаковых гелей для разных методик на поток я считаю нецелесообразным. Проще в заливочную камеру на 10 гелей вставить стандартную вкладку (они поставляются с большинством стандартных наборов для заливки). Если у вас заказная самоделка, то целесообразней заказать пластиковый параллелепипед - вставку, а не заливать все 10 гелей.

https://www.youtube.com/watch?v=1Zf0zyZPK8c
Участник оффлайн! hopfen
Участник



 прочитанное сообщение 08.06.2019 18:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Текст сообщения закрыт на самомодерацию
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  11.11.2021 10:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

https://archives.profsurv.com/forum/Profess...ert/-67881.aspx
https://atlanta.bubblelife.com/community/an...ex_Watch_Online
https://gumroad.com/rolexrelicawatches/p/di...replica-watches
https://onmogul.com/stories/guide-on-how-to...ex-watch-online
https://list.ly/i/5704105
https://www.behance.net/gallery/114237003/Replica-Rolex
https://www.mlbdailydish.com/users/Replicarolexwatches
http://replicawatches24.simplesite.com/
https://watcheshutuk.cabanova.com/
https://www.pinterest.com/watcheshutuk/_saved/
https://www.linkedin.com/pulse/guide-how-pu...online-hei-bai/
https://justpaste.it/8t11q
https://padlet.com/watcheshutuk/in2opwnfmnmclce8
https://www.allforxi.com/users/Replicarolexwatches
https://profile.hatena.ne.jp/Rolexrelicawatches/profile
Участник оффлайн! Shikooo
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  23.08.2022 23:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес

منصة انصاف
منصة انصاف
https://insaf.com.sa https://insaf.com.sa
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  15.09.2022 11:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Amid a Western 1688.com diplomatic boycott ดรีมเกมส์ of the Beijing Winter Olympics D88 Green Dragon and a looming crisis in Ukraine Big gaming the world’s two most powerful ufa1688 autocrats shared their vision AMEBA for a new world order: it Gamatron would better accommodate aff 1688 their nations’ interests FC Slot and no longer be dominated บาคาร่า by the Wes
Участник оффлайн! Ufa1688
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.03.2023 05:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Credit Suisse accepted เกมสล็อต borrowing up to $54 ทาง เข้า ufabet billion from the Swiss ufabet vip National Bank. Although ทาง เข้า ufabet มือ ถือ that calmed some nerves สูตรสล็อต markets remain extraordinarily คีย์เวิร์ด volatile. US markets 123goal were set to open lower. app aff1688 Asian markets tumbled. Europe's markets nigoal123 were only tepidly higher after แฮนดิแคป คือ Wednesday's rout.
Macanbola
IP-штамп: frxwqRM9LKN8w
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  25.09.2023 07:17     Сообщение для модератора       

https://macanbola78.blogspot.com
https://macanbola.asia
https://sites.google.com/view/slotmacanbola
https://sites.google.com/view/macanbola-site
https://647adf904b059.site123.me
https://macanbola78.wixsite.com/macanbola
https://macanbola-104156.weebly.com
https://linkmacanbola.carrd.co
https://about.me/macanbola
https://bit.ly/m/slot-macanbola
https://s.id/macanbola
https://linkr.bio/macanbolaidn
https://heylink.me/macanbola.asia
https://taplink.cc/macanbola
https://linkpop.com/macanbolaslot

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 16:42
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft