Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Результаты поиска -- Найденные сообщения --

страницы (190):  1 2 3 > » 

Хранение праймеров
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 20.08.2019 17:33  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1766274  |  Ответов: 10  |  Просмотров: 1 251
(X34 @ 20.08.2019 14:24)
Ссылка на исходное сообщение   но, как горит Карпов "наливай, сейчас я тебе что-то интересное расскажу, ты не поверишь, но бывает...."

lol.gif lol.gif lol.gif

Киты [Qiagen] [ QIAamp]
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 13.08.2019 10:33  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1765234  |  Ответов: 28  |  Просмотров: 1 219
Плотник, а что, нормальная тема!
Я тоже подключусь через пару дней, сейчас занят текучкой.

need help with PCR
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 20.06.2019 19:37  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1758112  |  Ответов: 10  |  Просмотров: 796
Отжиг наоборот повышайте сколько еще позволяют 20 нт, но самое главное надо повысить ВРЕМЯ на отжиге в два-три раза (до минуты) на первых 4-5 циклах.
А далее по программе 72-95 град. делайте то же количество циклов, что было с "нормальными" праймерами. Все должно быть ОК, по своему опыту.

Проблема про диагностике HBV методом Real time PCR
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 29.05.2019 10:34  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1755401  |  Ответов: 42  |  Просмотров: 1 167
(vb @ 29.05.2019 10:46)
Ссылка на исходное сообщение  Вообще, если пациент сдавал в разное время в разных кдл, то сравнивать результаты уже не очень корректно.
во вторых, если действительно хотите разбираться, то есть такие вещи как внутрилаборатрный и внешний контроли качества.
есть ли у вас внутрилабораторная панель? Участвуете ли вы в какихто программах внешнего контроля качества?
Очень, очень рекомендую.
внутренний контроль очень полезен при получении новых наборов. Я в свое время каждый новый набор так испытывал, а после ряда случаев некачественных серий, каждую новую серию набора.
второе будет вам пооезно при доказательстве своей правоты, если не дай бог, дело дойдет до суда.

Маловероятно судя по постам.

Проблема про диагностике HBV методом Real time PCR
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 29.05.2019 10:32  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1755400  |  Ответов: 42  |  Просмотров: 1 167
Все намного банально, не надо девушку мучить...
Этих генотипов HBV туча, от А до ...?, а у Литеха они, видимо, не охвачены в одной реакции, или просто редкий случай с одной заменой, не определяющей генотип.
В праймерах ошибка маловероятна, но в зонде легко допустить такое.
А сам сто раз переделывал свои олиги на стадии разработки из-за таких "пропусков".
Вам нужно сравнить результаты по этому образцу на китах от разных производителей, но внутри вашей Лабы.
Звоните в Литех, разбирайтесь... На форуме пока не вижу дельных советов.
Можно проигнорировать программу амплификации от производителя и поставить "свою": 95 - 2 мин. - 1 цикл,
95 - 20-30 сек,
50 - 20-30 сек,
60 - 40 сек (чтение плашки) - 40 циклов.

Возможно сигнал поднимется, если образец по настоящему +.

Выделение ДНК на наборах без регистрации
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 24.05.2019 10:15  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1754732  |  Ответов: 7  |  Просмотров: 922
(LMP @ 23.05.2019 17:31)
Ссылка на исходное сообщение  . Другая - это рег удостоверение минздрава. Если его нет, и вы не медучреждение то вам пох. Вообще-то наши медики и это ограничение тоже по-разному обходят, так что единственный возможный довод на наличие подобной ру-шки пользователю - это опять же цена, т.к. продукты с подобной регистрацией не облагаются НДС или он существенно ниже (хотя это больше бонус для того кто ввозит или покупает сам без посредника).

Интересно было бы узнать как обходят confused.gif

Выделение ДНК на наборах без регистрации
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 24.05.2019 10:12  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1754730  |  Ответов: 7  |  Просмотров: 922
От кого станция, в чем принцип работы (это больше Генсека интересует, а меня - нет, мне по фигу, у меня есть все smile.gif )?
Этих наборов в России как грязи, полно, и даже зарегистрированных. Обращайтесь!

Кто живет в водопроводе?
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 24.05.2019 10:06  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1754729  |  Ответов: 21  |  Просмотров: 956
100%. yes.gif Но если бы не делал паузы в виде многоточия, фиг вычислили бы.
От такого классного ника отказался, художник-уникалист tongue.gif .

Ъ & Третьяков
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 22.05.2019 19:52  |  БеседаБеседа  |  link: #1754504  |  Ответов: 1  |  Просмотров: 690
(TAMARA5 @ 19.05.2019 00:57)
Ссылка на исходное сообщение  знакычь привет ну что старый стал ленивый  lol.gif  lol.gif  lol.gif
https://www.ivi.tv/watch/o_bednom_gusare_zamolvite_slovo

Привет! Я всегда был ленивый, но не в том дело! mad.gif
Я сейчас очень не доволен тобой! mad.gif
Ты конечно читал это:

Уважаемые коллеги,
К сожалению ни для кого не секрет, что уже довольно давно форум утратил управляемость, стратегию развития и наполнения контентом. Доступ к функциям администратора по всей видимости утрачен безвозвратно.
Уже давно форум представляет для меня скорее ностальгический, чем профессиональный интерес. Тем не менее, до определенного момента я чувствовал себя обязанным поддерживать какое-то подобие порядка в том деле, за которое взялся. Но недавно я пришел к выводу, что не располагаю для этого более достаточным временем.
Во-первых, боты научились обходить фильтры, которые разрабатывались и обновлялись последний раз много лет назад. На праздниках у меня ушло несколько часов, чтобы вычистить хотя бы несколько первых страниц Поиска работы.
Во-вторых, у меня нет возможности соревноваться с Третьяковым в вопросе, кому из нас больше нечего делать. Онанирует он на свои посты, или просто страдает недержанием в пьяном угаре - более я не располагаю временем его деятельность пресекать.
В-третьих, отсутствие подтверждение e-mailа при регистрации привело к наплыву ботов и просто неадекватных личностей. В отсутствие админских функций решить эту пробему системно невозможно, а каждый раз чистить вручную нет времени.
В-четвертых, без админских прав невозможно заблокировать создание новых аккаунтов с одного IP, что также добавляет ручной работы, на которую более нет времени.
Мне, действительно, очень жаль, но пришла пора признать, что эта эпоха в моей жизни окончательно закончилась.


Если ты не прекратишь дальше так безобразничать на форуме, я тебя вычеркиваю из списка своих друзей, а тебе это, думаю, не надо. Мы же когда-нибудь должны встретиться и выпить за .....
Делай выводы! beer.gif beer.gif

Быстрая ПЦР
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 16.05.2019 16:56  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1753787  |  Ответов: 25  |  Просмотров: 1 860
(hopfen @ 10.05.2019 20:43)
Ссылка на исходное сообщение  Говорят что ПЦР можно провести за 10 минут
Кто знает в чем секрет и какие недостатки

http://naukarus.com/bystraya-amplifikatsiy...nyh-mikroplatah

В современном Fast PCR ключевым звеном является что? Правильно! Полимераза, но не простая, а специальная - быстрая, точная, более термостабильная, с хот-стартом.
https://international.neb.com/Protocols/000...-protocol-m0530
На обычных термоциклерах (не на супербыстрых как у Третьякова и со специальным тонкостенным пластиком) в низкопрофильных пробирках в объеме 10 мкл за 5 сек и ваш продукт длиной 500 пн готов!
Съэкономил время - ковыряйся в носу. no.gif

Выделение ДНК
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 26.04.2019 11:14  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1751533  |  Ответов: 9  |  Просмотров: 1 467
Интересно, а человеческие фекалии, сертифицированные для выделения ДНК, тоже существуют? confused.gif На этом же озолотиться можно! lol.gif

Коррекция параметров ПЦР
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 16.04.2019 14:50  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1750399  |  Ответов: 20  |  Просмотров: 2 038
(kakakaka @ 16.04.2019 15:41)
Ссылка на исходное сообщение  сема извини топикстартер сказала что корова  eek.gif  confused.gif

нет, сказала МЕЛКИЙ, а не КРУПНЫЙ но рогатый скот. tongue.gif

Коррекция параметров ПЦР
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 16.04.2019 14:48  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1750396  |  Ответов: 20  |  Просмотров: 2 038
Вам остается попробовать ПЦР реактивы от другого производителя. Других советов чтобы Вы смогли "корректировать и калибровать параметры ПЦР" у меня лично нет.
ПЦР у Вас не идет, контролей нет никаких, т.е. говорить не о чем, к сожалению.

Коррекция параметров ПЦР
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 16.04.2019 14:13  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1750380  |  Ответов: 20  |  Просмотров: 2 038
Полиморфизм гена гормона роста у баранов. Кстати, берут все из статьи, но очень старой, и делают все по старинке как в начале 90-х.
Все нормально, но чтобы дальше резать, ПЦР продукт должен быть практически идеальным без неспецифики (шмеров) и димеров. Но до этого очень далеко...
ПЦР реактивы тоже из Синтола?

Коррекция параметров ПЦР
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 16.04.2019 10:26  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1750331  |  Ответов: 20  |  Просмотров: 2 038
Не стыдно такой гель выкладывать? frown.gif
По тому что видно, ничего не скажу. И праймеров избыток на картинке, кстати, тоже не наблюдаю.
Шмеры от самих лунок - избыток геномки или результат "бешено -бестолковой" работы полимеразы.
И еще подозреваю что у Вас ДНК грязная и ее бУхаем в реакцию много, очень много. И конц-цию праймеров исправьте заодно... где Вы видели такие кг.

Corbett Palm Cycler в наши дни
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 11.04.2019 11:47  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1749780  |  Ответов: 25  |  Просмотров: 1 633

Центрифужные колонки
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 11.04.2019 11:34  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1749777  |  Ответов: 16  |  Просмотров: 1 220
(Zmeya @ 09.04.2019 07:53)
Ссылка на исходное сообщение  Здравствуйте!

Подскажите пожалуйста, как можно регенерировать колонки для очистки ПЦР-продуктов перед секвенированием?
Пишут много где, что их можно использовать много раз, а конкретно как и чем мыть найти не получается.
Спасибо!

А сколько надо? У меня их наделано... Могу штук 20-30 подарить.
Пишите в личку.

ОТ-ПЦР в реальном времени
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 02.04.2019 10:16  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1748781  |  Ответов: 3  |  Просмотров: 1 064
(PCR777 @ 02.04.2019 02:19)
Ссылка на исходное сообщение  Потом была взята кДНК, которая ранее проходила ПЦР,  для проверки реактивов-результат такой же, замена большинства реактивов пока тоже не помогла.

Т.е. на работающей кДНК реакция тоже не проходит? Что значит "результат такой же"?
Про выделение РНК ничего не сказано.
Да и про реактивы (происхождение) неплохо бы пообщаться.

применение FTA cards
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 19.03.2019 19:44  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1747415  |  Ответов: 6  |  Просмотров: 1 451
РНК-овые вирусы хранятся по разному на подложке в тепле. Рубеллавирус скорее всего можно, но не так продолжительно как кровавые пятна для ДНК-вых тестов.

Использование бета-аланина в качестве буфера
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 19.03.2019 19:39  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1747414  |  Ответов: 2  |  Просмотров: 972
Глицин копейки стоит, а аланин - в корм свиньям если с жабой не можете справиться.

Медицинская диагностика
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 15.03.2019 10:37  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1747019  |  Ответов: 17  |  Просмотров: 1 501
ЗавЛаб определенно вырос, "поднялся" на глазах. beer.gif
Да, сейчас в стране со специалистами такая напряженка eek.gif , сам в шоке. weep.gif
Сожалею.

Как растворить тетрациклин?
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 14.03.2019 18:54  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1746953  |  Ответов: 14  |  Просмотров: 4 680
(KOF @ 14.03.2019 18:15)
Ссылка на исходное сообщение  Растворите в ДМСО вот и все

Опоздали, Анна давно уже на пенсии. no.gif

Активный ил Канализационно Очистных Сооружений
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 13.03.2019 13:25  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1746797  |  Ответов: 3  |  Просмотров: 1 054
В сторону увеличенной многократно аерации. И подкармливать, заселять ничего не надо, все придет с воздухом. Нужна небольшая звукоизоляция компрессора.
Я уже 8 лет не вижу и не знаю что такой ил...
https://www.youtube.com/watch?v=xr5iuTlyODI

кривая флуоресценции
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 05.03.2019 17:28  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1746084  |  Ответов: 79  |  Просмотров: 2 586
Мне жалко Ваше время. weep.gif
В работе должны быть КОНТРОЛИ на каждый чих, понимаете!
По Вашим картинкам, особенно по электрофорезу, у Вас ничего не работает.

Инактивация ферментов
-Ъ-
Постоянный участник
Москва


Отправлено: 05.03.2019 17:21  |  Молекулярная и клеточная биологияМолекулярная и клеточная биология  |  link: #1746083  |  Ответов: 9  |  Просмотров: 963
(lolasname @ 04.03.2019 17:50)
Ссылка на исходное сообщение  я и спрашивала: зачем нужно инактивировать эти ферменты в конце реакции?

Ферменты из разных источников (производителей) отличаются качеством, т.е. могут содержать побочные примеси, которые могут наломать ... нежные концы после рестрикции.
страницы (190):  1 2 3 > »  

Новые сообщения  Есть новые сообщения
Нет новых сообщений  Нет новых сообщений
Нет новых сообщений*  Тема с вашим участием
Горячая тема - новые сообщения  Горячая тема (есть новые сообщений)
Горячая тема - нет новых сообщений  Горячая тема (нет новых сообщений)
Важно - нет новых сообщений  Важная тема
Опрос - есть новые голоса  Опрос — есть новые голоса
Опрос - нет новых голосов  Опрос — нет новых голосов
Опрос -нет новых голосов  Опрос с вашим участием
Объявление  Объявление
Тема закрыта  Закрытая тема
Тема перемещена  Перемещённая тема


Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 24.09.19 00:14
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft