 * |   |
|
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда |  Zbio-wikiNG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: |
|
Правила
* Очистка ПЦР-продуктов перед секвенированием
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.
   |
|
guest: Quest IP-штамп: frrO7QvrSVOQ6 гость  |
 03.11.2010 10:16
|
 RJ DioПостоянный участник |
03.11.2010 11:51
|
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
03.11.2010 11:58
Согласен, что опрос дурацкий, особенно анкетка. |
|
RJ Dio Постоянный участник |
03.11.2010 12:03
|
|
Serg900 Участник |
03.11.2010 14:08
|
|
tsagan Постоянный участник |
03.11.2010 15:29
|
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
03.11.2010 17:09
 Очистка ПЦР продукта, с элюцией из геля или напрямую (если реакция идет почти идеально), стоит 10 руб  СтОит ли на этом экономить? Лучше сразу чистить не глядя, чем переделывать и тратить на это время. Но с другой стороны, может речь идет не о очистке перед реакцией циклического секвенирования, а о очистке перед нанесением на капилляр  Вот там экономия нужна и без очистки (обессоливания) худо.Следует конкретизировать вопрос.  И вообще эти опросы на молбиоле меня почему-то раздражают - типа выбираем президента. 
|
|
afanasev-max Постоянный участник Irkutsk-Moscow-Irkutsk |
03.11.2010 17:13
После сиквенсной реакции - XTerminator. Все очень просто и быстро. Да, забыл подписать, что сиквенсы получаются нормальные Одно НО: если в ПЦР бяка, неспецифика или выход низкий, то и сиквенсы паршивые будут, как не крути. |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
03.11.2010 17:24
(afanasev-max @ 03.11.2010 18:13)  после ПЦР - ExoSAP.После сиквенсной реакции - XTerminator. Все очень просто и быстро. Да, забыл подписать, что сиквенсы получаются нормальные Одно НО: если в ПЦР бяка, неспецифика или выход низкий, то и сиквенсы паршивые будут, как не крути. А не пробовали обработку ExoSAP-ом и после сиквенсной реакции? Хотя ионная сила ведь та же остается, скорее всего не подойдет.
|
|
afanasev-max Постоянный участник Irkutsk-Moscow-Irkutsk |
03.11.2010 17:40
А вообще мне такая система очень нравится. Ничего крутить-болтать-отливать-переливать не надо. Раскидал смеси восьмиканалкой, + на час времени процесс весь удлинился. Попробовал тут на днях CENTRI-SEP Columns. Ничего себе, тоже хорошо получилось. Но опять же пришлось сначала колонки готовить, потом сиквенсную смесь откапывать, откручивать, пробирки подписывать...
|
|
Guest IP-штамп: frEskG0rxwQjE гость |
04.11.2010 02:43
Потом как Вы знаете - какие сиквенсы хорошие, а какие хреновые. |
|
Guest IP-штамп: frEskG0rxwQjE гость |
04.11.2010 03:01
|
|
RJ Dio Постоянный участник |
04.11.2010 15:55
(-Ъ- @ 03.11.2010 18:09) Ферментас - не лучший контроль... Очистка ПЦР продукта, с элюцией из геля или напрямую (если реакция идет почти идеально), стоит 10 руб СтОит ли на этом экономить? Лучше сразу чистить не глядя, чем переделывать и тратить на это время. Но с другой стороны, может речь идет не о очистке перед реакцией циклического секвенирования, а о очистке перед нанесением на капилляр Вот там экономия нужна и без очистки (обессоливания) худо.Следует конкретизировать вопрос. И вообще эти опросы на молбиоле меня почему-то раздражают - типа выбираем президента. 10 р- это, конечно, оптимистично, думаю, реально цена будет 20, если считать все расходники, но тезис правильный- экономить тут не на чем, если сиквенс стоит 200-300, то 5-10% роли не сыграют, при том, что в обратном случае 9сиквенс не прошел) цена удвоится |
|
argus |
10.11.2010 21:54
(-Ъ- @ 03.11.2010 18:24) А не пробовали обработку ExoSAP-ом и после сиквенсной реакции? Хотя ионная сила ведь та же остается, скорее всего не подойдет.А как можно пользоваться ExoSAP-ом для очистки сиквенсовой реакции? Там же как раз одноцепочечный продукт получается. Или я чего то не понимаю? |
|
afanasev-max Постоянный участник Irkutsk-Moscow-Irkutsk |
11.11.2010 01:59
(argus @ 10.11.2010 19:54) А как можно пользоваться ExoSAP-ом для очистки сиквенсовой реакции? Там же как раз одноцепочечный продукт получается. Или я чего то не понимаю?кстати, вот тоже мысль. |
|
-Ъ- Постоянный участник Москва |
12.11.2010 23:06
(argus @ 10.11.2010 22:54) А как можно пользоваться ExoSAP-ом для очистки сиквенсовой реакции? Там же как раз одноцепочечный продукт получается. Или я чего то не понимаю?Понимать там нечего... Расчет на кратковременную инкубацию (не более 5 мин) и многократный избыток праймеров по сравнению с ссПЦР продуктом. Но соли, буфер...
|
|
argus |
13.11.2010 13:11
(-Ъ- @ 13.11.2010 00:06) Понимать там нечего... Расчет на кратковременную инкубацию (не более 5 мин) и многократный избыток праймеров по сравнению с ссПЦР продуктом. Но соли, буфер... Ну и какой смысл вообще в такой очистке? Отчего при этом очистится сиквенсовая реакция? Куда денутся при этом меченые нуклеотиды... |
|
Rafik |
23.11.2010 06:52
естественно и нуклеаза и щелочная фосфатаза должны инактивироваться при прогревании 80'С -15 минут если вы используете правильные ферменты |
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
27.06.2011 11:53
|
|
sergeyrgmu Постоянный участник |
27.06.2011 11:55
|
|
Noom Постоянный участник |
28.06.2011 14:07
|
|
Guest IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2 гость |
 07.09.2011 11:54
|
|
watchesbiz Постоянный участник |
23.11.2021 15:42
|
| « Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |
 |
· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Powered by Invision Power Board(Trial) v2.0.0 © 2024 IPS, Inc.