 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Antibody -- purification --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
|
guest: Vyach IP-штамп: frWKf2AKRVu2Q гость  |
 08.07.2006 01:14
Есть следующая проблема: имеется лиофилизированная сыворотка ( с титром Ат~1:50). Для иммунки она соответственно не годится, нужно чистить. Тут есть два варианта либо сыворотку пустить в аффинную хроматограцию, либо провести стандартное высаливание сульфатом аммония и последующим лиализом, но тогда можно потерять сами АТ, т.к. их количество слишком мало. ЧТО ЖЕ ДЕЛАТЬ??? КАК БЫТЬ!!! |
|
guest: yMHuK IP-штамп: frydUUByF2C9E гость |
08.07.2006 04:48
|
|
Guest IP-штамп: froVJtvAFK.QQ гость |
08.07.2006 10:16
т.е. Вы предлагаете растворить сывототку в буфере и на колоночку? А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать? |
 FritzПостоянный участник Москва |
08.07.2006 11:18
|
|
Guest IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
08.07.2006 15:32
Что такое "иммунка"? И откуда такое безаппеляционное мнение о пригодности? --- сыворотку пустить в аффинную хроматограцию -Вы все о грации, а мы тут про антитела базарим.  -В этом случае вы избавитесь от альбумина и от большинства неспецифичных антител в сыворотке. --- провести стандартное высаливание сульфатом аммония и последующим лиализом, В этом случае вы избавитесь в основном от альбумина и не избавитесь от неспецифических антител. ---но тогда можно потерять сами АТ, т.к. их количество слишком мало. Слишком мало это сколько? Потерять можно и на аффиной колонке. Например антитела не выдержат экстремальных рН. ---антигена мало (макс. 1мг в мл) а по мне так воз и маленькая тележка, или у вас его несколько мкл. ---и он не очень чистый. Примеси в антисывороткой окрашиваются? Если нет, то читоту можно считать достаточной для аффиной очистки. ---т.е. Вы предлагаете растворить сывототку в буфере и на колоночку? Мил. чел. мы тебе предложить ничего не можем ибо тему ты излагаешь мутно, подробности давай. Растворять сыворотку для аффинки часто совсем не обязательно. ---А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать? Сефадекс для этого совершенно не годится, уж лучше целлюлоза. А активировать тем что есть, бромциан, эпоксиактивация , цианурхлорид гидроксисукцинимидные эфиры, периодаты и тд . |
|
Tom1 Постоянный участник |
08.07.2006 16:50
2.если титр в самом деле при ЕЛИСЕ в педаль такую сыворотку ....... ну если уж извращаться то имхо в начале белокА или белок Г( не понятно откуда антитела) сефароза, ну а потом аффинная хроматография ..... хотя повторюсь если такой титр легче и проще и правильней в педаль и получить новую анти-сыворотку..... 3.Растворять сыворотку для аффинки часто совсем не обязательно. не понятно что сухую сыворотку на колонку сыпать?????? .Да Париж не знал такого разврата..... 
|
|
Mac-1 Постоянный участник оттуда |
10.07.2006 07:41
А если положение пиковое, ничего больше нет, но "очень хочется", а сыворотки много (очень много), и лишнего времени - тоже много, то можно попытатся выделить АТ на АГ. Если АГ у вас очень мало (несколько десятков мкг), то его проще всего биотинилировать (есть киты для этого, например у Пирса) и посадить на стрептавидин-агарозу (многие компании продают) - в этом случае "эффективность посадки" вашего АГ будет близка к 100% (против 10-50% при стандартной посадке 1 мг/мл на бромциан- или эпокси-активириванную агарозу). А если выделять ИГ на Протеин А/Г или осаждением - то проще взять центрикон на 50 кДа и сконцентрировать сыворотку раз в 20-50 - в этом случае, даже при полной удаче (ничего не потеряете), у вас после рабочего разведения будет финальная концентрация ИГ все те же 1 мкМ = неспецифика, зато времени и усилий это займет на порядок меньше.
|
|
Ale-x Постоянный участник |
02.04.2008 18:27
(Guest @ 08.07.2006 15:32)  ---А на чем лучше на сефадексе или сефарозе? и чем их можно проактивировать?Сефадекс для этого совершенно не годится, уж лучше целлюлоза. А активировать тем что есть, бромциан, эпоксиактивация , цианурхлорид гидроксисукцинимидные эфиры, периодаты и тд . Кто-нибудь знает, почему сефадекс не годится для активации? Только размеры пор лимитируют, или есть какие-то химические причины? |
|
laska56 Участник |
02.04.2008 18:54
|
|
Fritz Постоянный участник Москва |
 03.04.2008 18:54
|
|
Ale-x Постоянный участник |
03.04.2008 18:59
(Fritz @ 03.04.2008 18:54) Sephadex-vrode iz dextrana, a sepharose iz agarozy, proshe aktivirovat poslednuju!)))Это почему? Декстран лучше окисляется, у него гидроксильных групп больше
|
|
Fritz Постоянный участник Москва |
06.04.2008 22:58
|
|
Guest IP-штамп: frNFBHcL2JSwo гость |
06.04.2008 23:01
|
|
Fritz Постоянный участник Москва |
07.04.2008 12:31
|
|
Ale-x Постоянный участник |
08.04.2008 10:45
(Fritz @ 06.04.2008 22:58) Mne dumaetsja,shivki tam ne takie stabilnije i pri okislenii,sorbent prosto nachnet valitsja.Нет, сорбент не валится, т.е. по крайней мере не растворяется, но я боюсь, не будет ли белок пришиваться преимущественно по коротким продуктам распада. Никто не пробовал? |
|
watchesonline89 Постоянный участник |
23.12.2022 11:40
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.