Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* PAAG-траблы
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! 1ooo1o




 прочитанное сообщение 26.02.2018 10:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Все здравствуйте!
Есть такая проблема: вдруг начались проблемы с СДСным гелем - в разделяющем геле (15%) белковые треки (образцы-тотальный белок из семян злаковых) от начала геля начали сильно убегать вниз, оставляя по 1,5-2 см чистого пространства от верхнего края геля. С другой же стороны, белковый фронт сильно отстает от бромфенолового синего, т.е. когда при форезе полоса свидетеля доходит почти до нижнего края геля (остается 2-3 мм), по итогу после окраски оказывается, что все белки отстают от нее выше на 1 см. То же с маркерами (200-6,5 кДа). Ну и как вишенка на торте - четкость бэндов заметно упала. Форез вертикальный, минигели. Режим в разделяющем геле 25 мА, 145 В. Думаю переделывать стоковые растворы для разделяющего геля, но все же не ясно в чем проблема.
G
IP-штамп: fr0XnFBxgmih2
гость



 прочитанное сообщение 26.02.2018 11:19     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

может электродный буфер? (running buffer). какой используете? какая свежесть?
Участник оффлайн! 1ooo1o




 прочитанное сообщение 26.02.2018 12:18     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

если про running bufer - то рН 8,8. 4Х сток, 1,5 М. Не сказать, чтобы свеж - полгода ему. Но до позапрошлой недели не жаловался. А если вы имели ввиду tank bufer - то здесь тоже по прописи и с рН 8.3. Этому 3-я неделя пошла. Делал одновременно со стоком акриламида, рН доводил, правда, долго - на следующий день после приготовления упал с 8,3 до 8,18
G
IP-штамп: fr0XnFBxgmih2
гость



 прочитанное сообщение 26.02.2018 12:55     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

видимо вы используете глициновый буфер. Его не надо доводить, он должен быть приблизительно 8,3 и проверьте молярность 1X буфера он 192 мМ глицина и 25 мМ триса, не меньше должен быть. Такое как у вас могло случится из-за того, неожиданно не хватило запаса глицина в буфере. Вы его случайно не по несколько раз используете его?
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.02.2018 16:26     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Гели самодельные или комерческие????
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.02.2018 18:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

200кДа никак не могут у бежать в 15% ПААГ на треть геля вниз. Если это происходит что-то не так с гелем. Либо он не полимеризуется сверху, либо вы врете с его концентрацией: либо в стоке, либо при составлении смеси для полимеризации. Электродный буфер из трис/глицина не надо подводить рН. Там рН может кол***ся от 8,3 до 8,5 и ничего в этом страшного нет, главное соблюсти концентрации триса и глицина.

Отставание фронта белков от фронта красителя может происходить из-за очень большой концентрации SDS например в 5-10 больше обычной или из-за высокой концентрации трис-HCl (8,8) в геле или низкой концентрации глицина в электродном буфере а так же если в электродный буфер каким-то образом попала какая-нибудь соль.
Участник оффлайн! Tom1
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.02.2018 22:43     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(MMM @ 26.02.2018 08:56)
Ссылка на исходное сообщение  200кДа никак не могут у бежать в 15% ПААГ на треть геля вниз. Если это происходит что-то не так с гелем. Либо он не полимеризуется сверху, либо вы врете с его концентрацией: либо в стоке, либо при составлении смеси для полимеризации. Электродный буфер из трис/глицина не надо подводить рН. Там рН может кол***ся от 8,3 до 8,5 и ничего в этом страшного нет, главное соблюсти концентрации триса и глицина.

Отставание фронта белков от фронта красителя может происходить из-за очень большой концентрации SDS например в 5-10 больше обычной или  из-за высокой концентрации трис-HCl (8,8) в геле или низкой концентрации глицина в электродном буфере а так же если в электродный буфер каким-то образом попала какая-нибудь соль.

Ну вот пришол лесник тьфу " петрович" и все испортил.....
)))))
Участник оффлайн! 1ooo1o




 прочитанное сообщение 01.03.2018 09:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Всем спасибо за ответы! Разобрались, значит! Получились красивые форезы, как и должно быть. Проблемы были с буфером 8,3. По ошибке приготовили его литр из расчета компонентов на 0,5 л. И да, отвечая на вопрос G, использовали пару раз. В общем, на новом правильном буфере - новые правильные форезы. Кстати, кто знает - что за ватообразная масса начинает плавать в стареющем трис-глиционовм буфере?

Сообщение было отредактировано 1ooo1o - 01.03.2018 09:53
Участник оффлайн! ksm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 01.03.2018 10:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Грибосы?))
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ
Участник оффлайн! watchesonline89
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  26.12.2022 11:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

https://telegra.ph/Advantages-Of-Replica-Watches-08-03
https://issuu.com/home/published/_6_.docx
https://www.gta5-mods.com/paintjobs/watchesswiss
https://omegawatches89.onweb.it/
https://padlet.com/omegawatches89/je3eq9ol3xzmb9bp
https://www.pinterest.com/omegawatches89/
https://knowyourmeme.com/users/omegawatches89
https://bitcointalk.org/index.php?topic=76487.new#new
https://omegawatches89.blog.hu/
https://knowyourmeme.com/forums/general/top...f-so-why?page=1
https://penzu.com/p/c6f21f5d
https://www.reddit.com/user/omegawatches89/...are_so_popular/
https://www.vingle.net/posts/4647076
https://penzu.com/p/c68b65cc
https://diigo.com/0pige9

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 00:48
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft