Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Получение бактериальных лизатов
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! kusja14

Волгоград



 прочитанное сообщение 29.09.2019 13:46     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте.
На данный момент пишу диплом. Научрук предложил проверить применимость методики осаждения белка пирогалловым красным на бактериальных лизатах.
Довольно слабо понимаю как выделить белок из бактерий.

Сколько нужно культуры зацепить с агара, какую лучше культуру взять? Есть ли разница грам + или грам - брать.
В каком количестве растворителя развести собранную культуру?
Чем разрушить клетки?
Как потом центрифугировать, чтобы получить белки с минимальным содержанием иных компонентов (липополисахаридов и ДНК, например)?

Эффективность методики осаждения буду проверять электрофорезом в полиакриламидном геле по Лэммли.

Прошу помочь советом. Чувствую острую нехватку знаний wall.gif , чтобы толково работать над темой диплома. Быть может есть какие-то практические руководства или протоколы по выделению белков клеточных культур.
Guest
IP-штамп: frLlk1iUohrRs
гость



 прочитанное сообщение 01.10.2019 12:00     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Здравствуйте, может это поможет Вам, но для деструкции клеток можно использовать низкие температуры, "циклить" - морозить в лед - греть, по нескольку раз.

Контролировать выход белков, чтобы подогнать методику под конкретный МО можно попробовать фотометрически с цветными реакциями (хорошо если бактерии в густой суспензии).

Как фракционировать конкретно белки - уже другая история, тут советовать не возьмусь, но можно посмотреть в сторону разных методов седиментации.
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 15:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Довольно слабо понимаю как выделить белок из бактерий.


Слава Богу что не из спор бактерий

у нас по бактериям Костик Северинов shuffle.gif

https://yandex.ru/search/?text=%D0%BA%D0%BE...&clid=1961774-1


https://vk.com/konstantinseverinov
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.10.2019 15:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до 1% можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(MMM @ 01.10.2019 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до  1%  можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.


Культуру надо брать не с агара, а с бульону.

beer.gif beer.gif beer.gif jump.gif jump.gif jump.gif
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(MMM @ 01.10.2019 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до  1%  можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.

ммм задвинул ричугу
ты есче расскажи что споры бактерий нуно ультразвучить beer.gif jump.gif
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(MMM @ 01.10.2019 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до  1%  можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.


Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

ммм не развращай девочек мона и под суд папасть за совращение не совершенолетних wink.gif
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(Schuler @ 01.10.2019 17:37)
Ссылка на исходное сообщение  Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

ммм не развращай девочек мона и под суд папасть за совращение не совершенолетних  wink.gif

Просто доступна она eek.gif confused.gif
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

(MMM @ 01.10.2019 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до  1%  можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.

Просто доступна она.

ммм следи за языком smile.gif
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 16:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(MMM @ 01.10.2019 16:37)
Ссылка на исходное сообщение  Культуру надо брать не с агара, а с бульону.
Бактерюгу конечно лучше брать колю. Просто доступна она.

Лизат делайте в объеме раствора к объему/весу осадка 1:30-1:50

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до  1%  можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.

Раствор гипотонический буфер например трис до 50мМ с рН 7-8 и например тритон Х100 0т 0,1 до 1% можно перед обработкой осадок бактерий морозить. Не забыть в буфер добавить ингибиторов протеаз, хотя бы ЭДТА, PMSF и что найдете. После лизиса открутить в центрифуге можно от 3-4000 до 15000g отобрать светлый надосадок. С ним работать над осаждением.

ммм такая куня на спорах бактерий не потянет пробовал
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 17:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

(kusja14 @ 29.09.2019 14:46)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте.
На данный момент пишу диплом. Научрук предложил проверить применимость методики осаждения белка пирогалловым красным на бактериальных лизатах.
Довольно слабо понимаю как выделить белок из бактерий.

Сколько нужно культуры зацепить с агара, какую лучше культуру взять? Есть ли разница грам + или грам - брать.
В каком количестве растворителя развести собранную культуру?
Чем разрушить клетки?
Как потом центрифугировать, чтобы получить белки с минимальным содержанием иных компонентов (липополисахаридов и ДНК, например)?

Эффективность методики осаждения буду проверять электрофорезом в полиакриламидном геле по Лэммли.

Прошу помочь советом. Чувствую острую нехватку знаний wall.gif , чтобы толково работать над темой диплома. Быть может есть какие-то практические руководства или протоколы по выделению белков клеточных культур.

позвоните Костику Северинову он у нас главный по бактериям
https://vk.com/konstantinseverinov
Участник оффлайн! Schuler




 прочитанное сообщение 01.10.2019 17:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

(kusja14 @ 29.09.2019 14:46)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте.
На данный момент пишу диплом. Научрук предложил проверить применимость методики осаждения белка пирогалловым красным на бактериальных лизатах.
Довольно слабо понимаю как выделить белок из бактерий.

Сколько нужно культуры зацепить с агара, какую лучше культуру взять? Есть ли разница грам + или грам - брать.
В каком количестве растворителя развести собранную культуру?
Чем разрушить клетки?
Как потом центрифугировать, чтобы получить белки с минимальным содержанием иных компонентов (липополисахаридов и ДНК, например)?

Эффективность методики осаждения буду проверять электрофорезом в полиакриламидном геле по Лэммли.

Прошу помочь советом. Чувствую острую нехватку знаний wall.gif , чтобы толково работать над темой диплома. Быть может есть какие-то практические руководства или протоколы по выделению белков клеточных культур.

Константи́н Ви́кторович Севери́нов (род. 11 апреля 1967 года, Ленинград) — специалист в области молекулярной биологии (регуляция транскрипции генов бактерий), профессор Ратгерского университета (Нью-Джерси, США), заведующий лабораториями в Институте молекулярной генетики РАН и Институте биологии гена РАН.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 13.12.19 13:49
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft