Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Guest IP-штамп: frMqP6RPm1mxU гость |
|
ship Постоянный участник Moscow |
при -20С. |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
|
Guest IP-штамп: frMqP6RPm1mxU гость |
|
Mykhaylo Постоянный участник Україна |
|
Guest IP-штамп: frMqP6RPm1mxU гость |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(Guest @ 22.04.2010 13:44) ЕДТА в умереных количествах, азид натрия от 0,1 до 0,01%, Проклины всякие. Да мало ли еще каких... А ПЦР по фиг, т.е не ингибируют. |
Лошарик Донецк |
|
Dimych Постоянный участник Kr-sk - Puschino - NYS - Calgary... Круг замкнулся |
|
Andrew Постоянный участник Москва |
(Лошарик @ 22.04.2010 16:46) Говорят, до месяца при -20С (практически выходит дольше), до года при - 70С (не пробовали, но тоже говорят, что дольше может протянуть). Какой месяц... Какой год... Вот недавно разморозили плазмиду, которая с конца восьмидесятых лежала в каком-то полудохлом "розенлеве" (или "саратове"...) и ничего... даже на форезе выглядит вполне прилично, не говоря уже о трансформации. Так что я думаю на -70 и для ПЦРа лет 100 пролежит...
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
Andrew Постоянный участник Москва |
|
RJ Dio Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано RJ Dio - 23.04.2010 12:19 |
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(RJ Dio @ 23.04.2010 11:34) Вспоминаются суровые временя Саузернов... |
D evgenii Постоянный участник Томск |
|
RJ Dio Постоянный участник |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
|
D evgenii Постоянный участник Томск |
|
Daemonarchestratygos Постоянный участник |
(Guest @ 22.04.2010 10:17) Если не геномная (например, плазмидная) - без разницы (для долговременного (годы) хранения можно парафильмом обмотать верхнюю часть эпп-фа или использоватьть пробирку с завинчивающейся крышкой). Впрочем, линейную ДНК (если она имеет концевые фосфаты и они нужны), я бы всё-таки хранил при -80 (если долго). Геномная же ДНК может быть механически повреждена (порвана) кристаллами льда в результате замораживания-оттаивания, так что хранить следует при +4. |
akatar |
Выпадение нерастворимого осадка ДНК при хранении связано скорее не с усыханием из-под крышки, а с потерей ДНК сольватной оболочки и залипанием ее самой на себя. Физхимия, так сказать... Температуры типа -70 / -80 очень способствуют такому вымораживанию ДНК из собственной сольватной оболочки; а недовычищенные при выделении белки очень способствуют тому, что регидратировать такие конгломераты потом практически невозможно. А потому, хранить геномку на -70 не рекомендуется. И уж совсем не рекомендуется, как это делают некоторые умельцы, хранить геномную ДНК в виде осадка под спиртом. И еще такой момент - концентрация геномной ДНК для хранения в заморозке лучше чтобы была не более 1 - 1,2 мгк/мкл; чем ДНК жиже, тем меньше вероятность, что часть ее вывалится в нерастворимый осадок. Хотя основную роль тут играет скорее даже не высокая концентрация ДНК, а именно ее недостаточная чистота, сильные белковые примеси. А вот для РНК эти сольватные дела вроде бы особой роли не играют, и ее надежнее всего держать как раз на -70. Если при выделении или потом при работе РНКаз в нее не затащили, то даже без ингибиторов РНКаз такая РНК тоже может годами жить. На +4 геномку в принципе можно без особого ущерба держать неделю-другую, а то и месяц, - но это все же вариант не для длительного хранения, не на годы. Точно не знаю, лично не проверял, но думаю, за пол-года - год на +4 ДНК в значительной мере развалится, так что лучше все же убирать на -20. Сообщение было отредактировано akatar - 28.04.2010 11:19
|
campus Участник Иркутск |
|
akatar |
А вот ДНК, даже одноцепочечную, типа праймеров, так хранить не стоит. Особенно под спиртом. Особенно геномку - длинную, двуцепочечную, и, при нынешних быстрых колоночных методах выделения, - зачастую с мощными белковыми примесями. Сообщение было отредактировано akatar - 28.04.2010 11:16
|
arabidopsis Участник |
(Guest @ 22.04.2010 10:17) Думаю, пару тысяч лет в замерзшем состоянии пролежит А на какой температуре из этих - без разницы. Сообщение было отредактировано arabidopsis - 28.04.2010 12:03 |
arabidopsis Участник |
(Лошарик @ 22.04.2010 16:46) Говорят, до месяца при -20С (практически выходит дольше), до года при - 70С (не пробовали, но тоже говорят, что дольше может протянуть). Я не знаю что там говорят, но пользуюсь в работе образцами с геномки, которым уже не менее 6 лет. В воде. И ничего с ними не происходит. |
arabidopsis Участник |
(RJ Dio @ 23.04.2010 08:34) Скажите это мамонтам Конечно особо длинных кусков там не останется, но чаще всего они и не шибко нужны. Касаемо же выпадения в осадок - не храните очень концентрированные растворы и будет вам счастье. Сообщение было отредактировано arabidopsis - 28.04.2010 12:08 |
RJ Dio Постоянный участник |
|
klav Постоянный участник Москва |
выделяю геномку бактерий SDS лизисом, затем фенолом. Финально растворяю примерно 5 мкг ДНК/мкл в воде. Такой препарат при хранении на -20С через полгода заметно деградирует, а через год там почти ничего нет. |
RJ Dio Постоянный участник |
|
Statin Постоянный участник |
|
медуза IP-штамп: fr32TkPWTePOw гость |
нашим РНК уже год. сделали электрофорез - ни..че..го.. а год назад было. могла ли она разложиться? хранили на -80*С. |
Guest IP-штамп: frxGOYQklo76Y гость |
|
afanasev-max Постоянный участник Irkutsk-Moscow-Irkutsk |
депуринизация оснований, вот и валится все после нагрева. ЗЫ: а вообще, нифига тему подняли! с 10 года |
DK. Постоянный участник |
|
RNK Постоянный участник СССР |
Но лучше в 1хТЕ хранить, в буфере.
