Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Ruslan Sim |
Выделил я, значит, РНКу с extractRNA от Еврогена с двойным экстрагированием (фото 1). После этого высадил с 12М LiCl (фото 2). Затем пустил материал на синтез кДНКи (Термофишеровская ревертаза аш минус, в соответствии с протолом) . В результате qPCR дает лишние пики плавления для некоторых генов при программах, что раньше давали норм результат. На фото 3 первые 9 образцов - референс (6 вариантов + 3 отрицательных контроля с водой), следующие два раза по 9 лунок - вирусные гены (также 6+3), после чего идут три контроля с РНК (без кДНК) - видимо с геномки фигачит (но выходит на поздних циклах со странными пиками плавления), последние 9 вариантов - также еще один вирусный (в том же порядке 6+3). Может неспециф прет из-за малого количества матрицы или еще из-за чего? Буду признателен за любые подсказки, спасибо! Картинки: RNA_20190901_THP1_HCMV_DBA11_LiCl12M.jpg — (81.98к) RNA_20190831_THP1_HCMV_DBA11_2.jpg — (298.01к) PSX_20190902_203438.jpg — (996.32к) |
737MAX Участник |
ChIP-Seq |
737MAX Участник |
(737MAX @ 03.09.2019 12:52) на форезе |
semi Постоянный участник Москва |
После осаждения появился высокомолекулярный бэнд. Судя по всему, это геномная ДНК. Картинки: 2019_09_03.png — (71.6к) |
737MAX Участник |
(semi @ 03.09.2019 14:54) Зачем вы осаждаете РНК после выделения? После осаждения появился высокомолекулярный бэнд. Судя по всему, это геномная ДНК. семи антчапис от киндеров |
737MAX Участник |
(semi @ 03.09.2019 14:54) Зачем вы осаждаете РНК после выделения? После осаждения появился высокомолекулярный бэнд. Судя по всему, это геномная ДНК. семи на фотке рибосомалка с этидией justme делат некуй в старческом возрасте |
Ruslan Sim |
(semi @ 03.09.2019 14:54) Зачем вы осаждаете РНК после выделения? После осаждения появился высокомолекулярный бэнд. Судя по всему, это геномная ДНК. Прошу прощения, фотки перепутались (после выделения - 2, после переосаждения - 1). Переосаждал с хлоридом лития, для устранения примеси геномки как раз. |
737MAX Участник |
(semi @ 03.09.2019 14:54) Зачем вы осаждаете РНК после выделения? После осаждения появился высокомолекулярный бэнд. Судя по всему, это геномная ДНК. Судя по всему, это геномная ДНК. |
737MAX Участник |
(Ruslan Sim @ 03.09.2019 15:33) Прошу прощения, фотки перепутались (после выделения - 2, после переосаждения - 1). Переосаждал с хлоридом лития, для устранения примеси геномки как раз. чиго ку пцрите праймеры маттрица и осталное куёмоё |
nigoal123 IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |