Дорогие коллеги, помогите, пожалуйста, разобраться.

Я пытаюсь экспрессировать белок (полимераза вируса герпеса) в эукариотических клетках (HEK, HELA). После серии трансфекций (dNotion) и последующих вестернов, на которых белок не обнаружился, стало понятно, что что-то не так и я сделала котрансфекцию с pE-GFP и RT-PCR (следовало, конечно, сделать это раньше, но я в таких делах пока не опытна). Оказалось, что трансфекция идёт нормально, но мРНК в клетках нет. С контролями вестерна и RT-PCR всё в порядке. Отсюда вопросы:

1. Что может быть причиной отсутствия транскрипции и как эту причину победить?
2. Является ли котрансфекция с pE-GFP достаточным контролем и не нужно ли загнать GFP в мой вектор (pcDNA4) или даже в мой вектор с моим  геном, чтобы убедиться что трансфекция действительно идёт?

Спасибо.

  Что за вектор, вы в нем уверены? С ним до вас кто-нибудь работал? А то может там просто склонировано не в рамке.