|
DK. Постоянный участник |
А с криопротекцией есть такие любопытные статьи (правда, для ДНК, а не кДНК ): Röder B, Frühwirth K, Vogl C, Wagner M, Rossmanith P. Impact of long-term storage on stability of standard DNA for nucleic acid-based methods. J Clin Microbiol. 2010; 48(11):4260-4262. Schaudien D, Baumgärtner W, Herden C. High preservation of DNA standards diluted in 50 % glycerol. Diag Mol Pathol. 2007:16(3):153-157 |
Carbon Copy Постоянный участник So close no matter how far |
|
MMM Постоянный участник |
(DK. @ 29.12.2016 09:24) А что о криопротекторах при хранениии кДНК? В одной из "знакомых лабораторий" хранят с добавлением DMSO до 5%, якобы защищает при циклах замораживания-оттаивания. Были ли какие-либо работы с криопротекцией? - добавки, не мешающие ПЦР. ДМСО и глицерин - да помогут - это очевидно и не требует специальных доказательств. Но глицерин именно в этом приложении, почему-то нравится больше. Будем считать, что это на интуитивном уровне. Не требует объяснений и то, что чем чище реагент, тем лучше.
|
MMM Постоянный участник |
(Carbon Copy @ 04.01.2017 00:43) Меня вот другой вопрос интересует, насколько стабильны ДНК и РНК в лизирующем буфере (4М гуанидин тиоцианат)? Скажем, если начать процесс экстрации нулеиновых кислот, но не закончить? Можно ли хранить ДНК в лизирующем буфере при комнатной температуре? В общем не рекомендую. Денек другой - почти незаметно, неделя - уже плохо, месяц - совсем плохо. При чем в гидрохлориде сохранность лучше чем в тиоцианате. Сообщение было отредактировано avor - 07.01.2017 16:11
|
Carbon Copy Постоянный участник So close no matter how far |
(MMM @ 04.01.2017 11:50) В общем не рекомендую. Денек другой - почти незаметно, неделя - уже плохо, месяц - совсем плохо. При чем в гидрохлориде сохранность лучше чем в тиоцианате. Это Вы сами такие эксперементы устраивали? Интересно, с какой целью? В смысле, кому такая лабуда могла ещё в голову прийти.
|
MMM Постоянный участник |
|
DK. Постоянный участник |
Сообщение было отредактировано DK. - 07.01.2017 13:23 |
R.J.Dio Постоянный участник |
|
avor moderator |
(DK. @ 07.01.2017 11:22) Коллеги, подскажите, пожалуйста, как убрать "неуместную благодарность" - оно, конечно, лишнее спасибо никогда не помешает. Вроде никак. У меня не получается Вот из хелпа: Поблагодарить дважды нельзя. Отменить свою благодарность — тоже. |
DK. Постоянный участник |
(R.J.Dio @ 07.01.2017 15:08) - можно "спасибами" .
|
sunword |
Сообщение было отредактировано sunword - 27.01.2018 15:32 |
dk Постоянный участник Россия |
А вообще кристаллическая ДНК хорошо хранится, но всёж потихоньку окисляется (орг.хим). Можете осадок залить спиртом - вот это уже "на века". Правда, потом большая проблема её растворить. Хранить лучше в холодильнике (физ-кол хим).
|
sunword |
|
dk Постоянный участник Россия |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
(sunword @ 27.01.2018 16:30) А долго ли хранится лиофилизированная ДНК? Например, выделенная фенол-хлороформным методом и оставленная без добавления воды/TE на последнем этапе. И как её хранить? При -20 или при комнатной температуре? Хранится десятки лет при комн. температуре. |
Alex7777 |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |