molbiol.ru -> Блокировка мембраны в Western`е

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Блокировка мембраны в Western`е

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Yeaster

10.12.2002 20:20

URL #1

Кто нибудь может посоветовать, где достать обезжиренное сухое молоко для блокировки мембраны?

Tom1
Постоянный участник

10.12.2002 20:27

URL #2

в магазине
[Текст переведён с транслита]

10.12.2002 23:13

URL #3

Надо купить сухое молоко с процентностью от 1 до 2.5% это при разведении соответствует 0.1-0.25% это условно считается обезжиренным. А еще можно обычное купить и на фуге открутить при 0С.

Midgardsormen
Постоянный участник

11.12.2002 09:52

URL #4

В магазине надо осторожно. Раз приспичило блот забить - ан нету молочка. От фишера придет на послезавтра, посылаю лаборантку в магазин, крупными буквами писю - Fat-free Dry Milk. Спиноза возвращается обратно, ставит коробку на полку - Instant Oatmeal. Ну я это на полке для смеху и оставил, а молочка я в результате у соседей занял, а пока ходил, на этой овсянке другой спиноза таки поставил забивку... И чего - отмыли и все видно. А лаборантка эта ваще мать-героиня, как-то раз LB ухитрилась сделать розовый... Я тогда специально для нее перефразировал известную армейскую хохму про продувку макарон - а именно продувку грушей носиков для PCR [img]laugh.gif" border="0[/img]

Павел
Постоянный участник
Новосибирск

11.12.2002 09:54

URL #5

2 Tom1: В России сложно с обезжиренным сухим молоком, прикинь!
Алкоголя - какого хочешь и отовсюду, а вот ентот продукт люди из US прут. Хотя вот недавно мне друг привез настоящего Jack Daniels
(вроде прально написал) - классная самогонка!

antihistone
Участник

11.12.2002 15:31

URL #6

У меня 5% БСА + 1%ПЕГ +1%ПВП работает лучше чем молоко. Уж больно "основательно" блокирует молоко.

11.12.2002 15:51

URL #7

Я уже писал, что молоко и БСА не взаимозаменяемы, более того для некоторых антител взаимоисключающи. Общее правило, которое я придерживаюсь - если у вас фигурирую антитела к фосфорилированному эпитопу, то БСА будет работать намного лучше, так как молоко зачастую просто убьет специфический сигнал.

Павел
Постоянный участник
Новосибирск

11.12.2002 16:22

URL #8

ну ни фига ты загнул. выглядит как нагорная проповедь.

Ivolga
Постоянный участник
HK

11.12.2002 17:08

URL #9

Ребята, а казеином блокировку можно делать? Если кто пробовал, как оно? И какой процентности? А то смотрю я на уменьшаюшееся количество молока и уже грустно, а достать в России, как правильно Павел писал, очень сложно (Или может оно только для Сибири характерно, здесь все пожирнее любят). А казеин мы купили для ИФА, но были только большие фасовки, поэтому теперь имеем килограмм этого добра, вот и думаю, может его приспособить?

Tom1
Постоянный участник

11.12.2002 18:36

URL #10

Согласен с гостем иногда молоко почему-то убивает все напрочь причем это не важно моно или полицлон.
Поповоду казеина делал я как то брал его 2.5 процента почему эта цифра не понму правда растворял это в PBS с Tween-20 нормально получилось как с BSA. кстати о птичках есчо можно использовать для забивки сыворотку крупного рогатого скота я пробовал на старои сыворотке есчо советских времен выпуска хорошо получалось
[Текст переведён с транслита]

Yeaster

11.12.2002 19:45

URL #11

Может я не вовремя, но все-таки: реально ли достать у нас обезжиренное молоко?

<ммм>! Все, что удалось найти в ближайших магазинах имеет
жирность около 18%. Кстати, по нашей методике молоко
должно быть 5%. Вы что, используете другую концентрацию?
Midgardsormen! Это что же, из твоего эссе получается, что жиры
вообще ни на что не влияют?
antihistone! Рады бы использовать БСА, да нету...

