molbiol.ru -> Вертикальный электрофорез

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Вертикальный электрофорез

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Анастейша

02.10.2017 11:19

URL #1

Здравствуйте))ставила вертикальный электрофорез(полиакриламидный гель),это мой не первый гель,всегда все нормально было.сейчас вот такая картина.при приготовлении ПААГ придерживалась следующей методике: (ACRILAMIDE 2K = 2,32ГР, BTS-ACRYLAMIDE = 0,08гр, TAE 50x = 400 мкр, Н2О = довели до 40 мл)
1.перемешали на магнитной мешалке полиакриламидную смесь до полного растворения, добавили 40 мкл ТЕМЕDа,
2.отлили 5 мл на пробку и поставили обратно на магнитную мешалку,
3.к 5 мл добавили 12 мкл ТЕМЕDа и 62 мкл PSA 10% и перемешали,
4.залили пробку в камеру,
5.к оставшиеся 35 мл полиакриламидной смеси добавили 293 PSA 10%, перемешали и залили в камеру,
6.оставили полимеризоваться,
7.по истечению времени (минут 40) внесли пцр пробы по 5 мкл и 2 мкл маркера,
8.электрофорез шёл 1 час 20 минут, сняли гель под струёй воды,
9.выдержали гель в бромистом этидии 5 минут,
10.положили гель на трансиллюминатор и получили следующую картину:

Картинки:

P9297310.JPG — (1.36мб)

ksm
Постоянный участник

02.10.2017 13:41

URL #2

да вам нужно премию выписать!!!

Ivalex
Участник

02.10.2017 13:45

URL #3

Мне кажется, или вы забыли такую маленькую деталь как вопрос? Или это гордость творца?

Поблагодарили (1): vb

Анастейша

02.10.2017 14:44

URL #4

вопрос заключается в том,почему он получился таким нечетким и пятнистым, в чём может быть причина?))

dk
Постоянный участник
Россия

02.10.2017 14:57

URL #5

Анастейша, а что Вы хотите от участников форума-то? На геле, вроде как микросателлиты (или фрагменты)? Вроде всё видно. Кроме опечаток типа acrylamide и bis-acrylamide, ну я бы ещё красил 15 минут.

Ivalex
Участник

02.10.2017 15:04

URL #6

(Анастейша @ 02.10.2017 15:44)

вопрос заключается в том,почему он получился таким нечетким и пятнистым, в чём может быть причина?))

Пятнистый потому что грязный. Стекла плохо мылись или что-то еще.
Сравнение с серебряным крашением, конечно, некорректное, но вот у нас был плохой тиосульфат, от него была куча пятен. Поменяли - стало хорошо

А сам гель достаточно четкий, остальное - работа в графическом редакторе для улучшения визуализации результата. Контраст, цвета, все такое.

X34
Участник

02.10.2017 15:12

URL #7

не, нучо вы налетели. неплохой гель, я лет 20 назад такие же гонял, когда сибирской зелени не было красили серебром, а там бывало фон покруче был.
а вам анастасия над бы к шефу подойти и тонко намекнуть, что де 21-й век на дворе, хорош этидием молодых симпатичных барышней травить

X34
Участник

02.10.2017 15:16

URL #8

(гель @ 02.10.2017 15:18)

ну ландно чиго на девушку наехали ну касяк у меня однажды китайсский аспирант за ночь умудрился обламать все ухи на вертикольных гелях

а вот за это в 90-х просто убивали

Анастейша

02.10.2017 15:49

URL #9

нам выбирать не приходится,что Москва пришлёт,такой химией и пользуемся))не смотря на наши рекомендации,присылают не то что просим)

Анастейша

02.10.2017 15:52

URL #10

да мы всё прогнали через фотошоп и более или менее всё стало на свои места,но эти пятна меня смущают,я думаю,что это ещё могли пузыри воздуха попасть между гелем и стеклом при заливании бромистым этидием.мне просто интересно послушать мнения участников,что могло бы быть)

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

02.10.2017 16:10

URL #11

Стекла у вас были пыльные и облапанные-облизанные

ПААГ любит ТВЕ.
После этидия 10-15 мин отмачивайте (отмывайте) в воде в два захода.
И вообще, с ДНК еще в прошлом веке работали на агарозе, 3-4%. АА, если не денатурирующий, все размеры фрагментов искажает в зависимости от состава.

Поблагодарили (1): dk

Анастейша

02.10.2017 16:14

URL #12

а почему бы и не бромистый этидий,чем он вам так не угодил?))

watchesbiz
Постоянный участник

23.11.2021 14:54

URL #13

https://archives.profsurv.com/forum/Profess...ert/-67881.aspx
https://atlanta.bubblelife.com/community/an...ex_Watch_Online
https://gumroad.com/rolexrelicawatches/p/di...replica-watches
https://onmogul.com/stories/guide-on-how-to...ex-watch-online
https://list.ly/i/5704105
https://www.behance.net/gallery/114237003/Replica-Rolex
https://www.mlbdailydish.com/users/Replicarolexwatches
http://replicawatches24.simplesite.com/
https://watcheshutuk.cabanova.com/
https://www.pinterest.com/watcheshutuk/_saved/
https://www.linkedin.com/pulse/guide-how-pu...online-hei-bai/
https://justpaste.it/8t11q
https://padlet.com/watcheshutuk/in2opwnfmnmclce8
https://www.allforxi.com/users/Replicarolexwatches
https://profile.hatena.ne.jp/Rolexrelicawatches/profile

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.