Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* асимметричная ПЦР? 2
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! poanik

Подольск



 прочитанное сообщение 14.08.2002 16:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Давайте определимся:
Симметричная (линейная) ПЦР - один праймер отжигается на обеих нитях ДНК.
Асимметричная ПЦР - одного праймера раз в 5-10 меньше, и большая часть продукта получается одноцепочечной.
Выходит в последнем случае на форезе мы получим две полоски: тонкую, скажем, 300 п.н. и толстую 150 п.н.? Или иначе? И зачем это нужно?
И потом: Будет ли в толстой полоске 150 п.н.? Ведь её размер будет ограничивать только сила полимеразы и заданное время при 72 гр.?
Участник оффлайн! K-2
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.08.2002 18:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

По-моему, если один праймер отжигается на обеих цепях ДНК, то это уже не ПЦР, а random priming.
[ 14-08-2002: Сообщение отредактировано: K^2 ]
Участник оффлайн! poanik

Подольск



 прочитанное сообщение 14.08.2002 19:01     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Если это random priming, то что тогда называть симметричной (линейной) ПЦР ?
Участник оффлайн! tima




 прочитанное сообщение 14.08.2002 19:20     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Не знаю, что такое ассимметричная ПЦР, но при обычном ПЦР, разумеется, один праймер отжигается на одной цепи, а другой - на второй. Количество двухцепочечного продукта будет определяться молярным кол-вом того праймера, которого меньше. А одноцепочечных продуктов, скорее всего, и не видно будет, в лучшем случае - слабые шмеры, ведь длины фрагментов будут разные (скорость работы полимеразы - по крайней мере, десятки нуклеотидов в секунду) да и красится одноцепочечная ДНК этидием хуже, чем двухцепочечная.
[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! K-2
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.08.2002 20:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Читайте основы, please. Например, на этом сайте, или
http://www.uct.ac.za/microbiology/manualin.htm
Они вообще рекомендуют соотношение праймеров 1:100, но реально это редко получается.
Асимм. ПЦР - один из стандартных способов получения ssDNA. После истощения одного из праймеров в каждом цикле синтезируется одна нить, причем матрицей для нее в основном служит уже наработанный двуцепочечный фрагмент. В результате получается ss фрагмент фиксированного размера. Симм. ПЦР, в противоположность, вероятно, обычная. Кстати, интересно, сколько праймеров в ПЦР использует уважаемая(ый) poanik и что при этом получается? А что Вы имели в виду под толстой/тонкой полосками разного размера, я, к сожалению, вообще не понимаю. Объясните, пожалуйста...
[ 14-08-2002: Сообщение отредактировано: K^2 ]
Участник оффлайн! poanik

Подольск



 прочитанное сообщение 15.08.2002 10:06     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Всё просто, господа... Я делаю обычный ПЦР с двумя праймерами, а здесь надеюсь набраться новых знаний и умений на поприще ПЦР-анализа. Вроде получается.
P.S. Под толстой/тонкой полосками я подразумеваю обычные полоски ПЦР-продукта на эл/форезе, англосаксы их называют бэнды. Их толщина говорит мне об их примерной концентрации.
Участник оффлайн! petr
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.08.2002 13:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

то poanik: Две полосы вы сможете увидеть в геле (но тонкой может и не быть - это зависит от кол-ва второго праймера). Но они НИКАК не будут длины одна в 2 раза больше другой, т.к. их длина будет одинакова, подвижность разная, поэтому и 2 полосы будет.
ОТ дальнобойности полимеразы тоже зависит, но это начинается с длины амплифицируемого продукта от 3000bp и выше.
Участник оффлайн! f1dark
Постоянный участник
Lahore, Punjab, Pakistan



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  01.10.2022 14:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

F1 Removal is a well known movers and packers company all over the UK. We have been working since 1980 providing professional moving services according to the need of the customers. We have highly trained staff for all sort of moving services during relocation.

Removals Company | Removals Company in London | Office Removal in London | Office Removals London | Relocation Companies London | Removals Company in London | Moving Company in London | Moving Company | Movers in London | Man and Van in London | House Removals in London | House Removals | Packers and movers in London | Packers and movers London | Movers and Packers in London | Relocation Company in London | Commercial Removals | Local Movers | Long Distance Mover | Long Distance Movers | Long Distance Moving Company | renovations | london renovations | renovation companies in london | renovations company london | house renovation in london | Kitchen renovation london | Kitchen fitting london | Kitchen fitters in London | bathroom renovations london | painters and decorators in london | painting and decorating in london | painters in london | london decorators | vinyl tile flooring | vinyl flooring | laminate flooring | parquet flooring | wood flooring | parquet flooring london | luxury vinyl flooring | lvt flooring | wood flooring london | karndean flooring | herringbone flooring | laminate flooring london | amtico flooring | bathroom floor tiling | bathroom tiling | kitchen tiling | floor tiling | porcelain tiling | terrazzo tiling | painting and decorating leicester | painter and decorator ealing | painting and decorating brighton | local decorators

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 00:31
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft