Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
watchesonline89 | Отправлен 24.12.2022 12:18 |
watchesbiz | Отправлен 28.09.2021 05:49 |
genseq | Отправлен 26.01.2021 19:23 |
DimVik | Отправлен 25.01.2021 04:26 |
(semi @ 24.01.2021 20:02) Если гонять на форезе выделенную геномную ДНК КРС, то риски минимальные. Это же не ампликоны или плазмиды. Да форез выход конечно. И мы его запустим все равно. Но позже. Тем более, в помещении где его планируем сейчас крутим кровь для иммуногенетики. |
|
DimVik | Отправлен 25.01.2021 04:19 |
(genseq @ 23.01.2021 14:06) Очень круто! Спасибо! Но это больше на перспективу. Сейчас достоверность происхождения и генетические заболевания. |
|
semi | Отправлен 24.01.2021 15:02 |
(DimVik @ 19.01.2021 13:27) Идея хорошая и напрашивается сама собой. Но к сожалению под электрофорез нужна отдельная комната. Ее пока нет. Грязноватый процесс. Если гонять на форезе выделенную геномную ДНК КРС, то риски минимальные. Это же не ампликоны или плазмиды. |
|
semi | Отправлен 24.01.2021 14:55 |
(Ash @ 18.01.2021 14:45) Точно. Если консервативные последовательности, то лучше все-таки митохондриальные, IMHO. Есть небольшой опыт с праймерами на хромосомные консервативные рибосомные повторы, которые тянут всё - от птицы до человека. С ними всё время лезет сигнал в контроле выделения. Видимо, контаминированы наборы для выделения ДНК. С митохондриальными такого нет. |
|
DimVik | Отправлен 20.01.2021 05:09 |
(genseq @ 20.01.2021 01:08) Лично я в вопросах Real-Time PCR теоретик. А мой друг Ъ - практик. Так что лучше верить ему. Несмотря на то, что теоретически я "правее". С красителями (при равных количествах праймеров) длинные ампликоны (250N) должны светить примерно в два раза сильнее коротких (118N). Но это только теоретически. Практически - нужно проверять. Проверить постараюсь в феврале. Тем более, что мне тоже пора осваивать контроль качества выделения ДНК. Пытался задействовать для этого доктора наук, "съевшего собаку" на флуоресценции ДНК, но он недавно неожиданно умер. Жаль конечно, только всему научишься и помирать приходится. Совсем недавно начал заниматься этим направлением. Безумно увлекательно! Тут встал вопрос где заказывать синтез праймеров? Давали адрес в Новосибирске, но отзывы разные по ним. В Москве наверное постабильнее? |
|
genseq | Отправлен 19.01.2021 20:08 |
(-Ъ- @ 18.01.2021 12:52) Чем длиннее, тем интенсивнее светятся? Глубоко ошибаешься, маэстро! Чем короче ампликон, тем эффективнее реакция, и даже на вдрыск порванной ДНК (РНК), так что не надо ля-ля. Иногда на порядки чувствительность выше! Лично я в вопросах Real-Time PCR теоретик. А мой друг Ъ - практик. Так что лучше верить ему. Несмотря на то, что теоретически я "правее". С красителями (при равных количествах праймеров) длинные ампликоны (250N) должны светить примерно в два раза сильнее коротких (118N). Но это только теоретически. Практически - нужно проверять. Проверить постараюсь в феврале. Тем более, что мне тоже пора осваивать контроль качества выделения ДНК. Пытался задействовать для этого доктора наук, "съевшего собаку" на флуоресценции ДНК, но он недавно неожиданно умер. |
|
DimVik | Отправлен 19.01.2021 12:30 |
(-Ъ- @ 19.01.2021 16:55) Да ради бога, не жалко, пользуйтесь, сейчас все доступно! Это правда, что некоторые праймеры нужно корректировать - у каждого своя кухня. И все краски к ним могем сделать, также как и сайз стандарты и все прочее... Аллельный ладдер для крс, свиней, кошек, собак и крокодилов это слишком жирно. Хоть 25 пар праймеров в одной пробирке! Но никакого желания, так как все перепробовал, удовлетворился...вообщем не боги горшки обжигают. А советы - пожалуйста. Понятно! ОГРОМНОЕ спасибо за помощь и совет! |
|
Посмотреть тему (откроется в новом окне) | |