Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Natali217 |
Возможно, эта тема уже обсуждалась и не раз, но нет времени физически все просматривать. Прошу помочь разработать реал-тайм ПЦР для исследования полиморфизма rs4988235. Я не новичок в молекулярной генетике, но с реал-тайм у меня опыта очень мало. Прибор 7300 Applied Bisystems. Буду очень признательна за помощь! |
Natali217 |
Мне один раз понять, как это делать, и я уже дальше сама смогу разобраться. |
dk Постоянный участник Россия |
В простейшем случае если вам надо SNP, то делаете небольшой компл. праймер, ваш нуклеотид на 3' конце последний, перед ним - однозначно некомпл. Подбираете темп.гибр. чтобы ПЦР шла только при специф. отжиге. Всё проверяется на геле, а потом, если если всё удалось - ставьте с интеркал. красителем. Если такманы - то проще отдать разработку на аутсорсинг, пусть там голова болит. |
banned sceptique-NMRguy Постоянный участник временной жизни |
|
Гест Гестович Постоянный участник Россия |
(banned sceptique-NMRguy @ 15.03.2021 09:05) А мат-методы тоже фсё? А то у меня там вопросец... |
NMR-guy Постоянный участник временной жизни |
|
бутанол Постоянный участник Новосибирск |
если аллельспецифичные праймеры то можно иногда вторую или третью букву от 3 конца поменять.. и замены пуринов на пиримидины могут быть проблемой, важно и с 3` концом разбираться и с температурой отжига праймеров, чтоб она не отличалась на комплементарных вариантах. Я еще иногда делал хвосты на 3 конце (разные) чтобы повысить селективность без существенного снижения эффективности реакции. если аллельспецифичный зонд.. как повезет важно и чтобы вторичные структуры не мешали и обычно зонд ложится на снип почти серединкой, с некоторым смещением на 5 конец. но были успешные зонды у которых 5`конец ложился точно на SNP |
« Предыдущая тема · Беседа · Следующая тема » |