Tom1
Постоянный участник

11.12.2002 20:01

URL #12

Я написал попробуй сыворотку крупного рогатого скота советского производтва. Я думаю что если поискать то точно у кого-то заволялась со старых времен для культур я бы не рискнул ее использовать а вот для блотов самое то. В ней концентрация BSA где-то 50мг/мл
[Текст переведён с транслита]
[Текст переведён с транслита]

Yuri Knyazev

12.12.2002 19:20

URL #13

Могеш попробивать 10ксНЕТ+10ксГелатине, таботает супер и никаких проблем с молоком. Такге в нем могно разводить 1ст антибоды.
[Текст переведён с транслита]

Yuri Knyazev

12.12.2002 19:21

URL #14

Ну и перевод

)))
[Текст переведён с транслита]

13.12.2002 15:18

URL #15

А чего это все за сухое молоко и еще обязательно обезжиренное ухватились. Понятно что проще, но ведь искать вот некоторым приходится. Помнится раньше бутылочку за 30коп в универсаме покупал 30 минут на 10000 rpm при 4С, сливки съедал, остальное разбавлял PBS вполовину и вперед. Все было.

Midgardsormen
Постоянный участник

13.12.2002 18:59

URL #16

"Ухватились" потому что fat-free milk это общепринятый компонент раствора под названием блотто. А вот сага про покупку бутылки молока в универсаме с последующим фракционированием в материалах и методах будет выглядеть слишком колоритно. Тут я разумеется исхожу из предположения, что присуйствующие собираются в конце концов свои труды опубликовать.

13.12.2002 20:25

URL #17

Ну так fat-free milk всегда fat-free milk'ом и останется, неважно вы лично его покрутили или производитель на заводе это сделал, перевел в порошок, а вы только обратно развели.
И потом человеку шашечки надо или ехать. Если работать не на чем, то это вариант, если из принципа нужно сухое, то другой разговор.

15.12.2002 14:47

URL #18

Я покупал в бакалейном ларке. Если в Питере-то на Сенной, можно на Северном, а в Москве можно в супермаркете не советское, а импортное, а разведение я указывал для молока которое пить, а не которым забивать. (Кого можно забить молоком?

)

Moshkovskii

17.12.2002 14:33

URL #19

Имеется успешный опыт использования в данных случаях имеющегося в продаже в России молока Parmalat 0,5% жирности.

OlesyaP

18.12.2002 18:06

URL #20

Попробуйте купить сух. молоко в магазинах, где продаются товары для беременных-кормящих. Там можно купить именно обезжиренное молоко, только убедитесь, что в нем нет каких-нибудь примесей.
5% - это много. Обычно все делают 3%, но по своему опыфту могу сказать, что высокая концентрация молока - это плохо. Лучше брать 0,5-1% сух. молока на TBST (или PBST)

vadimchik152a
Постоянный участник

02.10.2022 19:15

URL #21

Тем не менее стоит отметить так же, что движение в данном направлении ни коим образом не противоречит нашей теории, а скорее наоборот, способствует улучшению и анализу необходимых данных для разрешения ситуации в целом. https://www.drefron.com/profile/grualert/profile

Ufa1688
Постоянный участник

03.10.2022 19:32

URL #22

Seaman Recruit Ryan ufa1688 Mays was acquitted on ราคาบอล charges of willful hazarding สล็อตออนไลน์ of a vessel and aggravated UFA1688 arson, the Navy said in a statement ลิงค์รับทรัพย์ following a court martial แฮนดิแคป in which a judge ruled บอลสเต็บ there was not enough evidence ufabet เข้า สู่ระบบ that Mays set the fire that destroyed ufa1688auto the USS Bonhomme Richard ufa1688 auto ทางเข้า more than two years ago.

vadimchik152a
Постоянный участник

05.10.2022 01:03

URL #23

С другой стороны сложившаяся структура организации ни коим образом не противоречит нашей теории, а скорее наоборот, способствует улучшению системы массового участия. https://www.bodnant-welshfood.co.uk/profile...ksej15y/profile

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.