Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
|
|
|
используется в системе "Ready to go" и в nic трансляции и весьма успешно.Но при мечении коротких последовательностей (короче 400пн) возникают сбои при использовании традиционных подходов. PCR казался естественным решением коллизии.В итоге 100% неудача и ,главное, со- вершенно непонятно почему. С ув. tamm |
|
Кстати, а почему на коротких фрагментах сбои? А Вы не пробовали Кленова? или это и есть "Ready to go". |
|
форме. Так что насчет метки сомнений нет. С ув. tamm |
|
|
|
оказалось непростым.Не буду утомлять подробностями,но действительно необходим баланс (и довольно тонкий)между кол-вом ме- ченного и немеченного С.При этом собственно PCR (небольшое кол-во матрицы и 20-25циклов ее размножения) так и не идет в присутствии метки.Речь пока идет о 2-3х циклах, а ДНК приходится размножать отдельно (без метки). Заранее прошу прощения за некоторую косноязычность - некоторые вещи еще в работе и полной ясности нет. С Ув. tamm |
|
|
|
|
|
но нельзя ли чуть подробнее (или ссылочку, лучше в сети). С ув. tamm |
|
|
|
что Р32 дает бета-распад.Поправте меня,если я не прав.Если же я захочу использовать гамма- распад,то вынужден буду использовать другой изотоп (например йод...).И еще.По моим при- кидкам удельная активность зонда окажется на 3 порядка меньше, чем при использовании фрагмента Кленова. Или еще меньше.Не слишком ли велика цена,как Вы полагаете? С ув. tamm |
|
Гамма - третья фосфатная группа на нуклеотиде( первая альфа, вторая бетта) - традиция в названии . Действительно фосфор 32 и 33 дают всегда бетта распад. Использование гамма меченого АТФ в киназной реакции довольно популярный метод ( гамма АТФ - дешевле) . Удельная активность зонда будет гораздо меньше , правда , обычно , если метка свежая , то этого хватает. Неспецифики также будет меньше. |
|
основной вопрос ( о мечении ДНК с помощью PCR ) не привлек Вашего внимания. С ув. tamm. |
|
Taq (i lubaya drugaya termostabil'naya) polimeraza ne budet rabotat' esli konz. odnogo iz dNTP nije 0.1 mM. Na gele (agaroznom) produkt takoi reaktsii mecheniya ne uvidesh, viden shmer. Nado smotret' po vklucheniu metki. A voobsche eto daleko ne samyi luchshii sposob prigotovleniya zonda s RADIOAKTIVNOI metkoi. Takoe delali v nachale 90 godov, no potom vse ob etom zabyli. Takim sposobom metku mojno vognat' prakticheski vsu, no udel'naya vykhodit nizkaya. |
moonlife447 Участник London, UK |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |