Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
1ooo1o |
Есть такая проблема: вдруг начались проблемы с СДСным гелем - в разделяющем геле (15%) белковые треки (образцы-тотальный белок из семян злаковых) от начала геля начали сильно убегать вниз, оставляя по 1,5-2 см чистого пространства от верхнего края геля. С другой же стороны, белковый фронт сильно отстает от бромфенолового синего, т.е. когда при форезе полоса свидетеля доходит почти до нижнего края геля (остается 2-3 мм), по итогу после окраски оказывается, что все белки отстают от нее выше на 1 см. То же с маркерами (200-6,5 кДа). Ну и как вишенка на торте - четкость бэндов заметно упала. Форез вертикальный, минигели. Режим в разделяющем геле 25 мА, 145 В. Думаю переделывать стоковые растворы для разделяющего геля, но все же не ясно в чем проблема. |
G IP-штамп: fr0XnFBxgmih2 гость |
|
1ooo1o |
|
G IP-штамп: fr0XnFBxgmih2 гость |
|
Tom1 Постоянный участник |
|
MMM Постоянный участник |
Отставание фронта белков от фронта красителя может происходить из-за очень большой концентрации SDS например в 5-10 больше обычной или из-за высокой концентрации трис-HCl (8,8) в геле или низкой концентрации глицина в электродном буфере а так же если в электродный буфер каким-то образом попала какая-нибудь соль. |
Tom1 Постоянный участник |
(MMM @ 26.02.2018 08:56) 200кДа никак не могут у бежать в 15% ПААГ на треть геля вниз. Если это происходит что-то не так с гелем. Либо он не полимеризуется сверху, либо вы врете с его концентрацией: либо в стоке, либо при составлении смеси для полимеризации. Электродный буфер из трис/глицина не надо подводить рН. Там рН может кол***ся от 8,3 до 8,5 и ничего в этом страшного нет, главное соблюсти концентрации триса и глицина. Отставание фронта белков от фронта красителя может происходить из-за очень большой концентрации SDS например в 5-10 больше обычной или из-за высокой концентрации трис-HCl (8,8) в геле или низкой концентрации глицина в электродном буфере а так же если в электродный буфер каким-то образом попала какая-нибудь соль. Ну вот пришол лесник тьфу " петрович" и все испортил..... ))))) |
1ooo1o |
Сообщение было отредактировано 1ooo1o - 01.03.2018 09:53 |
ksm Постоянный участник |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |